盧偉波， 趙子文， 鐘維農(nóng)， 趙祝香， 李裕軍， 方昌全

(廣州醫(yī)學(xué)院附屬廣州市第一人民醫(yī)院呼吸內(nèi)科，廣東廣州510180)

重癥肺炎是呼吸科臨床常見的危重疾病，動物模型的成功制備對該病的發(fā)病機(jī)制和臨床研究有重要意義。但文獻(xiàn)報道的重癥肺炎動物模型很少，有Sprague-Dawley(SD)大鼠模型［1］，也有 Piglet小豬模型［2］;而且都存在一定缺陷，前者不能對患病大鼠進(jìn)行實時大鼠血氧情況監(jiān)測，后者實驗過程復(fù)雜，設(shè)備要求高等。本研究擬在原報道的SD大鼠模型的基礎(chǔ)上進(jìn)行改良，采用無創(chuàng)動脈血氧飽和度儀監(jiān)測大鼠血氧飽和度(oxygen saturation，SaO2)情況，尋求更為理想的重癥肺炎動物模型，并提出重癥肺炎動物模型的診斷標(biāo)準(zhǔn)。

材料和方法

1 材料

1.1 病原 肺炎克雷伯桿菌標(biāo)準(zhǔn)株(ATCC700603)由廣州市第一人民醫(yī)院檢驗科細(xì)菌室提供。實驗前1 d將菌株接種于羊血瓊脂糖平板上，于CO2恒溫培養(yǎng)箱中37℃培養(yǎng)18～24 h后，收集細(xì)菌。根據(jù)比濁法，用無菌生理鹽水將其稀釋成含菌量400個麥?zhǔn)蠞岫葐挝?相當(dāng)于1.2×1014CFU/L，1個麥?zhǔn)蠞岫葐挝?3×1011CFU/L)和3個麥?zhǔn)蠞岫葐挝坏幕鞈乙簜溆谩?/p>

1.2 主要儀器 生物梅里埃細(xì)菌比濁計(法國生物梅里埃公司);邁瑞PM-50掌式血氧飽和度監(jiān)測儀，邁瑞新生兒包裹血氧傳感器518B64-4(深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司);i-STAT(300型)血?dú)夥治鰞x(美國雅培公司);T1800血球分析儀(日本東亞公司);鄭州豪潤奇HRQ-A2獸用電子體溫計;美國INNOVET E7239X獸用 X光機(jī)，德國 PROTEC PROSCAN 35 CR機(jī)(華南農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)院提供)。

2 方法

2.1 動物與分組 健康SPF級雄性SD大鼠25只，鼠齡為6～8周，體重180～200 g，由廣東省實驗動物中心提供［使用許可證號為SCXK(粵)2008-0002，合格證編號 No.0100760］。隨機(jī)分為對照組、觀察組和模型組，對照組和觀察組各5只，模型組15只。不同組別，分籠飼養(yǎng)于廣州醫(yī)學(xué)院動物實驗中心恒溫(25℃)房間內(nèi)，光照和黑暗各12 h交替，自由進(jìn)食標(biāo)準(zhǔn)顆粒飼料及飲水，適應(yīng)環(huán)境7 d。

2.2 模型建立 腹腔注射10%水合氯醛(3 mL/kg)麻醉，麻醉后固定，頸部備皮消毒，無菌操作，切開頸部皮膚，暴露上段氣管，用24G的Y型靜脈留置針經(jīng)氣管插管，拔出針芯，使導(dǎo)管完全進(jìn)入氣管，由留置針白色帽端處注入。模型組注入含菌量為400個麥?zhǔn)蠞岫葐挝坏募?xì)菌混懸液0.35 mL，將固定大鼠的手術(shù)臺豎立起來后緩慢注射，每注射0.1 mL后豎立大鼠，左右旋轉(zhuǎn)大鼠固定臺1 min后再繼續(xù)。觀察組和對照組分別以相同方法注入含菌量為3個麥?zhǔn)蠞岫葐挝唬?］的細(xì)菌混懸液0.35mL和等量的無菌生理鹽水。接種完后繼續(xù)豎立大鼠固定臺，使大鼠先后分別保持直立位和倒立位各約2 min，盡量使菌液均勻分布于雙肺各個肺葉?？p合傷口，局部消毒。

2.3 建模成功診斷標(biāo)準(zhǔn) 參考2006年中華醫(yī)學(xué)會呼吸病分會發(fā)表的“社區(qū)獲得性肺炎診斷和治療指南”［4］和2007年美國感染疾病學(xué)會/美國胸科學(xué)會(Infectious Diseases Society of America/American Thoracic Society，IDSA/AT)發(fā)表的成人重癥獲得性肺炎診斷標(biāo)準(zhǔn)［5］，以及國外學(xué)者 Luna等［6］關(guān)于重癥耐甲氧西林金黃色葡萄球菌肺炎動物模型診斷標(biāo)準(zhǔn)，我們提出大鼠重癥肺炎模型成功的無創(chuàng)診斷標(biāo)準(zhǔn):(1)出現(xiàn)反應(yīng)遲鈍、呆滯等意識障礙表現(xiàn);(2)呼吸急促(可見雙側(cè)胸廓急速運(yùn)動);(3)嚴(yán)重的低氧血癥，SaO2＜90%或動脈血氧分壓≤60 mmHg;(4)胸部X線檢查出現(xiàn)兩肺彌漫性滲出影。

2.4 大鼠排除標(biāo)準(zhǔn)及宰殺時間 術(shù)后24 h內(nèi)死亡的排除出實驗，并被重新注菌的大鼠替代入組，進(jìn)行后續(xù)觀察。對照組和觀察組于術(shù)后72 h［3，7］時，模型組在達(dá)到預(yù)定的診斷標(biāo)準(zhǔn)后，腹腔注射10%水合氯醛(3 mL/kg)麻醉后，脊椎脫臼法處死大鼠。

2.5 相關(guān)觀察指標(biāo)

2.5.1 大鼠行為學(xué)觀察 觀察大鼠反應(yīng)情況，是否豎毛、嗜睡，觀察尿量和糞便變化，觀察鼻腔及眼眶有無分泌物、有無氣促，有無喘鳴音，觀察肢端皮膚顏色變化等。

2.5.2 體重變化監(jiān)測 術(shù)前3 d及術(shù)后每天固定于早上8點(diǎn)鐘測量大鼠體重變化，處死大鼠之前再一次記錄大鼠體重。

2.5.3 體溫及SaO2變化監(jiān)測 術(shù)前3 d及術(shù)后每6 h監(jiān)測大鼠體溫和SaO2。探測體溫時，操作時讓大鼠盡可能處于自然狀態(tài)，避免過于緊張，恐懼，用獸用電子體溫計軟頭部位插入直腸約5～8 cm。連續(xù)讀數(shù)3次后，取其平均值;測SaO2變化時，將動脈血氧飽和度儀傳感器包裹在大鼠右后肢膝關(guān)節(jié)以上腿部(剃去毛發(fā))，每次監(jiān)測3 min，取讀數(shù)穩(wěn)定≥30 s的值記錄為實測SaO2值。

2.5.4 血常規(guī)變化觀察 所有大鼠分別于術(shù)后的第24 h和處死前眼眶后靜脈叢取血，每次約收集0.1 mL行血常規(guī)分析，觀察白細(xì)胞計數(shù)，中性粒細(xì)胞計數(shù)百分比。

2.5.5 動脈血?dú)夥治?所有大鼠在處死前，麻醉后無菌操作分離腹主動脈，結(jié)扎動脈遠(yuǎn)端，取血約1 mL后立即用血?dú)夥治鰞x進(jìn)行血?dú)夥治觥?/p>

2.5.6 肺組織病理變化 實驗結(jié)束時，麻醉后處死所有大鼠，完整取下雙側(cè)肺組織，觀察肺組織大體變化情況。沿著氣管、血管走向，將其切成5～10 mm厚的小塊，保證肉眼可辨別支氣管、血管和肺實質(zhì);參考肺炎評分標(biāo)準(zhǔn)［8］，進(jìn)行肺組織大體病理學(xué)評分，0分:肺部沒有炎癥出現(xiàn);1分:支氣管出現(xiàn)膿性黏液栓，未出現(xiàn)管壁破壞;2分:支氣管炎，表現(xiàn)為膿性黏液栓并出現(xiàn)支氣管破壞;3分:肺炎，指次級肺段出現(xiàn)實變;4分:融合性肺炎，表現(xiàn)為相鄰幾個次級肺段出現(xiàn)實變;5分:化膿性肺炎，肺實變灶有膿性壞死物溢出。留取病灶較明顯的組織于4%甲醛溶液充分固定24 h后，常規(guī)脫水、透明、包埋、切片，蘇木精－伊紅(HE)染色后，病理顯微鏡下觀察組織變化。

2.5.7 胸部X線檢查 術(shù)后處死前隨機(jī)抓取對照組和觀察組鼠各2只，進(jìn)行胸部X線檢查。模型組大鼠在無創(chuàng)血氧飽和度儀測得數(shù)值小于90%時進(jìn)行。

3 統(tǒng)計學(xué)處理

采用SPSS 17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理，各組數(shù)據(jù)在分析前進(jìn)行正態(tài)性檢驗和方差齊性檢驗，正態(tài)分布數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±SD)表示，非正態(tài)分布數(shù)據(jù)用中位數(shù)表示。兩組均數(shù)比較采用t檢驗，多組均數(shù)比較采用單因素方差分析，兩樣本相關(guān)性分析采用Pearson相關(guān)分析;以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

結(jié) 果

1 死亡現(xiàn)象

模型組1只在注菌過程中死亡;2只在注菌術(shù)后12 h突然死亡;這3只后來重新注菌后補(bǔ)做。15只大鼠存活時間＞24 h，在術(shù)后30～36 h及36～42 h分別自發(fā)死亡1只，42～48 h和48～54 h之間各有2只自發(fā)死亡;其余9只大鼠分別在36 h時處死2只，42 h時處死1只，48 h處死3只，54 h處死1只，66 h處死2只。對照組和觀察組大鼠在實驗期間未出現(xiàn)自發(fā)死亡現(xiàn)象。

2 行為學(xué)變化

模型組大鼠在注菌后的前24 h，活動明顯減弱，蜷縮于鼠籠一側(cè)，反應(yīng)遲鈍，鼻腔和眼眶周邊可見少許分泌物，偶見豎毛，呼吸急促，雙側(cè)胸廓呼吸動度增強(qiáng)，無發(fā)紺，鼠籠中糞便少，墊料干潔。24～48 h，出現(xiàn)大鼠死亡，存活者出現(xiàn)嗜睡，體型較前瘦小，鼻腔及眼眶分泌物增多，呼吸急促情況較前明顯，有些能聞及喘鳴音，偶可見大鼠排稀爛樣便;第48 h后，存活大鼠眼眶和鼻腔分泌物減少，呼吸急促，有喘鳴音，可見大鼠四肢及陰囊出現(xiàn)紫紺，豎毛明顯，觸摸之覺背部肌肉松垮。觀察組在前24 h，可見大鼠活動及進(jìn)食減少、蜷縮，呼吸頻率增多等，但逐漸好轉(zhuǎn)，到72 h處死前，未見明顯行為學(xué)異常;對照組活動自如，反應(yīng)靈敏，無氣促，無喘鳴音，無異常分泌物，無嗜睡，大便形狀正常。

3 體重變化

術(shù)前3組大鼠體重?zé)o降低，每天增加(5±3)g，術(shù)前3 d共增加(20±5)g。模型組術(shù)后第1 d下降明顯，約下降(12±3)g，存活大鼠第2、3 d體重下降減緩，為(6±2)g;處死時體重較注菌前下降(25±5)g。觀察組術(shù)后1 d體重基本不變，處死前約增加(10±3)g。對照組體重變化趨勢如術(shù)前。處死前各組進(jìn)行體重比較，均有顯著差異(P＜0.05)。

4 體溫變化

術(shù)前3組大鼠體溫?zé)o明顯差異(P＞0.05)，波動于(37.8±0.5)℃。術(shù)后6 h即開始出現(xiàn)體溫下降，模型組為(34.5±0.5)℃，觀察組(34.7±0.3)℃，對照組為(35.2±0.8)℃，爾后3組大鼠體溫逐漸回升，注菌后 24 h，模型組(36.7±1.0)℃，觀察組(36.9±0.7)℃，對照組(37.8±0.5)℃之間，觀察組和模型組比較，未見明顯差異(P＞0.05)，觀察組、模型組與對照組相比，可見顯著差異(P＜0.05)。處死前各組體溫為:模型組(37.7±0.5)℃，觀察組(37.9±0.4)℃，對照組(38.0±0.5)℃，3組大鼠組間比較，均未見明顯差異(P＞0.05)見圖1。

Figure 1.Temperature comparison of the three groups at different time points.圖1 各組大鼠術(shù)后體溫變化曲線

5 無創(chuàng)SaO2變化

術(shù)前3組大鼠無創(chuàng)方法測得SaO2無明顯差異(P＞0.05)，波動在(94～100)%之間。模型組在注菌后的24 h內(nèi)，無明顯下降;術(shù)后第24 h開始下降，為(91±3)%。術(shù)后第36～66 h之間，模型組大鼠陸續(xù)出現(xiàn) SaO2明顯下降，波動于(83.5±3.5)%。對照組及觀察組手術(shù)前后無明顯變化(P＞0.05);模型組分別與觀察組和對照組進(jìn)行比較，均有顯著差異(P ＜0.05)。

6 血常規(guī)變化

對照組觀察不同時點(diǎn)，血常規(guī)觀察指標(biāo)未見明顯差異(P＞0.05)。觀察組和模型組在術(shù)后第24 h和處死時白細(xì)胞和中性粒細(xì)胞計數(shù)、中性粒細(xì)胞百分?jǐn)?shù)逐漸升高，尤以模型組變化明顯;觀察組、模型組分別與對照組比較，均有顯著差異(P＜0.05);觀察組和模型組組間、不同時點(diǎn)比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P ＜0.05)，見表1。

表1 3組大鼠不同時間外周血血常規(guī)變化情況Table 1.Peripheral blood changes in each group at different time points(mean±SD)

7 動脈血?dú)夥治霰容^

與對照組和觀察組相比，模型組在術(shù)后處死前動脈血氧飽和度、動脈血氧分壓和二氧化碳分壓下降明顯，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);觀察組和對照組比較無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，見表2。

表2 處死前各組大鼠動脈血?dú)夥治鼋Y(jié)果Table 2.Arterial blood gas analysis in each group when sacrificed(mean±SD)

8 處死前血氧飽和度儀讀數(shù)和動脈血?dú)夥治鲋醒躏柡投戎迪嚓P(guān)性分析

血氧飽和度儀讀數(shù)和動脈血?dú)夥治鲋醒躏柡投戎党示€性趨勢，Pearson相關(guān)系數(shù)r=0.977(P＜0.01)，具有統(tǒng)計學(xué)意義。兩者幾乎表達(dá)于同一線上，見圖2。

Figure 2.Distribution of SaO2detected by the two different methods.They are almost on the same line.圖2 所有大鼠分別用無創(chuàng)血氧飽和度儀和有創(chuàng)動脈血?dú)夥治龅玫降?組SaO2值分布曲線圖

9 各組大鼠胸部X線照片變化

對照組大鼠胸片無明顯異常，雙肺肺紋理清晰，無增粗，未見實變影，未見浸潤陰影，雙側(cè)肺門清晰，雙側(cè)肋隔角銳利，雙側(cè)膈面光滑低平;觀察組大鼠雙肺透亮度減低，肺紋理稍粗亂，雙肺散在少量小斑片影，邊界稍模糊;模型組大鼠見雙肺透亮度劇降，雙下肺可見散在斑片狀模糊影，整個肺野為“大白肺”，見圖3。

Figure 3.Changes of chest X-ray of the rats in the three groups when sacrificed.A:control group;B:observation group;C:model group.圖3 各組大鼠胸部X光片結(jié)果

10 大鼠雙肺組織病理學(xué)變化

肺組織大體如圖4:對照組雙側(cè)肺組織表面光滑，顏色粉紅，無出血點(diǎn)，無浸潤灶，質(zhì)地軟嫩，彈性良好;觀察組大部分肺組織光滑，偶見小片實變灶，包膜有充血，未見化膿灶;模型組雙側(cè)肺組織不同肺葉均出現(xiàn)散在的出血點(diǎn)，肺包膜下充血明顯，肺組織呈暗紅色，有大片實變灶，甚至可見化膿灶，肺組織彈性差，觸摸之有實質(zhì)感;肺組織大體評分:每只大鼠有5個肺葉(左側(cè)1個，右側(cè)4個)，根據(jù)肺炎分級標(biāo)準(zhǔn)［8］，對每個肺葉進(jìn)行評分。其中，模型組大鼠多個肺葉達(dá)到3分及以上改變，具體見表3。肺組織病理切片HE染色，鏡下見對照組大鼠肺組織形態(tài)正常，肺泡結(jié)構(gòu)完整，肺泡腔內(nèi)無炎性滲出物浸潤，肺泡間質(zhì)無充血，水腫;觀察組大鼠肺泡結(jié)構(gòu)不一，肺泡間隔增寬、斷裂，肺泡間隔內(nèi)血管充血，可見紅細(xì)胞和炎癥細(xì)胞浸潤;模型組大鼠僅見少量完整肺泡，余肺泡結(jié)構(gòu)破壞，腔內(nèi)見漿液性滲出物，少量紅細(xì)胞，大量中性粒細(xì)胞和肺泡巨噬細(xì)胞浸潤，甚至肺泡腔完全實變，見圖5。

Figure 4.Pathological changes of rat lung tissues in the three groups.A:control group;B:observation group;C:model group.圖4 各組大鼠肺組織大體變化

表3 3組大鼠肺葉組織大體評分Table 3.Lung pathology score of the three groups of rats

Figure 5.HE staining changes of lung tissue under microscope(×200).A:control group;B:observation group;C:model group.圖5 各組大鼠鏡下肺組織病理改變

討 論

重癥肺炎是呼吸科臨床常見的危重癥疾患，除外肺炎常見的呼吸系統(tǒng)臨床表現(xiàn)外，常伴有急性呼吸衰竭、嚴(yán)重的中毒癥狀和(或)膿毒性休克，甚至多器官功能衰竭綜合征等危及生命的并發(fā)癥［9］。盡管近年來醫(yī)療設(shè)備和搶救技術(shù)水平不斷提高，許多廣譜、高效抗生素相繼問世，其臨床治療效果仍不理想，在重癥監(jiān)護(hù)病房的死亡率在28% ～50%之間［10］，并沒有下降的趨勢［11］。故重癥肺炎動物模型的成功制備對該病發(fā)病機(jī)制和臨床研究有重要意義。然而，國內(nèi)外關(guān)于重癥肺炎動物模型建立的文章較少。陳業(yè)民等［1］于2005年建立了肺炎克雷伯桿菌重癥肺炎動物模型。該模型中將濃度為3個麥?zhǔn)蠞岫葐挝坏姆窝卓死撞畻U菌懸液，通過暴露氣管、穿刺氣管注射的方式注入肺內(nèi)，于注菌后第5、6 d模型建立成功。而國外學(xué)者Luna等［2］于2007年利用Piglet小豬建立了第一個銅綠假單胞菌重癥肺炎模型。該模型是模擬呼吸機(jī)獲得性肺炎模型改良的，需要在配備有心血管監(jiān)視器、呼吸機(jī)、電子輸注泵的重癥監(jiān)護(hù)實驗室進(jìn)行，對小豬行氣管插管，股動、靜脈插管和膀胱插管等，通過支氣管纖維內(nèi)窺鏡把銅綠假單胞菌懸液均勻地分布到雙肺的各個肺葉中，實驗過程中需要為實驗小豬提供24 h的照顧。這2個模型雖然都得到一些應(yīng)用［6，12］，但仍有較多不足。前者在模型的建立過程中，大鼠發(fā)病較慢，且未見有大鼠死亡的報道，這與臨床上重癥肺炎患者的病情快速變化和高死亡率并不相符;并且需通過有創(chuàng)暴露腹主動脈或頸內(nèi)動脈取血來監(jiān)測血氧飽和度變化，導(dǎo)致大鼠死亡，對后續(xù)的實驗觀察帶來不便;后者實驗雖然較為精細(xì)，但設(shè)備要求高，操作繁瑣，況且該模型一開始即給予呼吸機(jī)通氣支持，與臨床上重癥肺炎發(fā)病相悖，對重癥肺炎的發(fā)病機(jī)制研究將產(chǎn)生一定的影響。因此，探討建立病情發(fā)展較快，更接近臨床重癥肺炎患者的大鼠模型和更為簡單的模型診斷標(biāo)準(zhǔn)，尤為重要。

在預(yù)實驗中，我們對細(xì)菌濃度、用量和注菌方式進(jìn)行深入探索，最終確定濃度為400個麥?zhǔn)蠞岫葐挝坏募?xì)菌懸液0.35 mL對6～8周的200 g左右的SD大鼠是比較理想的:既不會因為菌液過少，導(dǎo)致大鼠對感染的耐受;也不會因為濃度過高，導(dǎo)致菌液黏稠，堵塞呼吸道，造成模型大鼠術(shù)中死亡。注菌時，通過旋轉(zhuǎn)、交替豎立和倒立大鼠手術(shù)固定臺的方法，可以使菌液較均勻地分布到各個肺葉。通過用24G的Y型靜脈留置針經(jīng)氣管插管，拔出針芯，使導(dǎo)管完全進(jìn)入氣管后注菌的方法，可以避免普通的1 mL注射器穿透氣管，造成菌液外露;而且導(dǎo)管更深入地進(jìn)入氣管，菌液可以快速達(dá)到肺氣管，避免菌液堵塞下段氣管，造成大鼠窒息。另一方面，我們也探討了無創(chuàng)動脈血氧飽和度儀監(jiān)測大鼠動脈血氧飽和度的方法，并證明其跟有創(chuàng)的動脈血?dú)夥治鏊玫降难躏柡投染哂懈叨鹊囊恢滦?，可用于監(jiān)測大鼠動脈血氧飽和度。但因為大鼠體表毛發(fā)和肢端形體較不規(guī)則，可能會對血氧飽和度儀傳感器的敏感性產(chǎn)生一定的影響。因此，測量的時候，需要對毛發(fā)進(jìn)行處理，并選擇敏感性較強(qiáng)的傳感器，而且要等到血氧飽和度儀器讀數(shù)較穩(wěn)定后才能取值記錄。

實驗中，我們通過連續(xù)對3組大鼠無創(chuàng)監(jiān)測血氧飽和度，當(dāng)出現(xiàn)SaO2＜90%時，觀察其神智反應(yīng)、呼吸頻率和胸部X線變化。如果都達(dá)到預(yù)定的標(biāo)準(zhǔn)，則認(rèn)為該大鼠建模成功，立即處死建模成功大鼠，研究其血常規(guī)，血?dú)庾兓筒±斫M織變化。在實驗觀察周期內(nèi)，對照組和觀察組大鼠無一出現(xiàn)SaO2＜90%。而模型組大鼠在不同的時點(diǎn)內(nèi)達(dá)到建模成功的標(biāo)準(zhǔn)，最快在注菌后的36 h出現(xiàn)，最遲在66 h建模成功，有6只大鼠出現(xiàn)自發(fā)死亡，自發(fā)死亡率為40%。與對照組和觀察組相比，模型組大鼠出現(xiàn)反應(yīng)遲鈍、呆滯等神智變化;鼻腔和眼眶出現(xiàn)分泌物，呼吸急促，四肢及陰囊部位出現(xiàn)紫紺，尿量、糞便減少，體重明顯減輕，可能與重癥肺炎大鼠肺部感染后出現(xiàn)的呼吸衰竭和并發(fā)的腎功能損害、消化道功能紊亂有關(guān)。術(shù)后24 h和處死前血常規(guī)檢查中，模型組白細(xì)胞計數(shù)、中性粒細(xì)胞計數(shù)及其百分?jǐn)?shù)升高較為明顯，這與我們前面對重癥肺炎患者的研究結(jié)果相一致［13］。處死前動脈血?dú)夥治鍪敬笫筇幱诤粑ソ郀顟B(tài)，血氧飽和度值與無創(chuàng)血氧飽和度儀讀數(shù)相一致。組織病理學(xué)方面，肺組織大體表現(xiàn)為雙側(cè)多個肺葉出現(xiàn)大片實變灶，甚至出現(xiàn)化膿性病灶，與臨床重癥肺炎患者多肺葉病變相似;鏡下見肺泡結(jié)構(gòu)破壞和大量的中性粒細(xì)胞、肺泡巨噬細(xì)胞浸潤。

綜上模型組大鼠行為學(xué)變化，體重變化，血常規(guī)檢查，血?dú)夥治鰴z查和肺組織病理學(xué)變化等結(jié)果，我們認(rèn)為達(dá)到預(yù)定診斷標(biāo)準(zhǔn)的大鼠發(fā)病癥狀與臨床上重癥肺炎患者的發(fā)病情況相類似。因此，通過該方法能成功建立重癥肺炎大鼠模型，該方法是建立重癥肺炎的合適方法。我們擬定的重癥肺炎動物診斷標(biāo)準(zhǔn)，可以用于建立動物模型時，對成功模型的篩選;另一方面，無創(chuàng)動脈血氧飽和度儀可以用于監(jiān)測大鼠動脈血?dú)庾兓?，有助于對大鼠肢端血氧情況實時監(jiān)測，大致判斷大鼠病情的變化。

實驗中，各組大鼠體溫在術(shù)后即出現(xiàn)下降，而后逐漸上升，至術(shù)后24 h時大致恢復(fù)正常，可能跟手術(shù)麻醉藥的使用和肺炎克雷伯桿菌的定植和入侵有關(guān);但我們并沒有發(fā)現(xiàn)大鼠感染后體溫上升這一現(xiàn)象，是不是跟大鼠本身體溫調(diào)節(jié)中樞有關(guān)，或是其它原因，還有待進(jìn)一步研究。

［1］ 陳業(yè)民，黃文杰，李勝利，等.肺炎克雷伯菌致大鼠重癥肺炎模型的建立［J］.第一軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報，2005，25(12):1498-1552.

［2］ Luna CM，Baquero S，Gando S，et al.Experimental severe Pseudomonas aeruginosa pneumonia and antibiotic therapy in piglets receiving mechanical ventilation［J］.Chest，2007，132(2):523-531.

［3］ 羅 源，劉朝暉，樊建勇，等.β-防御素-2 mRNA在大鼠肺炎中的表達(dá)及與白介素17F的關(guān)系［J］.國際呼吸雜志，2011，31(2):94-98.

［4］ 中華醫(yī)學(xué)會呼吸病分會.社區(qū)獲得性肺炎診斷和治療指南［J］.中華結(jié)核和呼吸雜志，2006，29(10):651-655.

［5］ Mandell LA，Wunderink RG，Anzueto A，et al.Infectious Diseases Society of America/American Thoracic Society consensus guidelines on the management of community-acquired pneumonia in adults［J］.Clin Infect Dis，2007，44(Suppl 2):S27-S72.

［6］ Luna CM，Bruno DA，García-Morato J，et al.Effect of linezolid compared with glycopeptides in methicillin-resistant Staphylococcus aureus severe pneumonia in piglets［J］.Chest，2009，135(6):1564-1571.

［7］ Yadav V，Sharma S，Harjai K，et al.Induction and resolution of lobar pneumonia following intranasal instillation with Klebsiella pneumoniae in mice［J］.Indian J Med Res，2003，118:47-52.

［8］ Marquette CH，Copin MC，Wallet F，et al.Diagnostic tests for pneumonia in ventilated patients:prospective evaluation of diagnostic accuracy using histology as a diagnostic gold standard［J］.Am J Respir Crit Care Med，1995，151(6):1878-1888.

［9］ Ewig S，Woodhead M，Torres A.Towards a sensible comprehension of severe community-acquired pneumonia［J］.Intensive Care Med，2011，37(2):214-223.

［10］ Restrepo MI，Anzueto A.Severe community-acquired pneumonia［J］.Infect Dis Clin North Am，2009，23(3):503-520.

［11］ Suberviola B，Castellanos-Ortega A，Llorca J，et al.Prognostic value of proadrenomedullin in severe sepsis and septic shock patients with community-acquired pneumonia［J］.Swiss Med Wkly，2012，142:w13542.

［12］ 陳業(yè)民，黃文杰，李勝利，等.重癥肺炎大鼠干擾素-γ、白細(xì)胞介素-6和腫瘤壞死因子-α含量變化［J］.中國病理生理雜志，2007，23(3):492-494.

［13］ 蔣明彥，趙子文，鐘維農(nóng)，等.重癥肺炎患者外周血細(xì)胞計數(shù)與預(yù)后［J］.中國醫(yī)師雜志，2008，10(10):1386-1388.