范麗梅 徐立堃 張 蘭 胡春玲 林常青 李莉群

1.廣東省婦幼保健醫(yī)院，廣東廣州 511400；2.廣州中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院，廣東廣州 510405

妊娠膽汁淤積癥（intrahepatic cholestasis of pregnancy，ICP）是女性妊娠期間常見的并發(fā)癥，ICP 不僅引起孕婦肝臟功能損傷，膽汁酸的毒性作用也是不良妊娠結(jié)局的原因之一[1-2]。茵陳作為利濕退黃的中藥在ICP的治療中具有獨(dú)特的功效，茵陳中具有多種有效成分，其中茵陳多糖是具有生物活性的組分之一[3]。本文就茵陳多糖對(duì)ICP大鼠肝臟氧化損傷的保護(hù)作用進(jìn)行研究。

1 材料與方法

1.1 藥品與儀器

茵陳多糖（課題組萃取提純），超氧化物歧化酶（erythrocuprein，SOD）、丙二醛（malonaldehyde，MDA）、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶 （glutathione peroxidase，GPx）、 過(guò)氧化氫酶（catalase，CAT）檢測(cè)試劑盒（南京建成生物功臣研究所），分光光度計(jì)（常州醫(yī)用儀器廠）。

1.2 動(dòng)物造模及干預(yù)

32只雌性清潔級(jí)SD大鼠由南方醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，鼠齡 6～8 周，體重（180 ±25）g，采用隨機(jī)數(shù)字表法將其分為對(duì)照組、模型組、低劑量組及高劑量組，每組8只，分籠飼養(yǎng)，間斷光照，定量給食，自由飲水。大鼠適應(yīng)環(huán)境后模型組、低劑量組及高劑量組采用苯甲酸雌二醇注射法建立妊娠膽汁淤積大鼠模型，5 mg/kg 苯甲酸雌二醇（1 mg/mL）頸部皮下注射，對(duì)照組大鼠給予等劑量生理鹽頸部皮下注射，7d后模型組、低劑量組及高劑量組大鼠毛皮黃染表示造模成功。高劑量組[100mg/（kg·d），100 mg/mL]及低劑量[50mg/（kg·d），50 mg/mL]別給予茵陳多糖生理鹽水溶液腹腔注射，對(duì)照組及模型組每日腹腔注射等體積生理鹽水，連續(xù)7d。

1.3 標(biāo)本采集

茵陳多糖及生理鹽水干預(yù)7d后在氯胺酮麻醉下開胸剪開心臟采集血液標(biāo)本，低溫分離血清，深低溫凍存。開腹采集肝臟中葉組織標(biāo)本，制備組織勻漿。

1.4 肝組織勻漿制備

大鼠肝臟組織標(biāo)本冰鹽水漂洗、剪碎，制備組織勻漿，勻漿介質(zhì)為蒸餾水1 000 mL pH 7.4，EDTA-2Na 0.01 mol/L，Tris-HCL 0.1 mmol/L，0.8%NaCl 溶液，蔗糖 0.01 mmol/L，組織勻漿后低溫高速離心，留取上清液待測(cè)。

1.5 標(biāo)本檢測(cè)

大鼠冰凍血清解溶后采用自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶（alanine aminotransferase，ALT）、 谷草轉(zhuǎn)氨酶（aspartate aminotransferase，AST）、堿性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP）、直接膽紅素（direct bilirubin， DBIL）及間接膽紅素（indirect bilirubin，IBLI）水平。肝組織勻漿上清液采用比色法檢測(cè) SOD、MDA、GPx，、CAT 濃度，標(biāo)準(zhǔn)品繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，依據(jù)濃度曲線計(jì)算樣品濃度，檢測(cè)過(guò)程嚴(yán)格按照試劑使用說(shuō)明書進(jìn)行。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 11.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，多組間比較采用方差分析，組間兩兩比較采用q檢驗(yàn)，以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠肝功能生化指標(biāo)比較

模型組大鼠血清 ALT、AST、ALP、DBIL 及 IBLI水平均高于對(duì)照組（均P＜0.05）；低劑量組及高劑量組大鼠血清ALT、AST、ALP、DBIL 及IBLI水平均低于模型組， 高于對(duì)照組（均P＜0.05）， 低劑量組大鼠血清 ALT、AST、ALP、DBIL 及IBLI水平均高于高劑量組（均P＜0.05）。見表1。

2.2 各組大鼠肝組織氧化還原酶系活力比較

低劑量組及高劑量組大鼠肝組織勻漿MDA 活力均高于對(duì)照組（P＜0.05），低于模型組（P＜0.05）；低劑量組肝組織勻漿MDA 活力高于高劑量組（P＜0.05）；低劑量組及高劑量組大鼠肝組織勻漿SOD、GPx，、CAT 活力高于模型組（P＜0.05），低于對(duì)照組（P＜0.05）；低劑量組肝組織勻漿 SOD、GPx，、CAT 活力低于高劑量組（P＜0.05）。見表2。

3 討論

ICP是一種在妊娠中晚期出現(xiàn)，以皮膚瘙癢及黃疸為特點(diǎn)的妊娠期并發(fā)癥。ICP的發(fā)病與多種因素有關(guān)，近年來(lái)的研究結(jié)果顯示，遺傳易感性、內(nèi)分泌激素代謝異常及免疫功能異常等均參與ICP的發(fā)病[4-5]。ICP的發(fā)生有地域、種族及家族聚集傾向，肝毛細(xì)膽管轉(zhuǎn)運(yùn)器突變基因以及酶類表達(dá)異常等均參與發(fā)病。在妊娠期雌激素水平上升引起肝細(xì)胞的能量代謝障礙，能夠?qū)е录?xì)胞膜的流動(dòng)性下降及膽鹽代謝障礙，雌激素受體也能夠同膽汁酸競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合轉(zhuǎn)運(yùn)載體，同時(shí)膽管系統(tǒng)的通透性升高，引起膽汁的淤積及返流，導(dǎo)致膽汁淤積[6-7]。

表1 各組大鼠血清ALT、AST、ALP、DBIL及IBLI水平比較（±s）

表1 各組大鼠血清ALT、AST、ALP、DBIL及IBLI水平比較（±s）

注：與對(duì)照組比較，＃P＜0.05，與模型組比較，※P＜0.05，與高劑量組比較，＊P＜0.05；ALT：谷丙轉(zhuǎn)氨酶；AST：谷草轉(zhuǎn)氨酶；ALP：堿性磷酸酶；DBIL：直接膽紅素；IBLI：間接膽紅素

組別 只數(shù) ALT（U/L）AST（U/L）ALP（U/L）DBIL（μmol/L）IBIL（μmol/L）對(duì)照組模型組高劑量組低劑量組F值P值8888 29.6±7.6 204.2±37.5＃58.2±7.6?！?04.5±7.2?！?02.6＜0.05 72.4 ±19.4 257.4±40.2＃57.4 ±8.9?！?17.8±18.6?！?5.4＜0.05 96.4±22.0 406.2±37.8＃129.5±15.0?！?16.7 ±30.4?！?7.5＜0.05 4.2±1.2 28.6±5.9＃11.4±2.7＃※19.5±3.2?！?8.6＜0.05 3.7 ±1.6 39.2±8.4＃12.6±3.1?！?4.3±4.7?！?1.8＜0.05

表2 各組大鼠肝組織 SOD、MDA、GPx，、CAT 活力比較（±s）

表2 各組大鼠肝組織 SOD、MDA、GPx，、CAT 活力比較（±s）

注：與對(duì)照組比較，＃P＜0.05，與模型組比較，※P＜0.05，與高劑量組比較，＊P＜0.05；SOD：超氧化物歧化酶；MDA：丙二醛；GPx：谷胱甘肽過(guò)氧化物酶；CAT：過(guò)氧化氫酶

組別 只數(shù) SOD（nmol/mL）MDA（nmol/mL）GPx（nmol/mL）CAT（nmol/mL）對(duì)照組模型組高劑量組低劑量組F值P值8888 162.3±22.4 22.9±5.2＃82.9 ±13.4?！?7.6 ±10.9＃※＊18.2＜0.05 4.6±1.0 18.2±4.1＃7.6 ±2.5?！?1.0 ±2.2＃※＊22.6＜0.05 40.2 ±12.5 11.8±3.6＃34.6 ±7.0?！?9.2 ±4.4?！?27.9＜0.05 16.8±4.3 4.2±1.3＃14.6±1.7?！?.8 ±2.1?！?1.6＜0.05

ICP 不僅對(duì)母體的多器官功能損害，高膽紅素血癥也是引起流產(chǎn)、死胎等不良妊娠結(jié)局的原因之一[8]。ICP的發(fā)病機(jī)制目前尚不完全清楚，保肝、退黃等對(duì)癥治療是目前的主要治療措施。中醫(yī)藥在ICP的治療中具有獨(dú)特的療效，茵陳是退黃的主要藥物之一，大部分治療ICP的中藥方劑中都以茵陳為主要組分。伴隨現(xiàn)代藥理學(xué)的發(fā)展，中藥的組分及其藥理、藥效的研究不斷深入，發(fā)現(xiàn)茵陳中含有80 余種有效成分[9]，包括酮類、萜類、多糖類等組分，其中，多糖是茵陳中含量較高的組分，也是有效的藥用成分之一。

本研究采用茵陳多糖對(duì)妊娠膽汁淤積大鼠模型干預(yù)結(jié)果顯示，妊娠膽汁淤積大鼠模型給予茵陳多糖干預(yù)后，AST、ALT 及ALP水平較模型組降低，大鼠的黃疸減輕，IBIL 及DBIL水平較模型組亦降低，提示妊娠膽汁淤積大鼠的肝臟損傷及膽汁淤積均獲得明顯改善，并且呈現(xiàn)明顯的劑量依賴性，高劑量組的改善效果優(yōu)于低劑量組。對(duì)茵陳多糖改善膽汁淤積大鼠肝臟功能及瘀膽的原因進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，在高、低劑量組，大鼠肝組織勻漿還原酶系SOD、GPx 及CAT的活力明顯高于模型組，而氧化酶系MDA的活力低于模型組，提示茵陳多糖能夠減輕妊娠膽汁淤積大鼠的肝臟氧化損傷，并且伴隨劑量提高改善效果。既往研究結(jié)果顯示，植物多糖具有強(qiáng)大的抗氧化功能[10]。茵陳的多糖組分具有抗氧化作用，能夠清除氧自由基，減少組織及細(xì)胞的氧化損傷[11]。對(duì)梗阻性黃疸大鼠的研究發(fā)現(xiàn)，茵陳多糖能夠減輕膽汁淤積所致的肝臟氧化損傷[12]，改善肝臟功能，其對(duì)氧化損傷的拮抗作用可能是茵陳多糖改善妊娠膽汁淤積大鼠肝臟功能損傷的機(jī)制之一。

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