馬媛媛， 李雪寧

(復旦大學附屬中山醫(yī)院藥物臨床試驗機構，上海200032)

丹參注射液原收載于衛(wèi)生部中藥成方制劑第二十冊，現(xiàn)執(zhí)行標準為國家食品藥品監(jiān)督管理局藥品標準WS3-B-3766-98-2011。具有活血化瘀、通脈養(yǎng)心的功能，主要用于冠心病胸悶、心絞痛的治療，還用于糖尿病并發(fā)癥、肺心病、慢性腎病、腦血栓、微循環(huán)障礙性疾病等［1］。用法用量為肌內注射，1次2～4 mL，1日1～2次;靜脈注射，1次4 mL(用50%葡萄糖注射液20 mL稀釋后使用)，1日1～2次;靜脈滴注，1次10～20 mL(用5%葡萄糖注射液100～500 mL稀釋后使用)，1日1次。臨床上常與不同藥物配伍使用，起到輔助治療作用，如丹參注射液與氯霉素配伍使用，可以提高治療百日咳的作用;與強的松配伍使用，治療結節(jié)性多動脈炎有協(xié)同作用［2］。但丹參注射液為中藥注射液，成分復雜，配伍不當容易造成不良反應，如丹參注射液不能與普萘洛爾聯(lián)用，因為它能拮抗普萘洛爾收縮冠狀動脈的作用［3］;與喹諾酮類抗菌藥合用時，會出現(xiàn)渾濁，并產(chǎn)生絮狀沉淀［4］;與阿托品注射液配伍使用時，丹參注射液具有的降壓效應可被阿托品阻斷，從而降低藥效［5］。因此，本實驗通過丹參注射液與臨床常用化學藥物配伍溶液的穩(wěn)定性研究，確定二者配伍使用的注意事項及配伍禁忌，為臨床用藥提供理論依據(jù)。研究過程中分別就配伍溶液的外觀性狀、pH值、可見異物、不溶性微粒、丹參中成分的量等指標進行了檢測，對配伍溶液室溫放置2、4、6 h后的檢測結果與0 h進行了對比，判斷其穩(wěn)定性，同時對定量測定方法進行了驗證。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 高效液液相色譜儀 (日本島津LC-10AT、LC-20AT、SPD-20A)、注射液微粒分析儀(天河醫(yī)療儀器有限公司ZWF-T6)、酸度計 (上海大普儀器PHS-25B)。

1.2 試藥 丹參素鈉對照品 (批號110855-200809)，原兒茶醛對照品 (批號 110810-201007)，迷迭香酸對照品 (批號11871-201102)，丹酚酸B對照品 (批號12020104)，以上對照品購自中國藥品生物制品檢定所。丹參注射液 (山東華信制藥集團，批號12042401);鹽酸川芎嗪注射液 (河南輔仁懷慶堂，批號1108051);血塞通注射液 (云南白藥集團興中制藥，批號20110606);葛根素注射液、維生素C注射液、維生素B6注射液 (山東華信制藥集團，批號分別為:12020701、11102101、12013001);脈絡寧注射液 (金陵藥業(yè)南京金陵制藥，批號20111156);西咪替丁注射液 (徐州萊恩藥業(yè)，批號1112132);鹽酸倍他司汀注射液 (廣東邦民制藥，批號111201);甲醇、乙腈、醋酸均為色譜純，購自國藥集團化學試劑有限公司。

2 方法與結果

2.1 配伍溶液的配制 模擬臨床用藥方法，取丹參注射液20 mL 10份，分別與鹽酸川芎嗪注射液2 mL、鹽酸倍他司汀注射液6 mL、血塞通注射液4 mL、葛根素注射液8 mL、脈絡寧注射液10 mL、西咪替丁注射液2 mL、維生素C注射液8 mL、維生素B6注射液2 mL置于250 mL量瓶中，用5%葡萄糖注射液稀釋至刻度，混勻，即得配伍溶液。

2.2 配伍溶液外觀 取上述配伍溶液，分別室溫放置0、2、4、6 h后目測觀察顏色有無變化，是否有氣體或沉淀生成。觀察結果表明，在放置6 h后，各配伍溶液均無明顯顏色變化，也無氣體或沉淀生成。

2.3 配伍溶液可見異物穩(wěn)定性 取上述配伍溶液，分別室溫放置0、2、4、6 h后，參照可見異物檢查法(《中國藥典》2010年版一部附錄ⅨC第一法)檢查，結果表明，配伍溶液在6 h內可見異物數(shù)符合藥典要求。

2.4 不溶性微粒 取上述配伍溶液，分別室溫放置0、2、4、6 h后，參照不溶性微粒檢查法(《中國藥典》2010年版一部附錄Ⅸ R第一法)檢查，結果表明，6 h內配伍溶液中不溶性微粒＞10μm的微粒數(shù)和粒徑＞25μm的微粒數(shù)均符合藥典規(guī)定，結果見表1，說明，各配伍溶液6 h內穩(wěn)定。

2.5 pH值穩(wěn)定性 參照pH值測定法(《中國藥典》2010年版一部附ⅦG)檢查，結果見表2，說明配伍溶液在6 h內pH值穩(wěn)定，無顯著變化。

表1 配伍溶液放置不同時間的不溶性微粒數(shù)Tab.1 Insolub le particles of com patibility solution within 6 hours

表2 配伍溶液放置不同時間p H值Tab.2 p H value of com patibility solution within 6 hours

2.6 樣品測定 取上述配伍溶液，分別室溫放置0、2、4、6 h后，采用高效液相色譜法，檢測丹參注射液中丹參素鈉、原兒茶醛、迷迭香酸和丹酚酸B量變化情況。

2.6.1 色譜條件 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以乙腈為流動相A，以0.05%三氟乙酸水溶液為流動相B，按表3中的規(guī)定進行梯度洗脫;體積流量為0.8 mL/min;柱溫為40℃;檢測波長為288 nm。理論板數(shù)按丹酚酸B峰計算應不低于200 000。

表3 梯度洗脫程序Tab.3 Gradient elution procedure

2.6.2 供試品溶液的配制 取2.1項下各配伍溶液，作為各配伍溶液的供試品溶液。

2.6.3 對照品溶液的配制 取丹參素鈉對照品、原兒茶醛對照品、迷迭香酸對照品和丹酚酸B對照品適量，精密稱定，加0.2%冰醋酸的10%甲醇溶液制成含丹參素鈉0.20 mg/mL、原兒茶醛50 μg/mL、迷迭香酸50μg/mL和丹酸酸B 50μg/mL的混合溶液，取該溶液5 mL，置10 mL量瓶中，加0.2%冰醋酸的10%甲醇溶液至刻度，混勻，即得。

2.6.4 專屬性試驗 分別取對照品溶液和8種配伍注射液，在上述色譜條件下進樣分析，結果表明8種配伍注射液在對照品出峰位置處無干擾，符合方法學要求。

2.6.5 線性關系考察 精密稱取丹參素鈉對照品59.25 mg、原兒茶醛對照品16.64 mg、迷迭香酸對照品9.38 mg、丹酚酸B對照品10.21 mg，同置10 mL量瓶中加0.2%冰醋酸的10%甲醇溶液，溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為貯備液，精密量取貯備液0.1、0.5、1.5、2.5、3.5 mL分別置10 mL量瓶中，用0.2%冰醋酸的10%甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。各精密量取5μL分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。以主峰面積A為縱坐標，溶液濃度C(mg/mL)為橫坐標，進行線性回歸，得到丹參素鈉、原兒茶醛、迷迭香酸和丹酚酸B的回歸方程分別為:A=5 486 997.0C+234 865.7，R=0.999 7;A=44 869.0C+496 280.0，相關系數(shù)R=0.999 4;A=25 610.4C+223 662.6，相關系數(shù)R=0.999 1;A=121 71C－108 78，相關系數(shù)R=0.999。線性范圍分別為:59.25～2 073.75 μg/mL、16.64～582.4 μg/mL、9.38～328.3μg/mL和10.2144～357.504μg/mL。

2.6.6 精密度和穩(wěn)定性試驗 取原兒茶醛對照品12.24 mg、迷迭香酸對照品12.25 mg、丹酚酸B對照品11.78 mg，同置25 mL量瓶中，用0.2%冰醋酸的10%甲醇溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液1。取丹參素鈉對照品9.70 mg，置50 mL量瓶中，用0.2%冰醋酸的10%甲醇溶液適量使溶解，取5 mL對照品溶液1置量瓶中，用0.2%冰醋酸的10%甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液，并分別于0、2、4、6、8、10 h進樣分析，4種成分峰面積的RSD分別為1.3%、1.2%、1.2%和1.7%。結果表明，4種成分測定精密度良好，且對照品溶液10 h穩(wěn)定。

2.6.7 回收率試驗 精密量取已知含有量的丹參注射液1 mL、一式6份，分置10 mL量瓶中，精密加入6份對照品混合溶液7 mL，加0.2%冰醋酸的10%甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液，依法測定，計算回收率，結果見表4。

試驗結果顯示本測定方法丹參素鈉、原兒茶醛、迷迭香酸和丹酚酸B成分回收率良好。

2.6.8 樣品測定 于第0、2、4、6 h，分別精密吸取上述對照品溶液和各配伍溶液各5μL進樣分析，測定丹參素鈉、原兒茶醛、迷迭香酸和丹酚酸B的峰面積，由外標法計算各成分的量，結果見表5，表明，丹參素鈉、原兒茶迷迭香酸和丹酚酸B在各配伍溶液中量沒有明顯變化，即丹參注射液與各注射液配伍溶液穩(wěn)定。

3 討論

據(jù)文獻 ［6-7］報道，10%的葡萄糖注射液和0.9%氯化鈉注射液與丹參注射液配伍使用時，發(fā)生不溶性微粒數(shù)增多現(xiàn)象，因此，本實驗選擇5%葡萄糖注射液作為各配伍溶液的溶媒。

本實驗確定了HPLC法測定丹參注射液中丹參素鈉、原兒茶醛、迷迭香酸和丹酚酸B 4種有效成分的量變化情況，該方法分離度好、靈敏度高、操作簡便，能準確測定4種有效成分。丹參注射液成分檢測波長為288 nm，這一波長與大部分配伍注射液的檢測波長接近［8-10］，因此無法采用紫外－可見分光光度法測定各組分含量。

8種配伍注射液中有4種中藥注射液 (血塞通注射液、鹽酸川芎嗪注射液、葛根素注射液和脈絡寧注射液)，由于中藥注射液中成分復雜，配伍藥液往往會出現(xiàn)有效成分含有量降低、渾濁沉淀、溶液的顏色改變、紫外吸收值降低、不溶性微粒數(shù)劇增、藥理配伍禁忌、不良反應增加等［11］。本實驗中丹參注射液與各配伍溶液6 h內pH值穩(wěn)定，不溶性微粒數(shù)無明顯增加，丹參注射液有效成分的量沒有減少，因此臨床上可安全使用。

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