武密山， 趙素芝， 任立中， 王 茹， 白 霞， 韓紅偉， 李 彬

(1.河北醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)學(xué)院方劑學(xué)教研室，河北 石家莊050091;2.石家莊市橋東區(qū)醫(yī)院，河北石家莊050041;3.河北醫(yī)科大學(xué)第一醫(yī)院骨科，河北石家莊050031;4.河北醫(yī)科大學(xué)生物化學(xué)教研室，河北石家莊050017)

骨質(zhì)疏松癥 (Osteoporosis)是以骨量減少、骨組織顯微結(jié)構(gòu)退化 (松質(zhì)骨骨小梁變細、斷裂、數(shù)量減少，皮質(zhì)骨多孔、變薄)為特征，以致骨的脆性增高及骨折危險性增加的一種全身骨病。本課題組前期研究表明，由淫羊藿、骨碎補、菟絲子、補骨脂等組成的補腎方藥在抑制骨丟失，改善骨密度，增強骨生物力學(xué)抗壓性能方面有明顯療效［1-7］。打老兒丸來源于《萬氏家抄方·卷四》，功用滋陰補陽，強壯筋骨，主治五勞七傷，陽事不舉，真氣衰弱，精神短少，小便無度，眼目昏花，腰膝疼痛，兩腳麻冷，不能行走。本實驗將課題組前期研究成果與打老兒丸配伍組成密骨打老兒丸，采取切除卵巢建立骨質(zhì)疏松模型，用骨組織形態(tài)計量學(xué)、骨生物力學(xué)等方法探討密骨打老兒丸防治去卵巢骨質(zhì)疏松大鼠骨丟失和骨質(zhì)量下降的作用及機理。

1 材料與儀器

1.1 動物 3月齡SPF級雌性SD大鼠共60只，體質(zhì)量 (265±15)g，實驗動物由河北省實驗動物中心提供 ［許可證號:SCXK(冀)2003-1-003］。

1.2 儀器與試劑 慢速鋸 (美國 Buehler公司產(chǎn)品);硬組織切片機及鎢剛刀 (德國Leica公司產(chǎn)品);NGS—10KNG電子萬能精密材料試驗機(日本島津公司產(chǎn)品);自動化圖像數(shù)字化分析儀包括光鏡和熒光顯微鏡 (日本 Nikon公司產(chǎn)品);Labconco冰凍真空干燥儀 (法國 LEGO公司產(chǎn)品);960型熒光分光光度計、AE100電子天平(中國伯樂公司產(chǎn)品);火焰原子吸收分光光度計(日本島津公司產(chǎn)品);J2—SH高速冰凍離心機(中國杭州華亭公司產(chǎn)品);Lunar—XR型雙能X線骨密度測定儀 (美國Lunar公司產(chǎn)品);ALCYON 300i型全自動生化儀 (美國Abbott Laboratories公司產(chǎn)品);D—800 LS智能藥物溶出儀 (天津大學(xué)無線電公司產(chǎn)品);大鼠代謝籠 (意大利TECN IPLAST公司產(chǎn)品);鹽酸四環(huán)素及鈣黃綠素 (美國Sigma公司產(chǎn)品);17β-雌二醇 (Sigma公司產(chǎn)品)，鈣、磷試劑盒、肌酐試劑盒、堿性磷酸酶 (alkaline phosphatase，ALP)檢測試劑盒 (中生北控生物科技股份有限公司產(chǎn)品);脫氧吡啶酚ELISA試劑盒 (美國Quidel Corporation公司產(chǎn)品)。

1.3 中藥制備 打老兒丸來源于《萬氏家抄方·卷四》，組成為石菖蒲、干山藥、川牛膝、遠志、巴戟天、川續(xù)斷、五味子、楮實子、杜仲、山萸肉、茯神、熟地黃、小茴香、肉蓯蓉、枸杞子各等份。打老兒丸加上本課題組的前期成果［1，4-6］淫羊藿、骨碎補、菟絲子、補骨脂各等份組成密骨打老兒丸。飲片一次性購自石家莊市樂仁堂，按處方配伍后，加8倍量水，共同浸泡40min，煮沸后文火煎煮60 min，濾出藥液;藥渣加2倍水量繼續(xù)煎煮40 min，合并兩次濾液，水浴濃縮，每1 mL藥液含生藥5.5 g，相當(dāng)于臨床用量的20倍。高劑量密骨打老兒丸灌胃劑量為5 mL/kg，低劑量密骨打老兒丸灌胃劑量為2.5 mL/kg。

2 方法

2.1 實驗造模與分組 健康3月齡SD雌性大鼠60只，隨機分為假手術(shù)組、模型組、雌二醇組、密骨打老兒丸低劑量組、密骨打老兒丸高劑量組，每組12只。將動物乙醚麻醉，腰背部兩側(cè)剪毛，75%乙醇消毒，假手術(shù)組大鼠背部切口，找到卵巢后，只切除少量脂肪組織后縫合;其他各組均參照本實驗室的背馱式方法［5］從背側(cè)切口摘除雙側(cè)卵巢，縫合傷口，然后涂以紅霉素軟膏抗感染，于卵巢切除1周后，給大鼠灌胃給藥。密骨打老兒丸低劑量組大鼠灌胃給予2.5 mL/kg密骨打老兒丸混懸液，密骨打老兒丸高劑量組大鼠灌胃給予5 mL/kg密骨打老兒丸混懸液，雌二醇組灌胃給予2 mg/kg雌二醇混懸液，假手術(shù)組和模型組灌胃給予等體積蒸餾水，每周記錄體質(zhì)量變化，連續(xù)給藥3個月。所有大鼠在處死前第4、第3天和第14、第13天分別皮下注射鹽酸四環(huán)素30mg/kg和鈣黃綠素5 mg/kg進行熒光標(biāo)記，實驗結(jié)束前1 d，收集大鼠24 h尿液，腹主動脈取血，然后處死動物，取出大鼠的第2、第4腰椎、脛骨和股骨，剔凈附著的軟組織和軟骨。

2.2 骨密度 (BMD)測定 取右側(cè)股骨，按文獻［9］分別測出股骨整體、股骨近端 (為股骨近側(cè)干骺端1/3)，股骨遠端 (為股骨遠側(cè)干骺端1/4)骨密度，最終以平均值計。

2.3 骨鈣 (b-Ca)、骨磷 (b-P)測定 取第2腰椎用10% 三氯醋酸3 mL脫鈣3次，每次24h，合并脫鈣液，取適量，用 EDTA法測鈣，計算單位骨體積的含鈣量;用硫酸亞鐵法測磷，計算單位骨體積的含磷量。

2.4 尿鈣 (u-Ca)、尿磷 (u-P)、尿脫氧吡啶酚(D-Pyr)和肌酐 (Cr)檢測 實驗結(jié)束前1 d，用大鼠代謝籠收集大鼠 24 h尿液，記錄尿量。用ELISA法測定尿中脫氧吡啶酚的量，用全自動生化分析儀測定尿中鈣、磷和肌酐的量。

2.5 血鈣 (s-Ca)、血磷 (s-P)和血清堿性磷酸酶 (ALP)分析 大鼠用乙醚麻醉后，腹主動脈取血，離心，分離血清，用全自動生化分析儀測定血清中鈣、磷和堿性磷酸酶的活性。

2.6 子宮 取出大鼠的子宮，迅速稱質(zhì)量，計算子宮臟器系數(shù)。

2.7 骨組織形態(tài)計量學(xué)靜態(tài)參數(shù)和動態(tài)參數(shù)的測定 大鼠處死后取左側(cè)脛骨，用慢速鋸沿額狀面鋸開脛骨粗隆，暴露骨髓腔，于脛骨近心端1/3處橫行鋸斷脛骨，即為脛骨上段。取脛骨上段按文獻［8］進行固定、脫水、包埋、切片，然后測量靜態(tài)參數(shù)骨組織總面積、骨小梁面積、骨小梁周長和動態(tài)參數(shù)單標(biāo)記周長、雙標(biāo)記周長、雙標(biāo)記間距，最后按公式［9］計算出相應(yīng)的靜態(tài)參數(shù)骨小梁厚度和動態(tài)參數(shù)標(biāo)記周長百分數(shù)、骨形成率 (BFR/BV為每年新形成的骨小梁面積占骨小梁總面積的百分比，代表骨形成和骨轉(zhuǎn)換的活躍程度，此參數(shù)越高，表示骨轉(zhuǎn)換越亢進;BFR/TV為每年新形成的骨小梁面積占骨組織面積的百分比，代表每年骨小梁表面新形成骨的總量)。

2.8 腰椎生物力學(xué)參數(shù)的測定 取第4腰椎，去除棘突和關(guān)節(jié)突，把兩端面磨平且與軸線垂直，根據(jù)浮力原理，測定腰椎體積，其體積和椎體高的比值作為椎體平均橫截面積，按文獻［12］進行椎體壓縮試驗，然后計算出生物力學(xué)參數(shù)彈性載荷 (N)、最大載荷 (N)、斷裂載荷 (N)、剛度 (N/mm)。

3 結(jié)果

3.1 對骨密度 (BMD)，骨鈣 (b-Ca)、骨磷 (b-P)的影響 見表 1。與假手術(shù)組比較，模型組BMD、b-Ca、b-P明顯降低 (P＜0.01)。與模型組相比，密骨打老兒丸高劑量組、密骨打老兒丸低劑量組、雌二醇組 BMD、b-Ca、b-P顯著增加 (P＜0.01)。

表1 對去卵巢骨質(zhì)疏松大鼠骨密度、骨鈣、骨磷的影響( ± s，n=12)Tab.1 Effects of M igu Dalao'er Pills on BMD in thighbone and calcium phosphorus in the second lum bar vertebra of ovariectom ized osteoporosis rats( ± s，n=12)

表1 對去卵巢骨質(zhì)疏松大鼠骨密度、骨鈣、骨磷的影響( ± s，n=12)Tab.1 Effects of M igu Dalao'er Pills on BMD in thighbone and calcium phosphorus in the second lum bar vertebra of ovariectom ized osteoporosis rats( ± s，n=12)

注:與假手術(shù)組比較，＊＊P＜0.01;與模型組比較，▲▲P＜0.01。

組 別 骨密度/(g·cm －2)第2腰椎b-Ca/(mg·cm－3) b-P/(mg·cm－3)假手術(shù)組0.198±0.017 0.365±0.013 0.134±0.003模型組 0.161±0.016＊＊ 0.327±0.015＊＊ 0.122±0.005＊＊密骨打老兒丸低劑量組 0.185±0.019▲▲ 0.348±0.023▲▲ 0.131±0.007▲▲密骨打老兒丸高劑量組 0.191±0.017▲▲ 0.357±0.025▲▲ 0.132±0.008▲▲雌二醇組 0.192±0.018▲▲ 0.358±0.024▲▲ 0.133±0.006▲▲

3.2 對尿鈣 (u-Ca)、尿磷 (u-P)和尿脫氧吡啶酚/尿肌酐 (D-Pyr/Cr)的影響 見表2。與假手術(shù)組比較，模型組u-Ca、D-Pyr/Cr顯著增加 (P＜0.01)，u-P無明顯變化 (P＞0.05)。與模型組相比，密骨打老兒丸高劑量組、密骨打老兒丸低劑量組、雌二醇組u-Ca、D-Pyr/Cr顯著減少 (P＜0.01)，u-P無明顯變化 (P＞0.05)。

表2 對去卵巢骨質(zhì)疏松大鼠尿鈣、尿磷和尿脫氧吡啶酚/尿肌酐的影響( ± s，n=12)Tab.2 Effects of M igu Dalao'er Pills on D-Pyr/Cr and calcium phosphorus in the urine of ovariectom ized osteoporosis rats( ± s，n=12)

表2 對去卵巢骨質(zhì)疏松大鼠尿鈣、尿磷和尿脫氧吡啶酚/尿肌酐的影響( ± s，n=12)Tab.2 Effects of M igu Dalao'er Pills on D-Pyr/Cr and calcium phosphorus in the urine of ovariectom ized osteoporosis rats( ± s，n=12)

注:與假手術(shù)組比較，＊＊P＜0.01;與模型組比較，▲▲P＜0.01。

組 別 (D-Pyr/Cr)/(mmol·mg－1) 尿 液u-Ca/(mg·mg－1) u-P/(mg·mg－1)假手術(shù)組4.81±0.62 0.82±0.14 1.84±0.16模型組 8.65±0.71＊＊ 1.34±0.17＊＊ 1.71±0.18密骨打老兒丸低劑量組 5.95±0.79▲▲ 0.92±0.16▲▲ 1.76±0.18密骨打老兒丸高劑量組 5.26±0.73▲▲ 0.85±0.19▲▲ 1.78±0.16雌二醇組 5.32±0.78▲▲ 0.84±0.21▲▲1.77±0.17

3.3 對血鈣 (s-Ca)、血磷 (s-P)、血清堿性磷酸酶 (ALP)和子宮臟器系數(shù)的影響 見表3。與假手術(shù)組比較，模型組血清 ALP顯著增加 (P＜0.01)，子宮臟器系數(shù)降低 (P＜0.01)，s-Ca、s-P無明顯變化 (P＞0.05)。與模型組相比，密骨打老兒丸高劑量組、密骨打老兒丸低劑量組、雌二醇組ALP活性顯著降低 (P＜0.01)，雌二醇組的子宮臟器系數(shù)升高 (P＜0.01)，各組 s-Ca、s-P無明顯變化 (P＞0.05)。

表3 對去卵巢骨質(zhì)疏松大鼠血鈣、血磷、血清堿性磷酸酶和子宮臟器系數(shù)的影響( ± s，n=12)Tab.3 Effects of M igu Dalao'er Pills on ALP and calcium phosphorus in the serum and uterus/body weight of ovariectom ized osteoporosis rats( ± s，n=12)

表3 對去卵巢骨質(zhì)疏松大鼠血鈣、血磷、血清堿性磷酸酶和子宮臟器系數(shù)的影響( ± s，n=12)Tab.3 Effects of M igu Dalao'er Pills on ALP and calcium phosphorus in the serum and uterus/body weight of ovariectom ized osteoporosis rats( ± s，n=12)

注:與假手術(shù)組比較，＊＊P＜0.01;與模型組比較，▲▲P＜0.01。

組 別 (子宮/體質(zhì)量)/(mg·g－1) ALP/(U·L－1) 血 清s-Ca/(mg·L －1) s-P/(mg·L －1)假手術(shù)組1.85±0.11 74.12±9．65 11.02±0.21 3.08±0.13模型組 0.41±0.08＊＊ 99.23±8．53＊＊ 10.36±0.19 3.15±0.16密骨打老兒丸低劑量組 0.45±0.07＊＊ 78.28±10．13▲▲ 10.42±0.17 3.12±0.17密骨打老兒丸高劑量組 0.43±0.05＊＊ 75.25±9．14▲▲ 10.65±0.15 3.10±0.14雌二醇組 1.13±0.06▲▲ 74.52±10．26▲▲10.54±0.20 3.09±0.16

3.4 對脛骨上段骨組織計量學(xué)參數(shù)的影響

3.4.1 對脛骨上段骨組織計量學(xué)靜態(tài)參數(shù)的影響見表4。與假手術(shù)組比較，模型組骨組織總面積、骨小梁面積、骨小梁周長顯著降低 (P＜0.01)，骨小梁厚度無明顯變化 (P＞0.05)。與模型組相比，密骨打老兒丸高劑量組、密骨打老兒丸低劑量組、雌二醇組骨組織總面積、骨小梁面積、骨小梁周長顯著增加 (P＜0.01)，骨小梁厚度無明顯差異 (P＞0.05)。

表4 對去卵巢骨質(zhì)疏松大鼠脛骨上段骨組織形態(tài)計量學(xué)靜態(tài)參數(shù)的影響( ± s，n=12)Tab.4 Effects of M igu Dalao'er Pills on the proximal tibia static histomorphometric parameters of ovariectom ized osteoporosis rats( ± s，n=12)

表4 對去卵巢骨質(zhì)疏松大鼠脛骨上段骨組織形態(tài)計量學(xué)靜態(tài)參數(shù)的影響( ± s，n=12)Tab.4 Effects of M igu Dalao'er Pills on the proximal tibia static histomorphometric parameters of ovariectom ized osteoporosis rats( ± s，n=12)

注:與假手術(shù)組比較，＊＊P＜0.01;與模型組比較，▲▲P＜0.01。

組 別 骨組織總面積/mm2 骨小梁面積/mm2 骨小梁周長/mm 骨小梁厚度/μm假手術(shù)組13.53±0.65 3.11±0.52 68.42±5.32 71.25±7.83模型組 9.12±0.62＊＊ 1.83±0.56＊＊ 43.26±5.56＊＊ 64.35±7.14密骨打老兒丸低劑量組 11.05±0.67▲▲ 2.51±0.57▲▲ 52.14±5.13▲▲ 68.23±8.16密骨打老兒丸高劑量組 11.56±0.58▲▲ 2.61±0.54▲▲ 55.72±5.28▲▲ 71.19±7.15雌二醇組 11.21±0.64▲▲ 2.57±0.61▲▲ 53.63±5.17▲▲70.65±7.24

3.4.2 對脛骨上段骨組織計量學(xué)動態(tài)參數(shù)的影響見表5。與假手術(shù)組比較，模型組骨小梁標(biāo)記周長百分率、BFR/BV、BFR/TV顯著降低 (P＜0.01)。與模型組相比，密骨打老兒丸高劑量組、密骨打老兒丸低劑量組、雌二醇組骨小梁標(biāo)記周長百分率、BFR/BV、BFR/TV顯著增加 (P＜0.01)。

表5 對去卵巢骨質(zhì)疏松大鼠脛骨上段骨組織形態(tài)計量學(xué)動態(tài)參數(shù)的影響( ± s，n=12)Tab.5 Effects of M igu Dalao'er Pills on the proximal tibia dynam ic histomorphometric parameters of ovariectom ized osteoporosis rats( ± s，n=12)

表5 對去卵巢骨質(zhì)疏松大鼠脛骨上段骨組織形態(tài)計量學(xué)動態(tài)參數(shù)的影響( ± s，n=12)Tab.5 Effects of M igu Dalao'er Pills on the proximal tibia dynam ic histomorphometric parameters of ovariectom ized osteoporosis rats( ± s，n=12)

注:與假手術(shù)組比較，＊＊P＜0.01;與模型組比較?！鳳＜0.01。

組 別 標(biāo)記周長百分率/% 年骨形成率/%BFR/BV BFR/TV假手術(shù)組16.45±2.85 91.23±23.27 19.98±6.12模型組 7.01±2.16＊＊ 35.18±22.53＊＊ 5.81±5.93＊＊密骨打老兒丸低劑量組 10.35±2.43▲▲ 58.64±22.87▲▲ 12.37±5.75▲▲密骨打老兒丸高劑量組 10.83±2.38▲▲ 59.73±23.01▲▲ 12.98±6.04▲▲雌二醇組 9.83±2.15▲▲ 58.26±22.83▲▲ 12.13±5.72▲▲

3.5 對第4腰椎生物力學(xué)參數(shù)的影響 見表6。與假手術(shù)組比較，模型組彈性載荷、最大載荷、斷裂載荷、剛度顯著降低 (P＜0.01)。與模型組相比，密骨打老兒丸高劑量組、密骨打老兒丸低劑量組、雌二醇組彈性載荷、最大載荷、斷裂載荷、剛度顯著增加 (P＜0.01)。

表6 對去卵巢骨質(zhì)疏松大鼠第4腰椎生物力學(xué)參數(shù)的影響( ± s，n=12)Tab.6 Effects of M igu Dalao'er Pills on the forth lumbar vertebrae(LV4)biomechanics parameters of ovariectom ized osteoporosis rats( ± s，n=12)

表6 對去卵巢骨質(zhì)疏松大鼠第4腰椎生物力學(xué)參數(shù)的影響( ± s，n=12)Tab.6 Effects of M igu Dalao'er Pills on the forth lumbar vertebrae(LV4)biomechanics parameters of ovariectom ized osteoporosis rats( ± s，n=12)

注:與假手術(shù)組比較，＊＊P＜0.01;與模型組比較，▲▲P＜0.01。

組 別 彈性載荷/N 最大載荷/N 斷裂載荷/N 剛度/(N·mm－1)假手術(shù)組 231.62±22.15 275.61±35.69 241.23±31.27 696.32±121.37模型組 169.47±21.42＊＊ 196.14±35.26＊＊ 171.25±31.20＊＊ 458.65±124.27＊＊密骨打老兒丸低劑量組 213.25±23.64▲▲ 262.57±34.51▲▲ 218.17±32.62▲▲ 601.13±123.76▲▲密骨打老兒丸高劑量組 217.51±22.57▲▲ 265.67±35.24▲▲ 221.35±31.24▲▲ 605.28±127.85▲▲雌二醇組 211.51±22.63▲▲ 259.31±34.68▲▲ 213.34±32.54▲▲ 591.34±126.13▲▲

4 討論

絕經(jīng)后婦女卵巢功能減退，雌激素水平降低，骨吸收亢進，造成骨質(zhì)流失，與老齡造成的低轉(zhuǎn)化型骨質(zhì)疏松相比，絕經(jīng)后婦女骨質(zhì)疏松屬于高轉(zhuǎn)化型骨質(zhì)疏松。骨基質(zhì)中90%是骨膠纖維，膠原吡啶交聯(lián)包括吡啶酚 (Pyr)和脫氧吡啶酚 (D-Pyr)兩種成熟的交聯(lián)氨基酸，D-Pyr只存在于骨骼和牙質(zhì)的Ⅰ型膠原中，因牙質(zhì)轉(zhuǎn)換速度慢，在整體骨骼所占的份額極小，所以尿中的D-Pyr幾乎全來自礦化骨的骨吸收。尿中D-Pyr是骨吸收最為特異敏感的指標(biāo)［10］。臨床觀察絕經(jīng)后婦女血清 ALP活性升高，u-Ca、尿D-Pyr排出量增加，骨吸收強于骨形成。研究發(fā)現(xiàn) Pyr和 D-Pyr在絕經(jīng)時增加50% ～100%，經(jīng)雌激素治療后可降至絕經(jīng)前水平，并在絕經(jīng)兩年的追蹤研究后發(fā)現(xiàn)，D-Pyr測定與骨丟失率顯著相關(guān)［11］。本實驗采用去卵巢大鼠模擬絕經(jīng)后婦女骨質(zhì)疏松，結(jié)果顯示，去卵巢后大鼠血清ALP活性增加，u-Ca、D-Pyr/Cr排出顯著增加，與絕經(jīng)后婦女骨質(zhì)疏松患者的臨床生化指標(biāo)的變化一致。ALP反應(yīng)成骨細胞的成骨活性［12］，實驗結(jié)果表明，通過卵巢切除人為地造成卵巢功能破壞，雌激素水平下降，骨吸收代謝加強，骨基質(zhì)中的Ⅰ型膠原分解加速，骨丟失率顯著上升，造成雌激素缺乏引起的骨轉(zhuǎn)換亢進骨質(zhì)疏松病理模型。

打老兒丸來源于《萬氏家抄方·卷四》，組成是石菖蒲、干山藥、川牛膝、遠志、巴戟天、川續(xù)斷、五味子、楮實子、杜仲、山萸肉、茯神、熟地黃、小茴香、肉蓯蓉、枸杞子各等份。打老兒丸的配伍涉及五臟，其中以川牛膝、巴戟天、川續(xù)斷、楮實子、杜仲、山萸肉、熟地黃、肉蓯蓉、枸杞子補腎藥為主，石菖蒲、遠志、茯神養(yǎng)心安神，山藥補脾，五味子斂肺，小茴香溫肝。本課題組證實打老兒丸中地黃［6］、川續(xù)斷［2］、川牛膝［3］可以提高成骨細胞增殖和分化能力，再加上具有促進成骨作用的淫羊藿［5］、骨碎補［4］、補骨脂［1］、菟絲子［7］，組成密骨打老兒丸。本實驗結(jié)果表明，給去卵巢骨質(zhì)疏松大鼠灌胃密骨打老兒丸3個月，血清 ALP活性顯著降低，u-Ca、D-Pyr/Cr排出量降低，骨密度增加，能夠顯著抑制由于雌激素缺乏引發(fā)的骨轉(zhuǎn)換亢進，調(diào)整骨形成和骨吸收的平衡，對遏制去卵巢造成的骨質(zhì)疏松有一定的作用。并且與雌激素相比，長期服用密骨打老兒丸對子宮沒有刺激增生的作用。

骨骼在一生中不斷地進行更新和轉(zhuǎn)換，破骨細胞將其吸收，成骨細胞又不斷在原位形成新骨，兩種細胞在骨表面同一部位相繼進行著骨的重建活動，每年約有數(shù)百萬重建單位 (BMU)在骨表面上發(fā)生，骨組織內(nèi)外有大量表面，包括骨外膜表面、骨內(nèi)膜表面、骨小梁表面、哈佛管表面等，如果骨形成的骨量少于被吸收骨量時即發(fā)生負平衡。在BMU負平衡的狀態(tài)下，骨轉(zhuǎn)換越高，骨丟失也越嚴重，骨質(zhì)疏松的發(fā)病部位主要在骨小梁。目前多用骨密度作為指標(biāo)來評價骨質(zhì)疏松藥效，但單純追求骨密度提高，會引起骨硬化，導(dǎo)致骨生物力學(xué)性能惡化，骨礦量提高和骨生物力學(xué)性能改善之間不能劃等號［7］，骨密度、含鈣、磷量僅反應(yīng)骨礦的“量”，而骨的生物力學(xué)參數(shù)則反應(yīng)骨的“質(zhì)”，應(yīng)該綜合考察反映骨“質(zhì)”和“量”的雙重指標(biāo)，才能更客觀地評判抗骨質(zhì)疏松藥物內(nèi)在質(zhì)量的優(yōu)劣。彈性載荷、最大載荷、斷裂載荷等指標(biāo)反映骨結(jié)構(gòu)力學(xué)性能，而剛度用來衡量材料在載荷作用下，抵抗變形的能力。本實驗結(jié)果表明，與假手術(shù)組比較，模型組大鼠股骨骨密度、第4腰椎生物力學(xué)參數(shù)的彈性載荷、最大載荷、斷裂載荷、剛度均降低，脛骨上段骨組織計量學(xué)靜態(tài)參數(shù)的骨組織總面積、骨小梁面積、骨小梁周長和動態(tài)參數(shù)的標(biāo)記周長百分數(shù)、骨形成率 (BFR/BV、BFR/TV)均降低，提示去卵巢誘發(fā)的大鼠骨質(zhì)疏松模型是成功的。本實驗結(jié)果表明，密骨打老兒丸治療后，大鼠腰椎生物力學(xué)參數(shù)的彈性載荷、最大載荷、斷裂載荷、剛度，脛骨上段骨組織計量學(xué)靜態(tài)參數(shù)的骨組織總面積、骨小梁面積、骨小梁周長和動態(tài)參數(shù)的標(biāo)記周長百分數(shù)、骨形成率 (BFR/BV、BFR/TV)均明顯增加。結(jié)果提示密骨打老兒丸可以防治去卵巢所致的骨質(zhì)疏松大鼠腰椎生物力學(xué)性能的降低，可以增強椎骨的抗變形能力，減少骨折的發(fā)生，提高骨質(zhì)量，詳細的機理尚待進一步深入研究。

［1］武密山，趙素芝，任立中，等．補骨脂素對成骨細胞核因子-κB受體激活配體和骨保護素表達的影響［J］．中國老年學(xué)雜志，2012，32(1):66-69.

［2］武密山，趙素芝，任立中，等．川續(xù)斷皂苷VI誘導(dǎo)大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞向成骨細胞方向分化的研究［J］．中國藥理學(xué)通報，2012，28(2):222-226.

［3］武密山，趙素芝，任立中，等．3H-牛膝蛻皮甾酮在小鼠體內(nèi)組織定量分布與歸經(jīng)關(guān)系的研究［J］．中國中藥雜志，2011，36(21):3018-3022.

［4］武密山，趙素芝，任立中，等．柚皮苷對乳鼠成骨細胞增殖及c-fos、c-jun表達的影響［J］．中國藥理學(xué)通報，2011，27(5):677-681.

［5］武密山，趙素芝，任立中，等．淫羊藿苷對去卵巢大鼠骨和下丘腦不同核團ERβmRNA表達的影響［J］．中國藥理學(xué)通報，2011，27(1):29-33.

［6］武密山，趙素芝，李 恩，等．地黃活性成分梓醇對小鼠成骨細胞 MC3T3-E1增殖、分化和礦化的影響［J］．中國藥理學(xué)通報，2010，26(4):509-513.

［7］武密山，李 恩，趙素芝，等．抗骨松顆粒對去卵巢大鼠骨質(zhì)含量和生物力學(xué)的影響［J］．中國老年學(xué)雜志，2008，28(23):2289-2292.

［8］許碧蓮，吳 鐵，陳文雙，等．壯骨腎寶對維甲酸致骨質(zhì)疏松大鼠不同部位骨骼的影響［J］．中成藥，2011，33(12):2048-2051.

［9］Parfitt A M，Drezner M K，Glorieux F H，et al．Bone histomorphometry:standardization of nomenclature，symbols，and units．Report of the ASBMR histomorphometry nomenclature committee［J］．JBone Miner Res，1987，2(6):595-610.

［10］Hanson D A，Weis M A，Bollen A M，et al．A specific immunoassay formonitoringhuman bone resorption:quantitation of type Icollagen cross-linked N-telopeptides in urine［J］．JBone Miner Res，1992，7(11):1251-1258.

［11］Uebelhart D，Schlemmer A，Johansen JS，etal．Effectofmenopause and hormone replacement therapy on the urinary excretion of pyridinium cross-links［J］．J Clin Endocrinol Metab，1991，72(2):367-373.

［12］Effenberger K E，Johnsen S A，Monroe D G，et al．Regulation of osteoblastic phenotype and gene expression by hop-derived phytoestrogens［J］．J Steroid Biochem Mol Biol，2005，96(5):387-99.