廖曉嘉 陳君銳 周燕雙

跌打藥酒是我公司優(yōu)良產(chǎn)品之一，收載于衛(wèi)生部《藥品標準》中藥成方制劑第九冊，由當歸、川芎、赤芍、牡丹皮、劉寄奴、三棱、土鱉蟲、三七、紅花、澤瀉、澤蘭、桃仁、莪術(shù)等組成的中藥復(fù)方制劑，具有活血散瘀，消腫止痛作用。臨床上主要用于跌打損傷，筋骨酸痛［1］。原質(zhì)量標準中只有常規(guī)的乙醇量檢驗，現(xiàn)我們對原質(zhì)量標準進行定性與定量方法的研究，能更好的對跌打藥酒進行質(zhì)量監(jiān)控。

1 實驗儀器和藥品

CMAG REPROSTARⅡ型號成像系統(tǒng);Sartorius-CPA225D型號的電子天秤;Agilent1200高效液相色譜儀(DAD檢測器);KQ-500DE型超聲波清洗器;Agilent-C18 ODS(250 mm×4.6 mm×5 m)色譜柱;硅膠G板(青島海洋化工研究所生產(chǎn));甲醇為Merck KGaA色譜純;其余試劑均為分析純;當歸對照藥材(批號：120927-201014)、川芎對照藥材(批號：120918-200809)、芍藥苷對照品(批號：110736-201035)、丹皮酚對照品(批號：110708-200505)，均購于中國藥品生物制品檢定所;跌打藥酒供試品和缺當歸和川芎、赤芍、牡丹皮陰性對照供試品，由廣州王老吉藥業(yè)股份有限公司提供。

2 實驗方法與結(jié)果

2.1 川芎和當歸的薄層色譜鑒別 取供試品和缺川芎、當歸陰性樣品，分別作為供試品溶液和陰性對照溶液。另取川芎、當歸對照藥材各1.0 g，分別加石油醚(30～60℃)25 ml，超聲處理15 min，濾過，濾液自然揮干，殘渣加甲醇1ml溶解，分別制成川芎、當歸對照藥材溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄VI B)試驗，吸取上述溶液各6μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-乙酸乙酯(8∶2)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。陰性對照溶液在相應(yīng)位置上未見相同斑點［2］。結(jié)果見圖 1。

圖1 川芎和當歸薄層色譜圖

2.2 赤芍的薄層色譜鑒別 取供試品和缺赤芍陰性對照樣品各30 ml，分別置水浴上蒸干，殘渣加水30 ml溶解，用水飽和的正丁醇提取2次，每次30 ml，合并正丁醇提取液，用水洗滌2次，每次20 ml，正丁醇液蒸干，殘渣加甲醇5ml溶解，加在中性氧化鋁柱(100～200目，5 g，內(nèi)徑1.5 cm)上，用甲醇40 ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加乙醇1ml使溶解，作為供試品溶液。另取芍藥苷對照品，加乙醇制成每1 ml含1 mg的溶液。照薄層色譜法(附錄VI B)試驗，吸取上述兩種溶液各4 μl，分別條帶狀點于同一硅膠G薄層板上，以二氯甲烷－甲醇－水(30∶8∶0.5)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。陰性對照溶液在相應(yīng)位置上未見相同斑點。結(jié)果見圖2。

圖2 赤芍薄層色譜圖

2.3 牡丹皮藥材含量測定

2.3.1 選擇丹皮酚的檢測波長 配制丹皮酚對照品溶液及缺牡丹皮的跌打藥酒陰性對照溶液，在Agilent1200高效液相色譜儀(DAD檢測器)下，200～400nm波長范圍內(nèi)進行光譜掃描。掃描得：丹皮酚對照品溶液在274nm處有較強的吸收波長，缺牡丹皮的跌打藥酒陰性對照溶液，在274nm處無吸收波長。故選擇274 nm為丹皮酚檢測波長，結(jié)果見圖3～4。

圖3 丹皮酚光譜圖

圖4 跌打藥酒(缺牡丹皮)陰性光譜圖

2.3.2 色譜分析條件 色譜柱：Agilent-C18 ODS(250 mm×4.6 mm ×5 m);流動相：甲醇-水(45∶55);檢測波長;274nm;進樣量：10 μl。理論板數(shù)按丹皮酚峰計算應(yīng)不低于 4000［3］。

2.3.3 供試品溶液制備

2.3.3.1 對照品溶液的制備 取丹皮酚對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml含20 μg的溶液，即得。

2.3.3.2 供試品溶液的制備 取跌打藥酒30 ml，精密量取，蒸干，殘渣加乙醇溶解并定容至10 ml，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，即得［4］。

2.3.3.3 陰性對照品溶液的制備 取缺牡丹皮藥材的跌打藥酒30ml，同法制成缺牡丹皮的陰性對照溶液。

2.3.4 考察供試品的專屬性：按以上的色譜條件，對丹皮酚對照品溶液、供試品溶液、缺牡丹皮的陰性對照溶液，進行液相色譜進樣分析，結(jié)果陰性對照無干擾。結(jié)果見圖5～7。

2.3.5 考察線性關(guān)系 取丹皮酚對照品適量，精密稱定，加甲醇配制成每 1ml含丹皮酚 2.5272、5.0544、10.1089、20.2178、40.4356、80.8712、160.1742 g 的溶液。分別吸取10 μl，進行液相色譜分析，計算回歸方程為：Y=63.152x－34.43，R=0.9999.說明丹皮酚在2.5272～160.1742 g呈線性關(guān)系。

2.3.6 精密度試驗 精密吸取對照品溶液10 μl，按上述色譜條件進行連續(xù)進樣5次，測得丹皮酚峰面積，并計算峰面積的RSD=0.66%。

圖5 丹皮酚對照品色譜圖

圖6 供試品溶液色譜圖

圖7 缺牡丹皮陰性對照溶液色譜圖

2.3.7 穩(wěn)定性試驗 精密吸取供試品溶液10 μl，按上述色譜條件進行分析，分別在0、4、8、16、24 h進行測定，計算含量，相對標準偏差，RSD=1.55%。供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.3.8 供試品的重復(fù)性試驗 取樣品6份(同一批號)，按上述方法制備供試品溶液，同時按上述色譜條件進行測定，并計算含量。RSD=0.62%。

2.3.9 測定加樣回收率 取已知含量的跌打藥酒6份各30 ml，精密量取，在加入相應(yīng)量的丹皮酚對照品溶液，按上述制定的方法進行測定與分析，得丹皮酚的含量，計算加樣回收率，回收率為98.44%，RSD=1.22%，結(jié)果見表1。

表1 跌打藥酒加樣回收率測定結(jié)果

2.2.10 供試品測定 按上述的制備方法及色譜條件對跌打藥酒三批進行測定分析與計算，結(jié)果見表2。

表2 樣品測定結(jié)果

3 討論

3.1 牡丹皮藥材是該制劑中主要成份之一，具有清熱涼血、活血化瘀作用，而牡丹皮的主要含量為丹皮酚。故選擇它進行高效液相色譜法的定量分析。從而監(jiān)控該制劑的質(zhì)量。

3.2 增加當歸、川芎、赤芍藥材進行薄層色譜的定型鑒別，這樣更全面的控制跌打藥酒的質(zhì)量。

［1］ 中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標準－中藥成方制劑(第19冊)，1998.226．

［2］ 國家藥典委員會．中國藥典(2005年版)．一部．北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005，233，附錄Ⅵ B，Ⅵ D

［3］ 李萍，丹皮酚片劑中丹皮酚含量的測定，中國醫(yī)藥指南，2008，18(6)：18，28．

［4］ 周燕雙，黃惠蓮，跌打傷科酒質(zhì)量標準分析與研究，中國現(xiàn)代藥物應(yīng)用，2012，01(6)：1-2．