張?jiān)铺欤?穎，浦香蘭，徐以亮

（江陰天江藥業(yè)有限公司，江蘇 無錫 214434）

感冒停配方顆粒是以感冒為主治病癥的復(fù)方顆粒制劑，由板藍(lán)根、牛蒡子、蒼耳子、金銀花、連翹、羅漢果、蘆根、荊芥、川石斛、防風(fēng)、白芷、辛夷花、甘草等中藥組方，用于治療感冒、流行性感冒，緩解四肢酸痛、頭痛咳嗽、咽喉腫痛等癥狀。經(jīng)過文獻(xiàn)檢索，尚無質(zhì)量控制的相關(guān)報(bào)道。為有效控制該制劑的內(nèi)在質(zhì)量，筆者應(yīng)用薄層色譜(TLC)法建立了牛蒡子、板藍(lán)根的鑒別方法，采用高效液相色譜(HPLC)法對牛蒡子中主要有效成分牛蒡苷進(jìn)行了含量測定，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

Agilent1200型高效液相色譜儀(美國安捷倫公司)；AT－330型柱溫箱(天津奧特賽恩斯科學(xué)儀器有限公司)；電子天平(瑞士Mettler公司)；KQ－250B型超聲波清洗器(昆山市超聲波儀器公司)。牛蒡苷對照品(編號為0819－200203)、精氨酸對照品(編號為140685－201104)均購自中國藥品生物制品檢定所，供含量測定用；感冒停配方顆粒(批號分別為 201004，201006，201010，江陰天江藥業(yè)有限公司)；硅膠 G(青島海洋化工廠)；甲醇為色譜純，水為娃哈哈純凈水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 薄層色譜鑒別

牛蒡子[1]66：取本品 1.0 g，研細(xì)，加甲醇 50m L，超聲處理 30min，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状? m L使溶解，作為供試品溶液。取不含牛蒡子的陰性樣品1.0 g，同法制成陰性對照品溶液。另取牛蒡苷對照品，加乙醇制成每1mL含5mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法2010年版[《中國藥典（一部）》附錄 VIB]試驗(yàn)，吸取上述3種溶液各2μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷 －甲醇 － 水(40∶8∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以 10%硫酸乙醇溶液，加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品溶液色譜中，在與對照品溶液色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的藍(lán)紫色斑點(diǎn)，而陰性對照品溶液則無此斑點(diǎn)(圖1 A)。

板藍(lán)根[1]191：取本品 1.0 g，研細(xì)，加稀乙醇 50 mL，超聲處理20 min，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)酉∫掖? m L使溶解，作為供試品溶液。取不含板藍(lán)根的陰性樣品1.0 g，同法制成陰性對照品溶液。另取精氨酸對照品，加稀乙醇制成每1mL含0.5mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法[2010年版《中國藥典（一部）》附錄 VIB]試驗(yàn)，吸取上述3種溶液各2μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以正丁醇 －冰醋酸 －水（19∶5∶5）為展開劑，展開，取出，熱風(fēng)吹干，噴以茚三酮試液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品溶液色譜中，在與對照品溶液色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，而陰性對照品溶液則無此斑點(diǎn)(圖1 B)。

圖1 薄層色譜圖

2.2 牛蒡苷含量測定

2.2.1 色譜條件

色譜柱:Lichrospher C18柱（250mm ×4.6mm，5μm）；流動相:甲醇 －水（1∶1.1）；檢測波長:280nm；柱溫:30℃；流速:1.0mL ／min；進(jìn)樣量:10μL。理論板數(shù)按牛蒡苷峰計(jì)算應(yīng)不低于1 500。

2.2.2 溶液制備

取牛蒡苷對照品約27.50 mg，精密稱定，置100 m L容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得質(zhì)量濃度為0.275 0 g／L的對照品溶液。取本品約1 g，精密稱定，精密加甲醇100 m L，稱定質(zhì)量，超聲處理(功率250W，頻率50 kHz)30 min，放冷，再稱定質(zhì)量，用甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，過0.45μm微孔濾膜，即得供試品溶液。取缺牛蒡子的陰性樣品約1 g，精密稱定，按供試液制備方法制成陰性對照品溶液。

圖2 高效液相色譜圖

2.2.3 方法學(xué)考察

干擾試驗(yàn):照上述色譜條件，分別取供試品溶液、對照品溶液和陰性對照品溶液各 10μL，分別注入色譜儀。供試品溶液色譜圖中，在與對照品溶液色譜圖相應(yīng)位置上顯示相同保留時(shí)間的色譜峰，而陰性對照品溶液在此保留時(shí)間處無干擾，見圖2。

線性關(guān)系考察：分別精密吸取牛蒡苷對照品溶液(0.275 0 g ／L)2，4，6，8 mL，置10mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，配成質(zhì)量濃度分別為 0.055，0.110，0.165，0.220 g／L 系列對照品溶液。分別精密吸取上述對照品溶液各10μL，注入液相色譜儀，按上述色譜條件測定，以峰面積積分值(Y)為縱坐標(biāo)、牛蒡苷質(zhì)量濃度(X)為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程 Y＝5 607.4X －6.145，r＝0.999 9。結(jié)果表明，牛蒡苷進(jìn)樣量在0.55～2.75μg范圍內(nèi)與峰面積積分值呈良好線性關(guān)系。

精密度試驗(yàn):精密吸取牛蒡苷對照品溶液(0.275 0 g／L）5μL，按上述色譜條件重復(fù)進(jìn)樣6次，測定牛蒡苷峰面積積分值。結(jié)果的 RSD為0.88%(n＝6)，表明精密度良好。

重現(xiàn)性試驗(yàn):取同一批(批號為201004)樣品，依法制備供試品溶液并測定。結(jié)果平均含量為 12.9 mg／g，RSD 為 1.17%(n＝6)，表明重復(fù)性良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn):取同一供試品(批號為201004)溶液，分別于0，2，4，6，8 h 時(shí)分別進(jìn)樣 10μL，測定牛蒡苷的峰面積。結(jié)果的 RSD為0.66%，表明供試品溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定。

加樣回收試驗(yàn):取牛蒡苷對照品約32.25mg，精密稱定，置100 m L容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得質(zhì)量濃度為0.322 5 g／L的對照品溶液，備用。取已知含量的樣品(批號為201004)0.5 g，精密稱定，分別加入上述牛蒡苷對照品溶液16，20，24 m L，各2份，按供試品溶液的制備方法制備加樣回收供試品溶液，分別進(jìn)樣10μL，測定。結(jié)果見表1。

2.2.4 樣品含量測定

取感冒停顆粒1.0 g，精密稱定，按供試品溶液制備方法制備溶液并進(jìn)樣10μL，測定峰面積，計(jì)算牛蒡苷的含量。結(jié)果批號為201004，201006，201010 的樣品中牛蒡苷的含量分別為 12.6，12.5，12.9mg／g。

3 討論

表1 牛蒡苷加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n＝6)

板藍(lán)根為清熱解毒要藥，具有清熱解毒、涼血消腫、利咽功效，具有抗病毒、抗炎、增強(qiáng)免疫力、解熱等作用[2]。牛蒡子為發(fā)散風(fēng)熱藥，具有疏散風(fēng)熱、利咽散結(jié)、解毒消腫功效，具有抗炎、抗腫瘤、抗病毒等多種藥理作用[3]。上述功效均與感冒停顆粒的主治功能相一致，且為方中的主要組成藥物，因此選擇板藍(lán)根和牛蒡子作為鑒別品種。采用了2010年版《中國藥典(一部)》板藍(lán)根及牛蒡子的薄層鑒別方法，并分別與陰性對照溶液進(jìn)行對照，結(jié)果沒有干擾、專屬性強(qiáng)。

牛蒡苷為牛蒡子中的主要有效成分，并且在方中的含量較高，因此選擇牛蒡苷作為感冒停顆粒含量測定的指標(biāo)成分。采用了2010年版《中國藥典(一部)》牛蒡子含量測定項(xiàng)下的流動相，分離效果好，無干擾，結(jié)果準(zhǔn)確。

本試驗(yàn)建立的定性、定量方法，可用于感冒停配方顆粒的質(zhì)量控制。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2010.

[2]葉未央，李 祥，陳建偉.板藍(lán)根清熱解毒作用機(jī)制的研究進(jìn)展[J].中醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2010，16(12):107 －110.

[3]鮑雯雯，歷淑芬，叢曉東，等.牛蒡子藥理作用和臨床應(yīng)用研究進(jìn)展[J].中國民族民間醫(yī)藥，2011，7(3):45－46.