許 磊，龔道新 ，劉 博，楊麗華，丁春霞，羅俊凱

(1湖南農業(yè)大學資源環(huán)境學院，長沙410128;2湖南城市學院土木工程學院，益陽413000;3湖南農業(yè)大學農業(yè)環(huán)境保護研究所，長沙410128)

稻瘟酰胺又名氰菌胺，是日本農藥株氏會社與巴斯夫公司于20世紀80年代共同開發(fā)的酰胺類殺菌劑，主要用于防治水稻稻瘟病。由于其不受環(huán)境和土壤影響，使用范圍廣，且使用方便。醚菌酯((E)-2-甲氧亞氨基－乙酸甲酯)是一種高效殺菌劑，對白粉病、梨黑星病等有較好的防效，具有廣泛的殺菌效應，還具有較好的保護治療機理，比一般殺菌劑的藥效長，具有較好的選擇性，對人、畜、作物及生物具有安全性，對生態(tài)環(huán)境基本沒有污染。

有關對稻瘟酰胺在水稻中殘留的測定，秦麗等［3］采用氣相色譜－電子捕獲檢測器，樣品分別采用乙腈、乙酸乙酯提取，中性氧化鋁和弗羅里硅土柱層析凈化，測得的平均回收率為78.6% ～108.4%，相對標準偏差(RSD)為3.5% ～23.4%。王雪莉［4］采用反相高效液相色譜法，以甲醇為溶劑，甲醇－水(65∶35，v/v)為流動相，ODS為填料和紫外檢測器分離測定稻瘟酰胺。李莉等［5］使用HP－5石英毛細管柱氣相色譜分析方法檢測稻瘟酰胺，標準偏差為0.223，變異系數為0.240%，回收率為98.96% ～100.87%，線性相關系數 R=0.999 6。P.Cabras等［6］用丙酮 － 正己烷(1∶1，v/v)提取，GCMS聯用測定嘧菌酯、氟啶胺、醚菌酯、滅派林、四氟醚唑等5種農藥在葡萄、葡萄汁和葡萄酒中的殘留量，其中醚菌酯最低檢出限為0.05 mg/kg。Michal Kirchnera等［7］使用0.15 mm內徑窄口徑毛細管柱為色譜柱，GC-MS測定毒死蜱、醚菌酯和氯氰菊酯等多種農藥。吳憲等［8］用丙酮超聲提取，固相柱凈化，GC-NPD法檢測黃瓜中的醚菌酯殘留量，最小檢出量為9×10－12g。王素利等［9］建立了以磷酸三苯酯為內標物的醚菌酯原藥樣品氣相色譜定量分析方法。筆者利用稻瘟酰胺和醚菌酯易溶于有機溶劑的特點，同時提取和凈化稻田中殘留的稻瘟酰胺和醚菌酯，并運用氣相色譜儀，進行分離與檢測，經過條件優(yōu)化后獲得了較好的效果。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

主要儀器有7890A型氣相色譜儀(Agilent Technologies，帶ECD－Ni63)、HP－5石英彈性毛細管柱(5%Phenyl Methyl Siloxane，30.0 m ×360 μm ×0.25 μm);SHY－2AS型水浴恒溫振蕩器、TP－220A型電子天平、SHZ－D(Ⅲ)型循環(huán)水式真空泵、RE－2000A型旋轉濃縮儀等。

主要試劑有:二氯甲烷、乙酸乙酯、丙酮、正己烷、無水硫酸鈉、氯化鈉等。弗羅里硅土(Florisil 60-100mesh，美國ACROS ORGANICS生產)，使用前在馬弗爐(650℃)中烘3～5 h，待其冷卻后用2%的蒸餾水脫活，并保存在130℃的烘箱中，待用。

稻瘟酰胺標準品(純度為94.0%)和醚菌酯標準品(純度為98.3%)，均由山東京博農化科技股份有限公司提供。

1.2 方法

1.2.1 制備稻田水樣

準確量取稻田水100.0 mL，倒入250 mL分液漏斗中，并加入10%氯化鈉溶液20 mL，用30、30、20 mL二氯甲烷萃取3次，合并萃取液，在40℃的旋轉蒸發(fā)儀上濃縮近干，用乙酸乙酯定容至5.0 mL，用于氣相色譜檢測。

1.2.2 制備土壤及植株樣品

使用電子天平準確稱取稻田土壤20.0 g，倒入250 mL具塞三角瓶中，并加入80 mL丙酮與水的混合液(9∶1，v/v)，在水浴恒溫振蕩器中振蕩30 min，減壓抽濾并用30、30 mL丙酮洗滌殘渣和抽濾瓶2次，合并濾液倒入250 mL具塞三角瓶中，在40℃的旋轉蒸發(fā)儀上濃縮至10 mL左右;將濃縮液轉入(用二氯甲烷洗滌3次以上)盛有20 mL飽和氯化鈉溶液的250 mL分液漏斗中，用30、30、20 mL的二氯甲烷將其萃取3次，合并萃取液，在40℃的旋轉蒸發(fā)儀上濃縮近干，再用少量的正己烷溶解，待弗羅里硅土凈化。

稱取植株10.0 g，樣品的制備與土壤一致。

1.2.3 氣相色譜條件

載氣:氮氣(純度 99.999%)，載氣流速3 mL/min，尾吹氣流速 20 mL/min，氣化室溫度250℃，檢測室溫度300℃ ，柱溫100℃，保持2 min，20℃/min程序升溫至 200℃，保持 2 min，5℃/min程序升溫至220℃，保持2 min，進樣量1 μL。

2 結果與分析

2.1 提取和凈化條件的選擇

采用二氯甲烷萃取稻田水時，能夠獲得90%以上回收率，且去除雜質效果較理想。

分別采用乙腈、丙酮、丙酮－乙腈(1∶1，v/v)混合液、丙酮 －水(1∶1，v/v)、丙酮 － 水(4∶1，v/v)混合液、丙酮－水(9∶1，v/v)混合液作為土壤及植株的提取溶劑，發(fā)現前3種提取液均能滿足稻瘟酰胺和醚菌酯的添加回收率達90%以上，但均有較明顯的雜質峰干擾檢測;而用丙酮－水(9∶1，v/v)混合液提取時，稻瘟酰胺和醚菌酯提取率均達到90%以上，且比較穩(wěn)定，受雜質峰干擾最小，故選用丙酮－水(9∶1，v/v)混合液作為稻田土壤樣品及水稻植株樣品的提取劑。

使用二氯甲烷與10%氯化鈉溶液，液－液萃取稻田土壤樣品和植株樣品，可以有效地去除水中的雜質和色素，并能夠防止水中乳化層的形成。使用丙酮和正己烷的混合溶液(5∶95，v/v)對凈化柱進行淋洗，可以使色素和其他雜質較好地被吸附，結果表明，用60 mL的丙酮和正己烷的混合淋洗液能將98%以上的稻瘟酰胺和醚菌酯洗脫。

2.2 氣相色譜條件的選擇

使用極弱性的HP－5石英彈性毛細管柱對稻瘟酰胺和醚菌酯進行分離，ECD測定取得了較高的靈敏度和較好的分離效果。在不同的程序升溫條件下對稻瘟酰胺和醚菌酯進行試驗，結果表明，柱溫起始溫度為100℃，以20℃/min程序升溫至200℃時，能最大限度地縮短出峰時間，并能較好地減少雜質峰的干擾;200℃的柱溫，以5℃/min升溫至220℃時的分離度最好。在確定較適柱溫基礎上，從1 mL/min到8 mL/min之間改變載氣流速，結果表明，當載氣流速為3 mL/min時柱效最高。

2.3 方法的線性關系

準確稱取稻瘟酰胺和醚菌酯標準品，用乙酸乙酯分別配制成質量濃度為 0.01、0.02、0.05、0.10、0.50、1.00、2.00 mg/L的稻瘟酰胺和醚菌酯的標準混合溶液，進行氣相色譜分析。以峰面積Y和標準混合液的質量濃度x作標準曲線，獲得稻瘟酰胺和醚菌酯的標準工作曲線分別為Y=183 227x+3 815.9(R2=0.998 7);Y=58 746x－701.26(R2=0.998 8)，表明在0.01～2.00 mg/L，稻瘟酰胺和醚菌酯混合液的質量濃度和峰面積呈良好線性關系。

圖1 稻瘟酰胺和醚菌酯標準混合溶液的氣相色譜圖

2.4 方法的靈敏度、準確度與精密度

在選定的條件下，稻瘟酰胺和醚菌酯的最小檢出量為10 pg，在稻田水、土壤和水稻植株中的最低檢出限均為0.01 mg/kg(或mg/L)。

在稻田水、土壤和植株的空白樣品中，分別添加稻瘟酰胺和醚菌酯的標準混合溶液，使樣品中農藥含量分別為 0.05、0.50、1.00 mg/kg(或 mg/L)，每個重復5次，回收率試驗結果見表1。稻瘟酰胺和醚菌酯在稻田水、稻田土壤和植株中的平均回收率為91.0% ～106.7%，其相對標準偏差為2.3% ～12.3%，均在農藥殘留試驗準則允許范圍內。在不同樣品中測定稻瘟酰胺和醚菌酯的色譜圖見圖2。

表1 稻瘟酰胺和醚菌酯的加標回收率及其相對標準偏差

圖2 稻田樣品中稻瘟酰胺和醚菌酯的氣相色譜圖

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