黃 山 黃 帆 遇呈祥 晏錚劍 鄧忠良 (重慶醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院骨科，重慶 400010)

骨肉瘤在老年人病變中的特點(diǎn)與青少年不同，可能與老年人伴有退行性改變及骨質(zhì)疏松有關(guān)，因此骨肉瘤病變進(jìn)展時(shí)體內(nèi)的蛋白表達(dá)亦可能有差別。骨肉瘤病變進(jìn)展時(shí)體內(nèi)多種蛋白異常表達(dá)，尤其與原癌基因的激活和抑癌基因的失活有關(guān)。WTX基因是一種抑癌基因，由于X染色體定位的特殊性，因此抑癌的特異性強(qiáng)〔1〕。PTEN是抑癌基因，可以明顯抑制腫瘤增殖及浸潤。血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)是血管內(nèi)皮細(xì)胞生成的促進(jìn)因子，可以介導(dǎo)腫瘤血管新生，并對腫瘤進(jìn)展有重要促進(jìn)作用。近來也有研究顯示VEGF是一種重要的癌基因〔2〕。本文關(guān)注VEGF、WTX和PTEN在老年骨肉瘤患者組織中的表達(dá)，關(guān)注其相關(guān)性及在不同臨床特征中的表達(dá)差別。

1 材料與方法

1.1 臨床資料 2011年1月至2011年12月我院確診為骨肉瘤的老年患者作為觀察組，共62例，男32例，女30例，年齡60～78(平均67.6)歲。均經(jīng)病理學(xué)主治醫(yī)師確診，并按WHO中關(guān)于骨腫瘤的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分類。選擇同期在我院行骨樣骨瘤切除的老年人術(shù)后組織40例作為對照組，男20例，女20例，年齡60～77(平均67.9)歲。兩組在一般臨床特征的比較中，差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

1.2 VEGF、WTX和PTEN蛋白檢測 VEGF、WTX和PTEN蛋白均購自武漢博士德生物技術(shù)公司，三種蛋白的檢測應(yīng)用免疫組化SP法，常規(guī)組織取材并經(jīng)脫鈣后進(jìn)行檢測，應(yīng)用DAB進(jìn)行顯色，均由同一病理技師操作，減少人為誤差，嚴(yán)格質(zhì)量控制。

1.3 結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn) VEGF、WTX和PTEN蛋白均以細(xì)胞質(zhì)中出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性，隨機(jī)選擇10個(gè)高倍視野，計(jì)數(shù)陽性細(xì)胞的百分率，以陽性細(xì)胞的百分率≥25%為陽性，以陽性細(xì)胞的百分率＜25%為陰性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SAS6.12軟件進(jìn)行χ2檢驗(yàn)及相關(guān)分析。

2 結(jié)果

2.1 VEGF、WTX和PTEN在觀察組與對照組中表達(dá)的比較VEGF在觀察組中表達(dá)的陽性率明顯高于對照組，WTX和PTEN在觀察組中表達(dá)的陽性率明顯低于對照組(P＜0.000 1)。見表1。

2.2 觀察組中VEGF、WTX和PTEN的表達(dá)在不同臨床病理特征中的關(guān)系 觀察組中VEGF、WTX和PTEN蛋白表達(dá)的陽性率與腫瘤的轉(zhuǎn)移、最大直徑、脈管浸潤、臨床分期及Ki67的表達(dá)密切相關(guān)。見表2。

2.3 觀察組中VEGF、WTX和PTEN表達(dá)的相關(guān)性分析 觀察組中VEGF和WTX(r=-0.43，P=0.011 3)、VEGF和PTEN(r=-0.48，P=0.028 7)的表達(dá)具有負(fù)相關(guān)性，而 WTX和PTEN(r=0.40，P=0.034 1)的表達(dá)具有正相關(guān)性。

表1 VEGF、WTX和PTEN在觀察組與對照組中陽性表達(dá)的比較［n(%)］

表2 觀察組中VEGF、WTX和PTEN的陽性表達(dá)在不同臨床病理特征中的關(guān)系〔n(%)〕

3 討論

骨肉瘤在病變進(jìn)展中出現(xiàn)蛋白表達(dá)的失常，尤其是癌基因和抑癌基因的失調(diào)有重要意義。VEGF是血管內(nèi)皮細(xì)胞生成的促進(jìn)因子，高表達(dá)于多種惡性腫瘤，且腫瘤惡性程度越高，其表達(dá)越高，因此其起作用的方式與癌基因相似。VEGF對血管生成的促進(jìn)作用表現(xiàn)為多種方面，主要是對基質(zhì)中CD34、CD31、CD105陽性的血管〔3〕，腫瘤間質(zhì)血管生成多，使腫瘤的營養(yǎng)豐富，氧供豐富，腫瘤生成和代謝快，侵襲能力增加，轉(zhuǎn)移潛能增強(qiáng)〔4〕。PTEN是由多功能磷酸酶編碼的腫瘤抑制基因，不僅具有磷酸酯酶的活性，還具有多種腫瘤生物學(xué)的作用特征。PTEN的C端尾部含有富含絲/蘇氨酸殘基的PEST序列和一個(gè)PDZ結(jié)合區(qū)域，如果這個(gè)區(qū)域出現(xiàn)明顯的突變則可以逆轉(zhuǎn)抑癌基因的特點(diǎn)，進(jìn)而影響突變體的穩(wěn)定性和磷酸酯酶的活性，分子結(jié)構(gòu)也將發(fā)生明顯的變化〔5〕。但是PTEN也與其他的磷酸酯酶不完全相同，主要是PTEN沒有調(diào)節(jié)的亞基，因此其表達(dá)及協(xié)同性具有特異性，PTEN也因此種結(jié)構(gòu)的特點(diǎn)倍受學(xué)者的廣泛關(guān)注〔6〕。研究顯示W(wǎng)TX蛋白能夠與APC、AXIN1和Keap1等形成復(fù)合物，并且能與細(xì)胞質(zhì)中的β-catenin結(jié)合而使其降解，進(jìn)而抑制信號轉(zhuǎn)導(dǎo)〔7，8〕。WTX可以通過與WT1結(jié)合來促進(jìn)WT1介導(dǎo)的內(nèi)源性靶基因雙調(diào)蛋白的轉(zhuǎn)錄，進(jìn)而在細(xì)胞分化的核轉(zhuǎn)錄調(diào)控通路中發(fā)揮作用〔9〕。

本實(shí)驗(yàn)提示VEGF高表達(dá)、WTX和PTEN低表達(dá)促進(jìn)腫瘤的發(fā)生，此機(jī)制與VEGF作為癌基因的作用相同，與WTX和PTEN作為抑癌基因的作用相同。WTX基因在腎母細(xì)胞瘤中異常表達(dá)率明顯增高，而在白血病、肝細(xì)胞癌、胃癌、結(jié)直腸癌等腫瘤中異常表達(dá)率明顯降低〔1〕，骨肉瘤是WTX表達(dá)異常的重要腫瘤之一，其低表達(dá)時(shí)對骨肉瘤發(fā)生具有獨(dú)特的生物學(xué)作用。本實(shí)驗(yàn)提示VEGF、WTX和PTEN參與了腫瘤的進(jìn)展，主要是當(dāng)VEGF、WTX和PTEN異常表達(dá)時(shí)促進(jìn)腫瘤的生長、增殖和脈管浸潤;也提示聯(lián)合檢測VEGF、WTX和PTEN的表達(dá)可能與預(yù)后有一定關(guān)系。三種蛋白可能具有通路作用，由于PTEN和WTX高表達(dá)時(shí)均可以抑制腫瘤的血管生成，因此WTX和PTEN的協(xié)同作用可能與VEGF密切相關(guān)，即VEGF、WTX和PTEN的協(xié)同作用是通過血管的生成聯(lián)系在一起的。WTX和PTEN具有抑制血管新生的作用，可以通過降低內(nèi)皮細(xì)胞的遷移能力、增加血管內(nèi)皮生長的抑制因子作用(如血小板反應(yīng)蛋白)進(jìn)而減少腫瘤的血管新生〔10〕。

1 李思齊，張 毅，梁道明，等.抑癌基因WTX在結(jié)腸癌中的表達(dá)及其意義〔J〕.中國普通外科雜志，2012;21(10):1217-21.

2 賀榮芳，胡忠良，沈 明，等.胃癌組織中PTEN、VEGF、MMP-9的表達(dá)及相關(guān)性研究〔J〕.中國普通外科雜志，2005;14(3):173-7.

3 劉愛東，龐久玲，劉士生.胃癌中基質(zhì)金屬蛋白酶-9和CD105表達(dá)關(guān)系的研究〔J〕.中國老年學(xué)雜志，2009;29(4):886-7.

4 陳述偉，楊述華，張勁松，等.PTEN、MMP-7、VEGF在骨巨細(xì)胞瘤中的表達(dá)〔J〕.腫瘤防治研究，2007;34(4):290-2.

5 魏法才，陳 啟，楊道貴，等.胃癌組織中PTEN和VEGF的表達(dá)及其相關(guān)性〔J〕.中華腫瘤防治雜志，2007;14(8):601-3.

6 包健榮，姚衛(wèi)康.PTEN、VEGF、BCL-2在大腸癌中的表達(dá)及相關(guān)性研究〔J〕.中國現(xiàn)代醫(yī)藥雜志，2012;14(5):34-5.

7 張慶玲，于莉娜，丁彥青.新抑癌基因WTX在腎腫瘤中的表達(dá)及意義〔J〕.廣東醫(yī)學(xué)，2011;32(10):1253-5.

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9 覃 創(chuàng)，陳嘉勇，梁道明.WTX基因在腫瘤中的研究進(jìn)展〔J〕.重慶醫(yī)學(xué)，2012;41(5):502-3.

10 葉曉鋒，高 平，韓恩善，等.MMP-2、VEGF和PTEN的表達(dá)與食管鱗癌浸潤轉(zhuǎn)移的關(guān)系〔J〕.寧夏醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2012;34(4):326-8.