曹日亮，車向榮，王紅妍，任 杰，孟冬霞

（1.山西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所，山西太原030032；2.山西農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，山西太谷030801）

小腸腸道黏膜上皮結(jié)構(gòu)的完整性是其消化吸收功能的基本保證，小腸絨毛高度、隱窩深度、黏膜厚度以及絨毛面積是衡量小腸消化吸收功能的重要指標(biāo)[1-2]。中藥添加劑能增加黏膜厚度、絨毛高度與隱窩深度的比值，并且使腸黏膜表面的紋狀緣結(jié)構(gòu)整齊均勻，固有層結(jié)構(gòu)清晰，改善腸道的形態(tài)結(jié)構(gòu)[3]。同時(shí)，中藥添加劑還可以提高營養(yǎng)物質(zhì)的消化率和利用率，促進(jìn)機(jī)體的新陳代謝。

本試驗(yàn)擬進(jìn)一步考察中藥添加劑對斷奶仔豬小腸黏膜形態(tài)和養(yǎng)分消化率的影響，旨在為中藥添加劑預(yù)防斷奶仔豬腹瀉，促進(jìn)其正常生長提供理論依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物

試驗(yàn)選取28日齡體質(zhì)量相近的杜長大斷奶仔豬72頭，根據(jù)胎次一致、品種相同、體質(zhì)量相近、公母各半的原則隨機(jī)分成4個(gè)組，每組3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)6頭，試驗(yàn)期為4周。

1.2 中藥添加劑制備

中藥配方Ⅰ：黃芪，白術(shù)，砂仁，陳皮，茴香，藿香，按一定比例配比；中藥配方Ⅱ：黨參，白術(shù)，神曲，紫蘇子，陳皮，按一定比例配比。

將各種中藥自然干燥，分別精細(xì)粉碎并過0.05 mm篩，按配方稱質(zhì)量，混合均勻，制成超微粉劑。

1.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì)及飼糧組成

試驗(yàn)設(shè)對照組、中藥Ⅰ組、中藥Ⅱ組、抗生素組4個(gè)處理，對照組飼喂基礎(chǔ)日糧，中藥Ⅰ組飼喂基礎(chǔ)日糧+日糧1%的中藥配方Ⅰ，中藥Ⅱ組飼喂基礎(chǔ)日糧+日糧1%的中藥配方Ⅱ，抗生素組飼喂基礎(chǔ)日糧+抗生素（表1）。

表1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)及飼糧組成

1.4 消化試驗(yàn)

飼養(yǎng)第4周進(jìn)行消化試驗(yàn)，采用內(nèi)源指示劑法，試驗(yàn)期為4 d，每日收糞3次，每次約100 g，裝入密封袋中密封，-20℃冰箱中保存。

糞樣制備：糞樣經(jīng)流水快速解凍，以重復(fù)為單位將所收糞樣混勻，加入1/4鮮糞質(zhì)量的10%酒石酸，于65℃除去初水分，粉碎（過0.42 mm篩），裝瓶，待測各養(yǎng)分含量。根據(jù)《動(dòng)物營養(yǎng)學(xué)實(shí)驗(yàn)教程》分析飼料及糞樣中的各種營養(yǎng)成分，計(jì)算各養(yǎng)分消化率。

1.5 組織學(xué)檢查

1.5.1 4%多聚甲醛固定（用于黏膜形態(tài)結(jié)構(gòu)）（1）固定。組織塊于4%多聚甲醛固定液中固定24 h后，取出經(jīng)流水沖洗 24 h。（ 2）脫水、透明。組織塊經(jīng)梯度酒精脫水（50%→70%→85%→95%→無水乙醇）各2 h，再依次放入二甲苯與無水酒精（體積比為1∶1）的溶液和二甲苯Ⅰ，Ⅱ中透明各1.5 h。（3）浸蠟與包埋。在浸蠟盒Ⅰ，Ⅱ各浸蠟2 h，隨后用60℃石蠟進(jìn)行包埋（包埋要迅速）。（4）切片。用旋轉(zhuǎn)切片機(jī)連續(xù)完整切片5張，厚度為5μm。（5）展片和粘片。在45℃水浴中進(jìn)行展片，載玻片進(jìn)行粘片（載玻片用粘片劑APES進(jìn)行處理），37℃條件下烘干24h以上，常溫保存，待染色。

1.5.2 HE染色（小腸黏膜形態(tài)學(xué)結(jié)構(gòu)） 石蠟切片經(jīng)二甲苯常規(guī)脫蠟，二甲苯Ⅰ，Ⅱ脫蠟2次各15 min，二甲苯∶無水酒精（ 體積比為 1∶1）、無水酒精以及各級梯度酒精（95%，85%，70%，50%）、水洗脫各2 min，用蘇木精溶液染色約25 min，蒸餾水洗2 min，在0.5%鹽酸酒精溶液中分色（70～80 s），以鏡檢為準(zhǔn)，經(jīng)自來水流水沖洗藍(lán)化15 min，再用蒸餾水洗后，依次用梯度酒精（50%，70%，85%，95%）洗脫（ 各 3 min），放入0.5%伊紅酒精液染色10 min，再依次放入95%酒精Ⅰ，95%酒精I(xiàn)I（各3 min）和無水酒精Ⅰ、無水酒精Ⅱ脫水（各5 min），經(jīng)二甲苯Ⅰ及二甲苯Ⅱ透明（各8 min），中性樹膠封片。

1.5.3 觀察與測量 光鏡下詳細(xì)觀察和比較各腸段黏膜形態(tài)結(jié)構(gòu)的變化情況，并用Image-Pro Plus 6.0專業(yè)圖像分析軟件對各腸段的腸壁厚度、絨毛高度、黏膜厚度和隱窩深度進(jìn)行具體測量。具體檢測方法為：每個(gè)腸管取5個(gè)視野，每個(gè)視野選取5根最高絨毛高度、最深隱窩深度、最厚黏膜厚度以及最厚腸壁厚度。

1.6 數(shù)據(jù)處理

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件中的ANOVA程序進(jìn)行方差分析和鄧肯氏（Duncan）多重比較，結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 中藥添加劑對斷奶仔豬小腸黏膜形態(tài)影響

從表2可以看出，各試驗(yàn)組之間的腸壁厚度和黏膜厚度均無顯著差異（P＞0.05），但中藥Ⅱ組十二指腸的腸壁厚度以及各腸段（回腸除外）的黏膜厚度都稍微高于中藥Ⅰ組和抗生素組（P＞0.05）。中藥Ⅰ組和抗生素組的十二指腸和回腸各段絨毛高度與對照組相比，均無顯著差異（P＞0.05）；中藥Ⅰ組在空腸段的絨毛高度顯著高于對照組（P＜0.05），但與中藥Ⅱ組和抗生素組相比無顯著差異（P＞0.05）；中藥Ⅱ組十二指腸的絨毛高度顯著高于對照組和中藥Ⅰ組（P＜0.05），在空腸和回腸段極顯著高于對照組（P＜0.01），并在回腸段顯著高于中藥Ⅰ組和抗生素組（P＜0.05）。對于各腸段的隱窩深度，各試驗(yàn)組之間均無顯著差異（P＞0.05）。

仔豬斷奶后會出現(xiàn)絨毛萎縮、隱窩增深的癥狀，VH/CD可反映出黏膜形態(tài)是否正常。從表2可以看出，中藥Ⅰ組和抗生素組在十二指腸、空腸、回腸各段的VH/CD與對照組相比，均無顯著差異（P＞0.05），但除中藥Ⅰ組十二指腸外，均有一定的提高；中藥Ⅱ組各腸段VH/CD與對照組相比均有極顯著差異（P＜0.01），并且在十二指腸極顯著高于中藥Ⅰ組（P＜0.01），在回腸極顯著高于中藥Ⅰ組和抗生素組（P＜0.01）。而十二指腸中，抗生素組的VH/CD顯著高于中藥Ⅰ組（ P＜0.05）。

表2 中藥添加劑對斷奶仔豬小腸各段形態(tài)學(xué)的影響

2.2 中藥添加劑對斷奶仔豬主要養(yǎng)分表觀消化率的影響

飼糧中添加復(fù)方中藥和抗生素后的主要養(yǎng)分表觀消化率的影響如表3所示，對于有機(jī)物質(zhì)的消化率，各組之間無顯著差異（P＜0.05）。對于粗蛋白的消化率，中藥Ⅱ組極顯著地高于對照組（P＜0.01），抗生素組與對照組相比差異顯著（P＜0.05）。對于粗脂肪的消化率，中藥Ⅱ組極顯著高于中藥Ⅰ組（P＜0.01），顯著高于對照組（P＜0.05），但與抗生素組相比無顯著差異（P＞0.05）；對照組、中藥Ⅰ組和抗生素組這3組之間無顯著差異（P＞0.05）。對于粗纖維的消化率，中藥Ⅰ組和中藥Ⅱ組均極顯著高于對照組（P＜0.01），抗生素組顯著高于對照組（P＜0.05）；中藥Ⅱ組顯著高于抗生素組（P＜0.05），中藥Ⅱ組與中藥Ⅰ組相比無顯著差異（P＞0.05），中藥Ⅰ組與抗生素組相比無顯著差異（P＞0.05）。鈣的消化率，中藥Ⅱ組和抗生素組極顯著高于對照組和中藥Ⅰ組（ P＜0.01），但 2組之間無顯著差異（ P＞0.05）；中藥Ⅰ組與對照組相比具有顯著差異（P＜0.05）。對于磷的消化率，3個(gè)處理組均極顯著高于對照組（P＜0.01），中藥Ⅱ組和中藥Ⅰ組顯著高于抗生素組（P＜0.05）。

表3 中藥添加劑對斷奶仔豬主要養(yǎng)分表觀消化率的影晌 %

3 討論

3.1 中藥添加劑對斷奶仔豬小腸黏膜形態(tài)學(xué)的影響

小腸絨毛是營養(yǎng)物質(zhì)吸收的主要部位，絨毛的高度與其腸黏膜上皮細(xì)胞數(shù)量呈顯著相關(guān)，絨毛長，則成熟的上皮細(xì)胞增加，其對養(yǎng)分的吸收能力升高[4]。隱窩深度則反映了細(xì)胞生成率，隱窩變深則腸上皮細(xì)胞成熟率下降以及吸收功能增強(qiáng)[5]。絨毛高度與隱窩深度的比值則綜合反映了小腸的功能狀態(tài)，其比值升高反映了黏膜的改善以及消化吸收功能的增強(qiáng)。Van Beers-Schreurs等[6]研究表明，仔豬斷奶會引起小腸形態(tài)結(jié)構(gòu)發(fā)生變化，如絨毛萎縮，絨毛長度和隱窩深度的增加，這些變化將會減少腸道的吸收面積。

飼料添加劑對仔豬腸黏膜的影響也有較多報(bào)道，黃芪主要活性物質(zhì)是黃芪多糖，其能通過維持腸道黏膜結(jié)構(gòu)的完整性和腸道黏膜相關(guān)細(xì)胞數(shù)量，達(dá)到增強(qiáng)免疫功能的作用[7]。林斌等[8]報(bào)道，在仔豬日糧中添加2%黨參湯劑可改善仔豬的腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)，從而預(yù)防仔豬早期斷奶引起的腹瀉。謝正軍等[9]研究表明，殼聚糖鋅具有調(diào)節(jié)斷奶仔豬腸道菌群平衡、改善腸黏膜形態(tài)的作用。李美君等[10]研究表明，飼糧中添加乳鐵蛋白可刺激腸道有益菌生長、降低有害菌增殖，從而改善腸道功能，具有提高仔豬生長性能的作用。楊慧等[11]研究表明，精氨酸是多胺合成的起始物，多胺是小腸黏膜生長、發(fā)育、成熟、適應(yīng)及恢復(fù)創(chuàng)傷所必需的物質(zhì)，對小腸絨毛的修復(fù)起著重要作用；而乳酸菌發(fā)酵的主要代謝產(chǎn)物是短鏈脂肪酸，其中的丁酸與細(xì)胞凋亡、細(xì)胞分化的調(diào)控有關(guān)，是腸道上皮組織細(xì)胞再生和修復(fù)的主要營養(yǎng)物質(zhì)，對腸道上皮組織的再生和修復(fù)起重要作用。因此，精氨酸和乳酸菌同時(shí)添加具有一定的協(xié)同作用。

本試驗(yàn)結(jié)果表明，飼糧中添加中藥和抗生素對腸壁厚度、黏膜厚度以及隱窩深度無顯著影響，但顯著提高了小腸絨毛的高度以及絨毛高度與隱窩深度的比值。其中，添加中藥配方Ⅱ的效果要優(yōu)于配方Ⅰ及抗生素組，因此，添加中藥Ⅱ組更利于小腸黏膜的消化吸收功能，從而提高仔豬的生產(chǎn)性能。

3.2 中藥添加劑對斷奶仔豬養(yǎng)分吸收的影響

試驗(yàn)結(jié)果表明，飼糧中添加中藥和抗生素均能提高仔豬對有機(jī)物質(zhì)、粗蛋白、粗脂肪、粗纖維、鈣及磷的表觀消化率。很多文獻(xiàn)證實(shí)，中藥能提高營養(yǎng)物質(zhì)的消化率和利用率，增強(qiáng)機(jī)體的新陳代謝，促進(jìn)血液循環(huán)，提高仔豬的生長速度。本研究結(jié)果與上述報(bào)道一致。

方熱軍等[12]研究表明，和抗生素相比，中藥添加劑能提高干物質(zhì)消化率和表觀氮存留率。張美英[13]研究表明，飼料中添加山楂粗提物，可以提高粗蛋白、鈣以及磷的消化率。晏家友等[14]在斷奶仔豬日糧中添加微膠囊型緩釋復(fù)合酸化劑，可以通過降低腸道pH值，優(yōu)化腸道微生物區(qū)系，改善腸組織形態(tài)和功能，從而提高斷奶仔豬腸道的消化力和適應(yīng)性，并促進(jìn)仔豬生長。游玉波等[15]研究表明，將蒼術(shù)、山楂、神曲以及甘草等中藥粉劑按一定比例加入到飼糧中，可以提高生長豬對飼料干物質(zhì)、粗蛋白、粗灰分以及粗纖維的表觀消化率。本試驗(yàn)結(jié)果表明，飼糧中添加中藥配方II時(shí)，飼糧中營養(yǎng)物質(zhì)的表觀消化率要優(yōu)于中藥I組和抗生素組。

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