高宇琳

廣東省東莞市婦幼保健院，廣東東莞 523120

人乳頭狀病毒（human papilloma virus，HPV）是一種具有嚴(yán)格宿主范圍和嗜上皮性的DNA 病毒，分子流行病學(xué)研究證實(shí)HPV 是引起宮頸癌變的主要致病因素[1]，90%以上的宮頸癌標(biāo)本中有HPV-DNA 的存在[2]。臨床上開(kāi)展HPV基因檢測(cè)是早期宮頸癌篩查的主要方法之一，目前已發(fā)現(xiàn)的HPV 亞型約100多種，能感染女性生殖系統(tǒng)的HPV分為低危型和高危型HPV，高危型HPV 持續(xù)感染及多重感染是引起宮頸癌變的重要原因之一。本研究對(duì)東莞地區(qū)2 628例婦女HPV 感染的流行病學(xué)進(jìn)行回顧性分析，以期了解本地區(qū)HPV 感染現(xiàn)狀，為宮頸癌的防治提供有價(jià)值的參考資料。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象

2010年1月～2011年2月來(lái)我院婦科門(mén)診就診患者2 628例，年齡18～68歲，中位年齡32歲。2 628例患者為初次在婦科門(mén)診進(jìn)行HPV 核酸檢測(cè)，均無(wú)宮頸疾病治療與抗HPV 藥物治療史。

1.2 儀器與試劑

HPV 基因分型檢測(cè)試劑購(gòu)于中山大學(xué)達(dá)安基因公司，配有試劑盒Ⅰ和試劑盒Ⅱ，試劑盒Ⅰ主要為PCR 反應(yīng)液，試劑盒Ⅱ?yàn)镠PV 各亞型雜交膜條、雜交液、TMB 等。PCR儀為ABI 9700，雜交儀為電熱恒溫振蕩水槽（上海精宏）。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 標(biāo)本采集 宮頸脫落細(xì)胞：在無(wú)菌條件下，將棉拭子伸入宮頸內(nèi)，旋轉(zhuǎn)數(shù)周并停留片刻后取出，標(biāo)本密封保存于 2～8℃?zhèn)溆谩?/p>

1.3.2 核酸提取 向標(biāo)本中加入1 mL 滅菌生理鹽水，充分震蕩搖勻，擠干棉拭子；吸取全部液體轉(zhuǎn)至1.5 mL 離心管中，12 000 r/min 離心 5 min；去上清，沉淀加入 50 μL DNA提取液充分混勻，恒溫處理（10±1）min；12 000 r/min 離心5 min，備用。

1.3.3 PCR 擴(kuò)增HPV DNA 取5 μL DNA 提取物加入HPV核酸PCR 擴(kuò)增體系組份，擴(kuò)增條件：93℃ 3 min；93℃ 40 s，55℃ 40 s，72℃ 40 s，40個(gè)循環(huán)；72℃延伸 7 min。

1.3.4 雜交及分析過(guò)程 雜交、洗膜與顯色均嚴(yán)格接照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，雜交膜條上顯示藍(lán)色斑點(diǎn)為陽(yáng)性，多個(gè)斑點(diǎn)為多重感染。統(tǒng)計(jì)HPV 感染率及基因型分布。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 12.0 統(tǒng)計(jì)軟件處理數(shù)據(jù)。計(jì)數(shù)資料以率表示，采用 χ2檢驗(yàn)。以P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 HPV 感染情況

2 628例患者中463例HPV 檢測(cè)陽(yáng)性，陽(yáng)性率為17.6%，其中單一感染368例，雙重及多重感染95例，感染率分別為14.0%和3.6%。從年齡分布上分析，>50歲年齡段的患者HPV 感染率最高，為29.1%（25/86），其次為20～40歲的患者，感染率為17.8%（381/2 140），各年齡組HPV總體感染率有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。各年齡段患者HPV感染情況見(jiàn)表1。

表1 2 628例標(biāo)本各年齡組HPV感染率情況

2.2 HPV 單一感染情況

368例單一感染患者主要以HPV16、52 和51型感染為主，分別為 115例（31.2%）、68例（18.4%）和 44例（9.8%）。其中低危型（HPV6、11 型）感染 12例（12/368，3.26%），高危 型 感 染 （HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、亞型 CP8304 型）356例（356/368，96.74%）。

2.3 HPV 雙重及多重感染情況

95例雙重及多重感染中，雙重感染71例（71/95，74.7%），三重及三重以上感染24例（24/95，25.3%），感染類(lèi)型主要以HPV16、58、11、53、51 為主，分別為 37例（38.9%）、16例（16.8%）、16例（16.8%）、14例（14.7%）、14例（14.7%），在各種亞型感染中，HPV59、45、39、33、16、11 主要以復(fù)合感染為主。HPV 各型感染分布見(jiàn)表2。

3 討論

宮頸癌是全球婦女第二大常見(jiàn)惡性腫瘤，據(jù)世界范圍內(nèi)統(tǒng)計(jì)，每年有50 萬(wàn)左右的新發(fā)病例，其發(fā)病呈年青化和上升化趨勢(shì)，嚴(yán)重威脅婦女的健康和生命。已知HPV 持續(xù)感染和多重感染是導(dǎo)致宮頸癌和癌前病變的主要因素之一，從HPV 感染發(fā)展到宮頸癌需經(jīng)歷長(zhǎng)期過(guò)程，如早期治療的宮頸癌患者生存率高達(dá)90%，故建立有效的HPV 篩查方法對(duì)宮頸癌的防治具有極其重要意義。

基因芯片技術(shù)是近年來(lái)發(fā)展起來(lái)檢測(cè)基因的新技術(shù)，其具有高通量性在臨床上得到廣泛應(yīng)用[3]。本研究采用HPV-DNA-反向斑點(diǎn)膜雜交技術(shù)（RDB 方法）對(duì)2 628例婦科門(mén)診患者進(jìn)行HPV 核酸檢測(cè)和基因分型，結(jié)果發(fā)現(xiàn)463例患者HPV 陽(yáng)性，其陽(yáng)性率為17.6%，與Munoz 等[4]報(bào)道較為接近。為了進(jìn)一步了解HPV 在女性宮頸感染情況，本研究將門(mén)診患者按年齡分為不同組，研究發(fā)現(xiàn)50歲以上組HPV 感染陽(yáng)性率顯著高于20～40歲組與41～50歲組HPV 陽(yáng)性率，其中20～40歲組陽(yáng)性率高于41～50歲組陽(yáng)性率，結(jié)果提示HPV 感染雖有年青化趨勢(shì)，但50歲以上組HPV 感染陽(yáng)性率顯著高于低年齡組，因此對(duì)50歲以上女性進(jìn)行HPV 基因檢測(cè)與分型是宮頸癌防治的關(guān)鍵。

目前研究表明HPV 感染分型分布的研究在宮頸篩查及癌前病變病情隨防監(jiān)測(cè)中有重要的意義[5]，本研究對(duì)463例HPV 陽(yáng)性患者HPV 基因分型結(jié)果顯示，有368例屬于HPV 亞型單一感染，95例屬于雙重及多重感染。單一感染患者主要以HPV16、52 和51型感染為主，多重感染類(lèi)型主要以HPV16、58、11、53、51 為主，但 Clifford 等[6]報(bào)道全世界HPV 感染的主要類(lèi)型是HPV16/18，其次是45、31、33型，本研究與國(guó)內(nèi)其他地區(qū)的報(bào)道亦不相同[7]，可能是研究病例數(shù)不同之外，還可能是我國(guó)不同地區(qū)、區(qū)域存在差異。本研究中雙重及多重感染例數(shù)占總例數(shù)的20.5%（95/463），提示本地區(qū)人群多重感染率較高，這一點(diǎn)應(yīng)引起高度重視。

表2 463例HPV陽(yáng)性婦女HPV感染分布

宮頸HPV 早發(fā)現(xiàn)、早預(yù)防是阻斷宮頸癌病變的關(guān)鍵，許多國(guó)家已將HPV 檢測(cè)納入篩查計(jì)劃。目前我院已成立了宮頸癌防治指導(dǎo)中心，對(duì)育齡婦女及宮頸癌高危人群定期進(jìn)行HPV 核酸檢測(cè)及基因分型篩查，預(yù)防宮頸癌的發(fā)生及了解HPV 感染的轉(zhuǎn)歸，將為本地區(qū)婦女的健康提供有利保障。

[1]Roden R，Wu TC.How will HPV vaccines affect cervical cancer[J].Nat Rev Cancer，2006，6（10）：753-763.

[2]Stoler MH.Human papillomavirus and cervial neoplasia：a model for carcinogenesis[J].Int J Gynecol Pathol，2000，19（1）：16.

[3]馬卿蓮，肖長(zhǎng)認(rèn)，葉紅，等.分子生物學(xué)技術(shù)在HPV分型方面的應(yīng)用進(jìn)展[J].現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué)，2009，17（1）：144-147.

[4]Munoz N，Bosch FX，de Sanjose S，et al.Epidemiologic classification of human papillomavirus type associated with cervical cancer[J].N Engl J Med，2003，348（6）：518-527.

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[6]Cliffeord GM，Smith JS，Plummer M，et al.Human papillomavirus types in invasive cervical cancer wordwide：a meta-analysis[J].Br J Cancer，2003，88（1）：63-73.

[7]劉永林，張麗，陳益民，等.浙江地區(qū)1088例婦科就診患者HPV 感染狀況調(diào)查[J].中華臨床感染病志，2011，4（2）：106-108.