王 妍 李德昌 鄭吉春 任 力 (欒城縣醫(yī)院，河北 石家莊 05430)

化療是乳腺癌綜合治療最主要手段之一，術(shù)前新輔助化療可以有效降低乳腺癌的腫瘤大小、分級及預后，術(shù)后化療可以預防乳腺癌的轉(zhuǎn)移和復發(fā)。化療和乳腺癌的發(fā)展有密切關(guān)系，但是目前化療不能取得治愈性療效，導致化療失敗的原因主要是腫瘤細胞產(chǎn)生耐藥性。影響乳腺癌預后的指標主要包括乳腺癌腫瘤大小，組織學類型及雌激素受體(ER)、孕激素受體(PR)、C-erBb-2的表達。本文通過免疫組化法研究未行化療的乳腺癌組織中胎盤型谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶π(GST-π)、P-糖蛋白(P-gp)、拓撲異構(gòu)酶Ⅱ(Topo-Ⅱ)及多藥耐藥相關(guān)蛋白(MRP)的表達特點，綜合分析其與臨床病理特征的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 材料 收集我科2003年1月至2011年5月經(jīng)病理證實為浸潤性乳腺癌的標本83例(按2003年WHO乳腺腫瘤組織學分類)。所有病例均為女性，年齡29～82歲，平均54歲，所有病例術(shù)前均未進行放化療。另選擇同期手術(shù)治療乳腺纖維腺瘤20例及癌旁正常乳腺組織15例作為對照。

1.2 方法 采用免疫組化染色SP法，即用型GST-π、P-GP、Topo-Ⅱ、MRP鼠抗人單克隆抗體，通用型 SP檢測試劑盒(SP-9000)、DAB顯色試劑盒均購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。操作步驟嚴格按照說明書進行，用PBS代替一抗作陰性對照，用已知陽性結(jié)腸癌組織作陽性對照。

1.3 結(jié)果判定 GST-π定位于細胞質(zhì);P-gp、MRP定位于細胞膜和細胞質(zhì);Topo-Ⅱ和ER、PR定位于細胞核。部位中出現(xiàn)粗細一致的棕黃色顆粒為陽性染色。在陽性顆粒密集部位隨機選取10個200倍視野，計數(shù)每個視野中細胞的染色情況，取平均值。以其中陽性細胞占全部細胞數(shù)的百分數(shù)對其表達強度進行分級:陽性細胞數(shù)＜10%為陰性，10% ～26%陽性定為弱陽性(+)，25% ～75%明顯陽性定為中度陽性()，＞75%為強陽性()。

1.4 統(tǒng)計學處理 應(yīng)用SPSS11.5統(tǒng)計軟件包進行統(tǒng)計分析。計數(shù)資料采用兩個(或多個)樣本率比較的χ2檢驗，正態(tài)分布的計量資料采用隨機設(shè)計的兩總體均數(shù)的t檢驗。

2 結(jié)果

乳腺癌組織與癌旁正常組織的MRP表達明顯高于乳腺纖維腺瘤，而且與腫瘤大小、轉(zhuǎn)移與否、組織學分級及年齡均無明顯相關(guān)性，Topo-Ⅱ的表達與腫瘤大小、轉(zhuǎn)移與否、組織學分級及年齡均無明顯相關(guān)性。癌旁正常組織與乳腺纖維腺瘤組織中P-gp、Topo-Ⅱ、GST-π未見明顯差異。GST-π和P-gp的表達呈正相關(guān)，GST-π和Topo-Ⅱ的表達呈明顯負相關(guān)，P-gp和Topo-Ⅱ的表達呈明顯負相關(guān)，見表1。

表1 P-gp、GST-π、Topo-Ⅱ、MRP陽性表達與臨床病理參數(shù)的關(guān)系〔n(%)〕

3 討論

MDR是指腫瘤細胞被一種藥物誘發(fā)耐藥后，同時對其他多種結(jié)構(gòu)和作用機制完全不同的藥物產(chǎn)生交叉耐藥的一種現(xiàn)象〔1〕。它是化療后的獲得性耐藥，目前乳腺癌化療不能取得治愈性療效，導致化療失敗的原因主要是腫瘤細胞產(chǎn)生耐藥性。MDR產(chǎn)生的機制很多，目前的研究主要與轉(zhuǎn)運蛋白、耐藥基因產(chǎn)物和腫瘤細胞的凋亡基因有關(guān)，其中耐藥基因擴增，NDA拓撲異構(gòu)酶表達，P-gp的過表達，GST-π的細胞毒系統(tǒng)作用的增強隨著新輔助化療的開展成為近年研究熱點。

MRP是ABC(ATP binding cassette)跨膜轉(zhuǎn)運蛋白家族成員，定位于染色體16p13.1。目前MRP產(chǎn)生耐藥的作用機制主要為減少還原型谷胱甘肽的協(xié)同轉(zhuǎn)運機制，谷胱甘肽與藥物結(jié)合其產(chǎn)物通過跨膜轉(zhuǎn)運至細胞外，降低細胞內(nèi)化療藥物濃度從而達到耐藥目的〔2〕。許多研究表明在乳腺癌組織中MRP的表達與多藥耐藥基因MDR1的表達存在明顯相關(guān)性，本次研究也證實MRP呈表達水平。P-GP和MRP同屬ABC跨膜轉(zhuǎn)運蛋白家族成員，定位于染色體7q21.1，在ATP的參與下可與多種藥物結(jié)合并以主動轉(zhuǎn)運方式將結(jié)合產(chǎn)物泵出細胞外，降低細胞內(nèi)藥物濃度〔3〕。GST-π是GST家族中一組具有解毒功能的同工酶，將谷胱甘肽與化療藥物相結(jié)合，降低藥物的細胞毒性，減弱腫瘤細胞對化療藥物的敏感性。它與谷胱甘肽的氧化還原狀態(tài)相關(guān)，受MRP耐藥機制的調(diào)節(jié)。

Topo-Ⅱ參與真核細胞DNA的轉(zhuǎn)錄、翻譯、復制及染色體分離功能，是調(diào)節(jié)核酸空間結(jié)構(gòu)動態(tài)變化、控制核酸生理功能的關(guān)鍵酶。在腫瘤細胞的凋亡機制中起主要作用〔4〕。Topo-Ⅱ活性降低或含量減少影響其介導的MDR機制，降低細胞的抗癌活性。

本文提示這三者之間可能存在著相互調(diào)節(jié)機制。MRP與P-GP耐藥譜雖然相似，但MRP對疏水性抗癌藥物耐藥，P-GP對親脂性抗癌藥物耐藥。GST-π陽性者對烷化劑、鉑類、蒽環(huán)類等化合物產(chǎn)生耐藥〔5〕。Topo-Ⅱ的靶點藥物為喜樹堿、蒽環(huán)類及鬼臼毒素類等藥物〔6〕。最近有研究表明，MRP的谷胱甘肽轉(zhuǎn)運機制可能會導致細胞內(nèi)藥物的重新分布，從而產(chǎn)生新的耐藥性〔7，8〕。乳腺癌腫瘤術(shù)后同時檢測 GST-π、P-GP、Topo-Ⅱ的表達可以對化療方案的制訂提出參考方案，有效提高化療效果。本文提示MRP的表達不受疾病發(fā)展的影響，可能作為一種隱性特征存在于癌癥患者的體質(zhì)中;Topo-Ⅱ與腫瘤的增殖情況有關(guān)，對乳腺癌的預后有意義。最近有研究表明，MRP的谷胱甘肽轉(zhuǎn)運機制可能會導致細胞內(nèi)藥物的重新分布，從而產(chǎn)生新的耐藥性〔9〕。

1 魏學明，顧國利.胃癌組織中多藥耐藥基因的表達特點及其對化療的指導意義〔J〕.胃腸病學和肝病學雜志，2009;18(11):980-92.

2 Dean M.ABC transporters，drug resistance，and cancer stem cells〔J〕.J Mammary Gland Biol Neoplasia，2009;14(1):329.

3 Robillard KR，Hoque MT，Bendayan R.Expression of ATP-binding cassette membrane transporters in rodent and human sertoli cells:relevance to the permeability of antiretroviral therapy at the blood-testis barrier〔J〕.J Pharmacol Exp Ther，2012:340(1):96-108.

4 Cardoso F，Durbecq V，Larsimort D，et al.Correlation between complete response to anthracycline-based chemotherapy and topoisomerase-Ⅱalpha gene amplification and pretein overexpression in locally advanced/metasatic breast cancer〔J〕.Int J Oncol，2004;24(1):201-9.

5 王姝姝.乳腺癌新輔助化療基因組標志物的建立:EORTC 10994/B IG 002 01臨床試驗的亞組研究〔J〕.中華乳腺病雜志:電子版，2008;2(3):369-74.

6 Brase JC，Schmidt M，F(xiàn)ischbach T，et al.ERBB and TOP-A in breast cancer:a comprehensive analysis of gene amplification，RNA levels，and protein expression and their influence on prognosis and prediction〔J〕.Clin Cancer Res，2010;16(8):2391-401.

7 劉新蘭，王 程，陳 萍.乳腺癌組織中多藥耐藥相關(guān)基因產(chǎn)物表達的研究〔J〕.寧夏醫(yī)學院學報，2008;30(4):4182-200.

8 譚 敏，賓曉農(nóng)，何清蓮，等.乳腺癌組織中相關(guān)耐藥基因表達的研究〔J〕.廣州中醫(yī)藥大學學報，2005;22(3):200-2.

9 Suiowiak P，Materna V，Matkow SR，et al.Relationship between the expression of cyclooxygenase and MDR1/pglycoprotein in invasive breast cancers and their prognostic significance〔J〕.Breast Cancer Res，2005;7(8):862-71.