孫勤國(guó) 呂 琨

1武漢市第三醫(yī)院中醫(yī)科，武漢 430060

2湖北中醫(yī)藥大學(xué)，武漢 430065

動(dòng)脈粥樣硬化（atherosclerosis，AS）是一組稱為動(dòng)脈硬化的血管病中最常見、最重要的一種，其特點(diǎn)是動(dòng)脈管壁增厚變硬、失去彈性和管腔縮小[1]。在AS病理機(jī)制的認(rèn)識(shí)上，1999年Ross[2]在內(nèi)皮損傷反應(yīng)學(xué)說基礎(chǔ)上提出，AS是一種炎癥性疾病。炎癥反應(yīng)貫穿于AS起始、病變進(jìn)展、斑塊破裂及血栓形成的全過程[3]。因此，針對(duì)炎癥機(jī)制有望尋找到抗動(dòng)脈硬化的新靶點(diǎn)與治療手段[4]。本實(shí)驗(yàn)通過高脂飼料喂養(yǎng)聯(lián)合腹腔注射維生素D3建立AS大鼠模型，觀察小陷胸湯對(duì)AS大鼠主動(dòng)脈病理形態(tài)學(xué)、炎性因子及主動(dòng)脈內(nèi)膜厚度的影響，探討其抗AS的可能機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物

健康SPF級(jí)雄性Wistar大鼠60只，體重（210±20）g，由華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào)：0018633，飼養(yǎng)于安靜、潔凈、避強(qiáng)光的環(huán)境中，室溫（20±5）℃，相對(duì)濕度40%～60%。

1.2 藥物與試劑

小陷胸湯出自《傷寒論》，由黃連6g，半夏12g，栝樓實(shí)30g組成。以上藥材均由本院中藥房提供，中藥炮制室用傳統(tǒng)方法浸泡，煎煮，過濾，濃縮，制成煎劑，其中小、中、大劑量每毫升含生藥分別為0.21、0.42、0.84g，真空包裝，低溫冷藏備用。阿托伐他?。⑵胀祝?0mg／片，購(gòu)自美國(guó)輝瑞制藥有限公司（批號(hào)：J20030047）。維生素D3注射液購(gòu)自上海通用藥業(yè)股份有限公司（批號(hào)：H31021404）。大鼠白介素－6（IL－6）、氧化型低密度脂蛋白（ox－LDL）、血管細(xì)胞黏附分子－1（VCAM－1）的ELISA試劑盒購(gòu)自上海瑞齊生物科技公司。急性期反應(yīng)蛋白（CRP）試劑盒購(gòu)自上海科華生物工程股份有限公司。

1.3 動(dòng)物分組及造模

適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，采用隨機(jī)數(shù)字表法將大鼠隨機(jī)分成6組：正常組、模型組、阿托伐他汀組及小陷胸湯低、中、高劑量組，每組10只。正常組進(jìn)食基礎(chǔ)飼料（53.0%碳水化合物、9.0%脂肪、21.0%蛋白質(zhì)）。其余各組在喂食高脂飼料（3.0%膽固醇、0.2%丙基硫氧嘧啶、0.5%膽酸鈉、10.0%豬油、5.0%白糖、81.3%基礎(chǔ)飼料）的同時(shí)，在進(jìn)食高脂飼料第1天，一次性腹腔注射維生素D360萬IU／kg[3]，正常組注射同等體積的生理鹽水。

造模第3周開始，根據(jù)人與大鼠體表面積換算法，小陷胸湯低、中、高劑量組大鼠分別灌胃小陷胸湯小劑量、中劑量、大劑量煎劑（按2ml／200g計(jì)算），1次／d。阿托伐他汀組給予阿托伐他汀5mg／kg水溶液灌胃，1次／d。正常組及模型組則分別灌服等容積的生理鹽水。各組均連續(xù)灌胃12周。

1.4 血清學(xué)檢測(cè)指標(biāo)

末次給藥后，隔夜禁食12h，腹主動(dòng)脈采血，3 000 r／min離心10min，分離血清。采用ELISA法檢測(cè)血清IL－6、ox－LDL、VCAM－1濃度，采用免疫比濁法測(cè)定血清CRP水平。

1.5 動(dòng)脈內(nèi)膜厚度的測(cè)定

取3.0cm左右長(zhǎng)的主動(dòng)脈血管，剝離外膜附著組織，制作冰凍切片，然后進(jìn)行油紅O染色，步驟如下：將冷凍切片常溫干燥25min后，60%異丙醇浸洗10min，油紅O染液染色10min，用60%異丙醇漂洗除去多余染料，Mayer蘇木精復(fù)染1min，自來水藍(lán)化1～3min，蒸餾水洗，濾紙吸干水分，甘油明膠封片。光鏡下觀察其病理形態(tài)，組織細(xì)胞中脂滴呈橘紅色，核呈藍(lán)色。應(yīng)用計(jì)算機(jī)圖像分析系統(tǒng)（motic images advanced 3.0圖像分析軟件）測(cè)主動(dòng)脈內(nèi)膜厚度，每片隨機(jī)取3個(gè)視野，取其平均值。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料以±s表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠血清炎性因子水平

與正常組比較，模型組大鼠血清IL－6、ox－LDL、VCAM－1、CRP水平明顯升高（P＜0.01）；與模型組比較，小陷胸湯各劑量組及阿托伐他汀組大鼠血清IL－6、ox－LDL、VCAM－1、CRP 水平明顯降低（P＜0.01）。見表1。

表1 各組大鼠血清炎性因子水平的比較（n＝10，±s）

表1 各組大鼠血清炎性因子水平的比較（n＝10，±s）

與正常組比較＊＊P＜0.01；與模型組比較△△P＜0.01

組別 IL－6（ng／L） ox－LDL（mmol／L） VCAM－1（pg／ml） CRP（mg／L）96.25±13.65 4.38±1.47 0.78±1.91 0.50±0.67模型組 406.46±23.15＊＊ 17.84±3.38＊＊ 5.67±3.03＊＊ 4.52±0.18＊＊小陷胸湯低劑量組 253.75±16.45△△ 9.85±2.41△△ 2.13±2.05△△ 1.84±0.41△△小陷胸湯中劑量組 158.75±15.97△△ 9.65±1.45△△ 1.65±1.76△△ 0.77±0.73△△小陷胸湯高劑量組 161.46±18.55△△ 10.12±2.07△△ 1.84±2.26△△ 1.76±0.77△△阿托伐他汀組 325.21±20.36△△ 15.74±2.31△△ 3.71±2.54△△ 2.45±0.21正常組△△

2.2 各組大鼠主動(dòng)脈內(nèi)膜厚度

與正常組比較，模型組內(nèi)膜厚度顯著增加（P＜0.01）；與模型組比較，各治療組內(nèi)膜厚度明顯降低（P＜0.05，P＜0.01）。見表2。

2.3 各組大鼠主動(dòng)脈病理形態(tài)學(xué)

正常組大鼠主動(dòng)脈內(nèi)膜表面光滑，內(nèi)膜無脂質(zhì)沉積，未見異常改變；模型組大鼠主動(dòng)脈內(nèi)膜明顯增厚，可見大量紅色脂質(zhì)沉積，油紅O染色陽性區(qū)呈片狀；各治療組大鼠血管腔內(nèi)亦可見紅色脂質(zhì)沉積，但較對(duì)照組呈不同程度減輕。見圖1。

表2 各組大鼠主動(dòng)脈內(nèi)膜厚度的比較（n＝10，mm，±s）

表2 各組大鼠主動(dòng)脈內(nèi)膜厚度的比較（n＝10，mm，±s）

與正常組比較＊＊P＜0.01；與模型組比較△P＜0.05，△△P＜0.01

1.77±0.43模型組 18.18±2.23＊＊小陷胸湯低劑量組 14.79±1.93△小陷胸湯中劑量組 6.21±1.35△△小陷胸湯高劑量組 8.98±0.65△△阿托伐他汀組 3.78±0.66組別 主動(dòng)脈內(nèi)膜厚度正常組△△

圖1 各組大鼠主動(dòng)脈病理形態(tài)學(xué)（油紅O染色，×400）

3 討論

AS主要累及大中動(dòng)脈，其基本病變是在動(dòng)脈內(nèi)膜形成粥樣斑塊，使動(dòng)脈壁變硬，管腔狹窄，從而引起一系列繼發(fā)性病變[1]，因其常并發(fā)心、腦血管意外事件而占疾病病死率的首位。越來越多的研究[5－10]表明，AS是一種慢性、亞臨床的炎癥性疾病，疾病的發(fā)生進(jìn)展都和炎癥相關(guān)，與炎癥反應(yīng)相關(guān)的IL－6、ox－LDL、VCAM－1、CRP在AS的形成和發(fā)展中起到重要作用。

小陷胸湯由黃連、半夏、栝蔞實(shí)三味藥組成，方出《傷寒論》，具有清熱化痰，消痞散結(jié)之功效，臨床上該方加減后廣泛用于心血管類疾病的治療。左建國(guó)[11]用加味小陷胸湯聯(lián)合辛伐他汀治療高脂血癥42例，結(jié)果總有效率為95.2%。劉遠(yuǎn)婷等[12]用小陷胸湯聯(lián)合丹參飲治療痰瘀閉阻型冠心病心絞痛患者30例，取得了較好療效。李景君等[13]用加味小陷胸湯治療不穩(wěn)定型心絞痛，選擇符合診斷標(biāo)準(zhǔn)的不穩(wěn)定型心絞痛患者30例，結(jié)果總有效率90.0%。

本研究采用高脂飼料配合維生素D3腹腔注射，復(fù)制AS大鼠模型，可觀察到脂質(zhì)斑塊形成，主動(dòng)脈內(nèi)膜明顯增厚。該方法價(jià)格低廉，且能快速建立AS模型，是目前研究AS應(yīng)用最為廣泛的模型建立方法之一[14]。本研究發(fā)現(xiàn)，模型組血清 IL－6、ox－LDL、VCAM－1、CRP水平明顯高于正常組，提示上述炎性介質(zhì)與AS的形成密切相關(guān)，與目前眾多研究結(jié)果是一致的[15－17]。經(jīng)小陷胸湯灌胃12周后，大鼠血清IL－6、ox－LDL、VCAM－1、CRP水平明顯降低，主動(dòng)脈內(nèi)膜厚度減小，其中小陷胸湯中劑量組效果更明顯。

綜上所述，小陷胸湯可降低AS大鼠血清炎性因子水平，抑制內(nèi)膜厚度的增加，這可能是小陷胸湯抗AS的機(jī)制之一。

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