李 紅 蔣孟良

湖南中醫(yī)藥大學(xué)，湖南長(zhǎng)沙 410208

復(fù)聰片由黃芪、丹參、淫羊藿、當(dāng)歸、骨碎補(bǔ)、熟地黃、水蛭、炮山甲、澤瀉、石菖蒲等中藥組成，是由耳聾左磁丸加減而成[1]，能清肝膽、利濕熱、補(bǔ)腎活血、益氣養(yǎng)血，主要用于治療由于腎虛等病因引起的聽(tīng)力下降。淫羊藿是本方中的重要組分。淫羊藿為小檗科植物淫羊藿、箭葉淫羊藿、巫山淫羊藿、朝鮮淫羊藿等多種淫羊藿的莖葉。淫羊藿是多年生草本，味辛、甘，性溫；歸肝經(jīng)；體輕氣雄，可升可降；具有壯腎陽(yáng)、堅(jiān)筋骨、祛風(fēng)濕等功效；主治陽(yáng)痿、遺精早泄、精冷不育、尿頻失禁、腎虛喘咳、腰膝酸軟、筋骨攣急、風(fēng)濕痹痛、半身不遂、四肢不仁。淫羊藿主要含黃酮類化合物、木脂素、生物堿、揮發(fā)油等。淫羊藿的葉和莖中含淫羊藿苷（icariin）、淫羊藿次苷（icariside）、去氧甲基淫羊藿苷（des-O-Methylicariin）、β-去水淫羊藿素（β-anhy-Droicaritin）、淫羊藿糖苷（epimedoside）A、B、C、D、E，淫羊藿苷是其主要有效成分之一[2]?，F(xiàn)代研究表明，淫羊藿苷具有提高性功能、抗衰老、改善免疫系統(tǒng)、增強(qiáng)心肌收縮力、降血壓、鎮(zhèn)咳、祛痰和平喘、抗炎及抗病原微生物、改善血流動(dòng)力和血液流變的作用。本實(shí)驗(yàn)采用薄層掃描法[3-4]測(cè)定復(fù)聰片中淫羊藿苷的含量，方法簡(jiǎn)便易行，并且有較好的精密度和重復(fù)性，可以用于該產(chǎn)品的質(zhì)量控制?，F(xiàn)將實(shí)驗(yàn)結(jié)果報(bào)道如下：

1 儀器與試藥

1.1 儀器

CS-930型薄層掃描儀 （日本島津）；AB135-S型電子天平（0.01 mg，METTLER TOLEDO）；DK-S22 電熱恒溫水浴鍋（上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）；SK3300A型粉碎機(jī)（上海科導(dǎo)超聲儀器有限公司）；WGLL-125BE型電熱鼓風(fēng)干燥箱（天津泰斯特儀器有限公司）；5 μL 微量進(jìn)樣器（上海第三注射器廠）；索氏提取器。

1.2 試藥

復(fù)聰片（湖南中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院）；硅膠G（青島海洋化工廠）；淫羊藿苷對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，供含量測(cè)定用）；三氯化鋁、乙醇、醋酸乙酯、丁酮、甲醇等試劑均為分析純。

2 方法及結(jié)果

2.1 薄層層析條件

2.1.1 薄層板 含0.5%羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G薄層板（10 cm×20 cm），于105℃活化1 h，置于干燥器中備用。展開(kāi)劑：醋酸乙酯-丁酮-甲醇-水（10∶1∶1∶1）。

2.1.2 顯色劑 5%三氯化鋁-乙醇溶液。

2.2 掃描條件[5]

單波長(zhǎng)反射法鋸齒形程序掃描；掃描波長(zhǎng)λ=272 nm；狹縫為1.2 mm×1.2 mm，Sx=3，靈敏度中等。

2.3 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取干燥至恒重的淫羊藿苷對(duì)照品0.9 mg，用甲醇溶解并用2 mL 容量瓶定容，搖勻備用（濃度：0.45 mg/mL）。

2.4 供試品溶液的制備

取無(wú)糖衣的復(fù)聰片10 片，碾碎，置于索氏提取器中，加入50 mL 醋酸乙酯，連續(xù)回流提取至無(wú)色（約3.5 h）。將提取液水浴蒸干，用水溶解，上聚酰胺柱（層板柱為1.5 cm×20 cm，5 g 聚酰胺），先用70 mL 蒸餾水洗滌，洗滌液棄去；繼用70 mL 70%乙醇洗滌，收集乙醇洗脫液，水浴蒸干，用甲醇溶解并定容到2 mL，搖勻備用。

2.5 陰性溶液的制備

精密稱取1/10處方量的各藥物（淫羊藿除外），依照其生產(chǎn)工藝制備陰性樣品100 片，取其中10 片，按樣品供試液的方法制備陰性樣品溶液。

2.6 線性關(guān)系的考察

精密吸取對(duì)照品溶液（0.45 mg/mL）10、15、20、25、30 μL，分別點(diǎn)樣于同一塊薄層板上，按上述條件，依法展開(kāi)，掃描測(cè)定。以點(diǎn)樣量（μg）為橫坐標(biāo)，峰面積積分值為縱坐標(biāo)。見(jiàn)表1。

表1 線性關(guān)系考察結(jié)果（n=5）

結(jié)果顯示，該條件下回歸方程：Y=4120.19X－15 458.92，相關(guān)系數(shù)：r=0.999 5，提示淫羊藿苷在 4.50～13.50 μg 范圍內(nèi)含量與峰面積積分值呈良好的線性關(guān)系。

2.7 同板精密度試驗(yàn)

在同一塊薄層板上，分別點(diǎn)相同量對(duì)照品溶液15 μL的6個(gè)點(diǎn)，依法展開(kāi)，測(cè)定其峰面積積分值，結(jié)果RSD=4.56%，表明具有較好的同板精密度。見(jiàn)表2。

表2 同板精密度試驗(yàn)結(jié)果

2.8 異板精密度試驗(yàn)

在6 塊不同薄層板上，點(diǎn)相同量對(duì)照品溶液15 μL 的6個(gè)點(diǎn)，依法展開(kāi)，測(cè)定其峰面積積分值，結(jié)果RSD=5.21%，n=6，表明具有較好的異板精密度。見(jiàn)表3。

表3 異板精密度試驗(yàn)結(jié)果

2.9 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取供試品溶液按文中所述含量測(cè)定方法，顯色后立即測(cè)定，然后每隔30 min 測(cè)定一次，連續(xù)測(cè)定3 h，結(jié)果RSD=3.35%，n=7，表明3 h 內(nèi)測(cè)定結(jié)果基本穩(wěn)定。

2.10 回收率試驗(yàn)

精密稱取已測(cè)知淫羊藿苷含量的復(fù)聰片粉末及一定量的淫羊藿苷對(duì)照品，按樣品測(cè)定方法進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果淫羊藿苷的平均回收率為98.10%，RSD 為1.31%。見(jiàn)表4。

表4 回收率試驗(yàn)結(jié)果（n=6）

2.11 樣品含量測(cè)定

精密吸取對(duì)照品溶液15μL 和25μL，供試品溶液20μL，分別點(diǎn)于同一塊薄層板上，同前展開(kāi)測(cè)定，采用外標(biāo)兩點(diǎn)法計(jì)算含量。見(jiàn)表5。

表5 樣品含量測(cè)定結(jié)果

3 討論

耳聾指不同程度的聽(tīng)力下降，耳聾又常常由耳鳴發(fā)展而來(lái)，正如《醫(yī)學(xué)入門(mén)》所說(shuō)：“耳鳴乃是聾之漸也”，可從其性質(zhì)及病程進(jìn)行辨證，如《景岳全書(shū)·耳證》所說(shuō)：“凡暴鳴而聲大者多實(shí)；漸鳴而聲細(xì)者多虛”。隨著我國(guó)人口年齡的老齡化，老年性聾的發(fā)病率有增高的趨勢(shì)，其發(fā)病情況為城市高于農(nóng)村，工業(yè)人口高于農(nóng)業(yè)人口，心血管疾病患者高于一般居民，男性聽(tīng)力減退比女性更為顯著，年齡越大，發(fā)病率越高，聽(tīng)力減退也越明顯。因其病程較長(zhǎng)，進(jìn)展緩慢，故屬中醫(yī)學(xué)耳聾、久聾范疇。中老年人由于年齡增大的關(guān)系，臟腑日損，陰精暗耗，氣血漸衰，耳目功能減退，以致出現(xiàn)重聽(tīng)耳鳴，甚則聾閉。中醫(yī)認(rèn)為，精血不足或氣血虧損，以及久病入絡(luò)，均可致竅絡(luò)瘀阻，耳竅失養(yǎng)，功能失司。

復(fù)聰片是我校第二附屬醫(yī)院譚敬書(shū)教授治療耳聾的有效驗(yàn)方，用之老年性聾療效頗佳[6]。該方以填精充髓，補(bǔ)益氣血，活血化瘀，通絡(luò)復(fù)聰為治則組方，療效顯著。周光源等[7]用復(fù)聰片治療中老年耳聾114例，并以耳聾左慈丸治療的78例作對(duì)照，結(jié)果，復(fù)聰片對(duì)耳骨導(dǎo)聽(tīng)閾的總有效率為83.9%，對(duì)病程中度患者的總有效率為88.3%，均明顯優(yōu)于對(duì)照組[7]。藥理研究表明：復(fù)聰片具有支持蝸內(nèi)神經(jīng)結(jié)構(gòu)的作用，這可能與促進(jìn)神經(jīng)生長(zhǎng)因子與其受體的結(jié)合以及通過(guò)保護(hù)毛細(xì)胞，間接促進(jìn)神經(jīng)生長(zhǎng)因子的產(chǎn)生有關(guān)[6]。徐紹勤等[8]對(duì)慶大霉素（GM）致豚鼠的耳毒性反應(yīng)進(jìn)行拮抗及治療研究。證實(shí)復(fù)聰片可減輕GM 的耳毒性反應(yīng)，保護(hù)耳蝸聽(tīng)毛細(xì)胞，拮抗GM 所致之聽(tīng)閾升高，電鏡觀察顯示毛細(xì)胞損害減輕。對(duì)已由GM 致聾的豚鼠，復(fù)聰片可促使受損毛細(xì)胞形態(tài)及功能在一定程度上恢復(fù)，有效降低GM耳中毒豚鼠聽(tīng)閾，阻止GM 停藥后遲發(fā)的聽(tīng)閾升高，表明復(fù)聰片對(duì)GM 所致的豚鼠耳中毒有一定的防治作用。彭斌等[9]報(bào)道，復(fù)聰片對(duì)老年大鼠聽(tīng)覺(jué)腦干誘發(fā)電位反應(yīng)閾（ABR）具有明顯抑制作用，復(fù)聰片與模型組比較，差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）[9]，復(fù)聰片對(duì)大鼠耳蝸核神經(jīng)元數(shù)量減少有明顯的抑制作用，且神經(jīng)細(xì)胞腫脹、胞核及胞漿皺縮等情況明顯較老年對(duì)照組為輕[10]。臨床與藥效試驗(yàn)均證實(shí)復(fù)聰片對(duì)老年性耳聾具有良好療效。

用醋酸乙酯-丁酮-甲醇-水（10∶1∶1∶1）作展開(kāi)劑，在20℃以上溫度展開(kāi)時(shí)，會(huì)出現(xiàn)拖尾現(xiàn)象。這主要是由于溫度升高使展開(kāi)劑黏度降低，致使展開(kāi)速度過(guò)快而導(dǎo)致。故薄層展開(kāi)的溫度應(yīng)控制在15℃左右最為適宜。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典[S].一部.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，20 10：674.

[2]高學(xué)敏.中藥學(xué)[M].北京：中國(guó)中醫(yī)藥出版社，2010：494-495.

[3]林昱，李新田，邱財(cái)榮，等.薄層掃描法測(cè)定接骨丹膠囊中士的寧[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2010，16（7）：53-54.

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[5]丁晨光，李修祿.淫羊藿生藥中淫羊藿苷的高效薄層掃描測(cè)定[J].藥物分析雜志，1991，11（1）：33-34.

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