孔 穎 藺淑梅 王維娟 古艷麗 張 曦 葉 峰 楊雪亮

研究顯示，直徑<5cm的肝癌經(jīng)過手術(shù)治療可使5年生存率達(dá)到75%[1]。仍有30%～40%肝癌患者表現(xiàn)為AFP陰性[2]。近年來，研究者們發(fā)現(xiàn)了一種新型蛋白，即高爾基體蛋白 73（Golgi protein 73，GP73）與肝癌關(guān)系密切[3，4]。我們通過對肝癌、肝硬化、肝衰竭患者及健康人血清GP73水平測定，以初步評價GP73對診斷肝癌的價值。

資料與方法

一、研究對象 2010年5月至2010年11月在我院感染性疾病科和肝膽外科住院的HBV感染患者200例，男151例，女49例，平均年齡48.7±10.9歲。原發(fā)性肝癌診斷符合中國抗癌協(xié)會專業(yè)委員會2001年在廣州通過的《原發(fā)性肝癌的臨床診斷與分期標(biāo)準(zhǔn)》[5]，慢性肝衰竭及肝硬化患者的診斷標(biāo)準(zhǔn)參照2000年中華醫(yī)學(xué)會傳染病與寄生蟲病學(xué)分會和肝病學(xué)分會修訂的《病毒性肝炎防治方案》[6]，其中原發(fā)性肝癌107例，病毒性肝炎肝硬化53例和慢性乙型肝炎肝衰竭40例。另選健康人34例。

二、血清GP73測定 采用 ELISA法檢測，試劑盒由中科院廣州生物醫(yī)藥與健康研究院病毒免疫研究室提供。

三、AFP及生化指標(biāo)測定 采用Cobas601電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀檢測血清AFP，采用全自動生化分析儀檢測生化指標(biāo)。

四、統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析并繪制ROC曲線，采用ROC曲線尋找血清GP73診斷肝癌的最佳截斷點（cut-off value）。多組間比較采用Kruskal-Wallis H檢驗，兩個獨立組間比較使用Mann-Whitney U檢驗，設(shè)定P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

結(jié)果

一、各組血清GP73和AFP水平比較 所有患者血清均可測出GP73，原發(fā)性肝癌、肝硬化和慢性肝衰竭患者血清GP73水平分別為123.5±22.4ng/ml、108.9±30.3ng/ml和 130.3±45.6ng/ml，均顯著高于健康對照人群（44.1±38.9ng/ml，P<0.05）；原發(fā)性肝癌、肝硬化和慢性肝衰竭患者血清AFP水平分別為236.6±205.3ng/ml、5.3±5.56ng/ml和 53.9±40.40ng/ml。

二、GP73與AFP診斷原發(fā)性肝癌的效能比較通過繪制血清GP73與血清AFP的ROC曲線，比較兩者診斷原發(fā)性肝癌的靈敏度和特異度（圖1）。依據(jù)約登指數(shù)（Youden’S index）法確定本次實驗血清GP73的最佳截斷點為77.4ng/ml，其診斷原發(fā)性肝癌的靈敏度為89.6%，特異度為100%，約登指數(shù)為0.896，曲線下面積為0.986；取AFP的最佳截斷點為35.4ng/ml，其診斷原發(fā)性肝癌的靈敏度為64.2%，特異度為100%，約登指數(shù)為0.642，曲線下面積為0.851（圖2）。GP73與AFP曲線下面積（AUC）差異有統(tǒng)計學(xué)意義（0.986對 0.851，P＜0.05）。

圖1 GP73與AFP診斷原發(fā)性肝癌的ROC曲線

圖2 GP73與AFP聯(lián)合診斷肝癌的ROC曲線

根據(jù)ROC曲線，設(shè)定血清GP73水平大于等于77.4ng/ml和血清AFP大于等于35.4ng/ml為診斷原發(fā)性肝癌的截斷點，其診斷肝癌的靈敏度為92.5%，特異度為100%，曲線下面積為0.99，并不比GP73或AFP單獨診斷肝癌時效能提高（圖3），可能與AFP的設(shè)定值太低有關(guān)。

圖3 GP73與AFP診斷肝癌的ROC曲線

三、GP73診斷小肝癌的價值 本組有11例患者經(jīng)過臨床和病理學(xué)診斷為小肝癌（腫瘤直徑≤3cm），以肝硬化為對照人群，取GP73等于123.4ng/ml為截斷點，其診斷小肝癌的靈敏度和特異度分別為54.5%和75%，曲線下面積為0.652。

四、不同條件下原發(fā)性肝癌患者血清GP73水平的分層比較 本組48例肝癌患者經(jīng)過病理學(xué)檢查確診，他們在不同臨床和病理學(xué)條件下血清GP73分層比較見表1。資料顯示原發(fā)性肝癌患者血清GP73水平在不同年齡、性別、Edmondson分級和結(jié)節(jié)數(shù)目多寡之間無顯著性相差，而在不同腫瘤大小、TNM分期和是否合并肝硬化方面均有顯著性差異（P＜0.05）。

表1 不同臨床病理條件下原發(fā)性肝癌患者血清GP73和 AFP水平（±s）比較

表1 不同臨床病理條件下原發(fā)性肝癌患者血清GP73和 AFP水平（±s）比較

①P<0.05

?

討論

原發(fā)性肝癌是一種惡性程度高，病程進(jìn)展快，死亡率很高的惡性腫瘤。早期發(fā)現(xiàn)并有效治療可以大大提高患者的生活質(zhì)量和生存期。血清AFP檢測對肝癌早期診斷的敏感性不是很高，因此，尋找理想的肝癌血清標(biāo)志物成為研究的熱點。

由于蛋白組學(xué)和基因組學(xué)的快速發(fā)展，學(xué)者們在研究中發(fā)現(xiàn)了一些可能成為新的肝癌診斷血清標(biāo)志物。GP73是一種高爾基體Ⅱ型跨膜蛋白，2000年由Kladny在成人巨細(xì)胞病毒性肝炎肝組織及血清中檢測到此種蛋白[3]，在正常肝臟中僅表達(dá)于膽管上皮細(xì)胞[5]，當(dāng)肝臟發(fā)生炎癥、纖維化和肝細(xì)胞癌變時，肝實質(zhì)細(xì)胞才表達(dá)并分泌GP73，說明GP73的表達(dá)與肝臟疾病相關(guān)[6，7]。近年來，多項臨床研究顯示[8～10]，GP73的表達(dá)與肝癌關(guān)系密切，在肝癌患者腫瘤組織中可檢測到GP73有極高的表達(dá)且表達(dá)水平與腫瘤細(xì)胞的惡性程度有很高的相關(guān)性[11]。

本研究應(yīng)用ROC曲線客觀地評價了GP73診斷肝癌的準(zhǔn)確性，將它用于肝癌的診斷時，其靈敏度優(yōu)于AFP，尤其在AFP陰性的肝癌患者中有較高的檢出率。因此，GP73可作為AFP陰性的肝癌患者的補(bǔ)充診斷指標(biāo)而應(yīng)用于臨床。

在本組107例肝癌患者中符合小肝癌診斷者11例，其血清AFP檢測均為陰性，經(jīng)手術(shù)切除病理學(xué)檢查確診。我們在11例小肝癌中均檢測有GP73表達(dá)，診斷靈敏度可達(dá)54.5%，特異度為75%。本實驗首次發(fā)現(xiàn)GP73在小肝癌的診斷方面較AFP靈敏。因此，在高危人群進(jìn)行GP73檢測，可以提高小肝癌的診斷率，為臨床早期診斷提供更好的參考價值。

我們研究發(fā)現(xiàn)，AFP診斷肝癌的靈敏度僅為49.1%，約有一半的肝癌患者表現(xiàn)為陰性，而在AFP陰性的肝癌患者中仍有84.6%患者GP73陽性，GP73有很高的靈敏度，因此可以彌補(bǔ)AFP靈敏度不高的缺陷，GP73聯(lián)合AFP診斷肝癌時可明顯提高診斷率，兩個指標(biāo)聯(lián)合診斷的效率明顯優(yōu)于單項指標(biāo)。腫瘤標(biāo)志物的聯(lián)合檢測在肝癌的定性診斷中可提高診斷的敏感性及特異性。該研究的確切結(jié)論尚需要進(jìn)一步大規(guī)模的臨床數(shù)據(jù)支持。

[1]Tang ZY，Yu YQ，Zhou XD.Hepatocellular carcinoma-cause，treatment and metastasis.World J Gastroenterol，2001，7（4）:445-447.

[2]Bruix J，Sherman M.Practice Guidelines Committee/American Association for the Study of Liver Diseases.Management of hepatocellular carcinoma.Hepatology，2005，42:1208-1236.

[3]Kladney RD，Bulla GA，Guo LS，et al.GP73，a novel Golgilocalized protein upregulated by viral infection.Gene，2010，249（2000）:53-65.

[4]Block TM，Marrero J，Gish RG，et al.The degree of readiness of selected biomarkers for the early detection of hepatocellular carcinoma:notes from a recent workshop.Cancer Biomark，2008，4（22）:19-33.

[5]中國抗癌協(xié)會肝癌專業(yè)委員會.原發(fā)性肝癌的臨床診斷與分期標(biāo)準(zhǔn). 中華肝臟病雜志，2001，9（6）:324-324.

[6]中華醫(yī)學(xué)會傳染病與寄生蟲病學(xué)分會/肝病學(xué)會.病毒性肝炎防治方案. 中華內(nèi)科雜志，2001，40（1）:62-68.

[7]Marrero JA，Romano PR，Nikolaeva O，et al.GP73，a resident Golgi glycoprotein，is a novel serum marker for hepatocelluar carcinoma.J Hepatol，2005，43（22）:1007-1012.

[8]Ⅰftikhar R，Kladney RD，Havlioglu N，et al.Disease and cellspecific expression of GP73 in human liver disease.Am J Gastroenterol，2004，99:1087-1095.

[9]Riener MO，Stenner F，Liewen H，et al.Alpha-fetoprotein and serum golgi phosphoprotein 2 are equally discriminative in detecting early hepatocellular carcinomas.Hepatology，2009，50:326.

[10]毛一雷，楊華瑜，許海峰，等.新的肝癌血清標(biāo)記物GP73在肝癌診斷中的初步研究.中華醫(yī)學(xué)雜志，2008，88:948-951.

[11]Mao YL，Yang HY，Xu HF，et al.Golgi pro t ein 73（GOLPH2）is a valuable serum marker for hepatocellular carcinoma.Gut，2010，59（12）:1687-1693.