科技進展

實驗性感染豬源H1N1流感病毒引發(fā)疾病

2009年全球大規(guī)模暴發(fā)H 1N 1流感病毒后，這種新型的病毒傳播到了豬群。豬成為了該病毒的宿主，并且為流感病毒的基因突變提供了空間。從2009年的大流行中演變的重組毒株，在全球很多國家的豬群中都有發(fā)現(xiàn)，其中包括泰國。這一疾病的發(fā)現(xiàn)，使得針對這種病毒的病原學研究得以廣泛開展以防控人和豬的疾病。

將從泰國的豬體內(nèi)分離出的2009流行性H 1N 1病毒（pH1N1） 和其重組毒株（rH1N1） 分別注射到兩組3周齡的豬體內(nèi)，每組9只，一組注射pH1N1，另一組注射rH1N1，同時設(shè)置陰性對照組（3只）。觀察并比較各組豬只的臨床癥狀、病毒分布和病理變化，分別在注射病毒后2、4、12天對兩試驗組和對照組豬只進行動態(tài)病理學觀察（圖1），注射病毒組每次觀察3只，陰性對照組每次觀察1只。

試驗結(jié)果顯示，感染病毒的兩組豬只均呈現(xiàn)不同程度的典型流感樣臨床癥狀和組織病理學變化，在注射病毒后1～4天，出現(xiàn)較溫和的肺部癥狀。但是，直至注射病毒后第12天，才能夠從試驗組的鼻拭子中檢測到病毒的R N A。本試驗從自然感染的豬只中分離鑒定了pH1N1和rH1N1流感病毒，在注射到豬體內(nèi)后，會引發(fā)嚴重的呼吸性疾病。盡管感染rH1N1的豬群有較多的豬只感染，并顯示出更為嚴重的臨床癥狀，且rH1N1能夠?qū)е路尾拷M織嚴重病變和肺臟病原增加，但與感染pH1N1組比較，在統(tǒng)計學意義上的差異不顯著，兩個試驗組在試驗后期均能從鼻拭子中檢測到兩種病毒的遺傳物質(zhì)。和豬的其他流感病毒相似，pH1N1和rH1N1引發(fā)疾病的臨床癥狀和病例損失僅限于呼吸道。（祝文琪編譯，譯自《病毒學雜志》）

譯自：Charoenvis al N,Keawcharoen J , Sreta D,et al.Experimental infection with a Thai reas sortant swine influenza virus of pandemic H1N1 origin induced dis eas e.Virology Journal, 2013,10:88.

同時檢測豬繁殖與呼吸綜合征病毒、豬瘟病毒、豬圓環(huán)病毒的多重PCR技術(shù)

本試驗設(shè)計了一種多重聚合酶鏈反應（PCR）技術(shù)，可用于同時檢測與豬繁殖和呼吸衰竭相關(guān)的3種病毒——豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）、豬瘟病毒（CSFV）和豬圓環(huán)病毒2型（PCV2）。根據(jù)3種病毒的靶序列設(shè)計引物，分別擴增出大小為718b p（PRRSV）、288b p（CSFV）和466b p（PCV2）的片段。以含有病毒片段的重組質(zhì)粒為模板，進行此PCR方法的靈敏度實驗，分別可檢測出2.0×104（PRRSV）、2.5×103（CSFV） 和 6.0×102（PCV2） 拷貝數(shù)的病毒量。當使用其他病毒、細菌和P K-15/Marc-145細胞進行此多重PCR技術(shù)的特異性分析時，沒有觀察到非特異性條帶。對來自福建的82個臨床樣本進行檢測，PRRSV和CSFV混合感染的為12.19%，PRRSV和PCV2混合感染的為21.95%，CSFV和PCV2混合感染的為13.41%，3種病毒混合感染的為3.66%?？傊硕嘀豍CR技術(shù)適用于常規(guī)的分子診斷和流行病學診斷，可有效地檢測出上述3種病毒的單一感染或混合感染。（陳舒楠編譯，譯自《分子與細胞探測》）

譯自：Liu JK, Wei CH, Yang XY, et al. Multiplex PCR for the s imultaneous detection of porcine reproductive and res -piratory syndrome virus , clas s ical swine fever virus , and porcine circovirus in pigs . Molecular and Cellular Probes ,2013. [Epub ahead of print]

豬圓環(huán)病毒2型ORF2和豬γ干擾素基因重組腺病毒的構(gòu)建及其免疫原性研究

由ORF2基因編碼的豬圓環(huán)病毒2型衣殼結(jié)構(gòu)蛋白是誘導廣泛保護性免疫的關(guān)鍵。根據(jù)ORF2基因編碼的衣殼結(jié)構(gòu)蛋白和豬γ干擾素(IFN-γ)的構(gòu)造及其特征，將此重組腺病毒命名為重組腺病毒(r A d)-ORF2-豬γ干擾素。經(jīng)限制性內(nèi)切酶酶切法、PCR法、測序及轉(zhuǎn)染鑒定，進一步證實了該重組腺病毒的結(jié)構(gòu)。將重組腺病毒接種于SPF級雌性BALB/c小鼠，用E L I S A抗體檢測試劑盒檢測特異性抗體水平。值得注意的是，該重組腺病毒比單獨重組腺病毒-ORF2或腺病毒本身可以誘導出更好的ORF2-特異性抗體應答。顯然，豬γ干擾素大大提升了ORF2的免疫原性。結(jié)果表明，該重組腺病毒可能會成為一種有吸引力的用于防治與PCV2感染相關(guān)疾病的候選疫苗。（陳舒楠編譯，譯自《疫苗》）

譯自：LIU G M, LUO M L, CHEN R A, et al. Cons truction and immunogenicity of recombinant adenovirus expres s ing ORF2 of PCV2 and porcine IFN- gamma. Vaccine,2011(29): 8677- 8682.

紅景天多糖對豬卵母細胞體外成熟及其發(fā)育潛力的影響

本試驗旨在探討紅景天多糖（Rhodiolasachalinensis polysaccaride，RSP）對豬卵母細胞體外成熟及發(fā)育潛力的影響。在豬卵母細胞成熟液中添加不同濃度的RSP，以排出第一極體作為核成熟的標志，觀察卵母細胞核成熟情況，統(tǒng)計孤雌激活（PA） 及體外受精（IVF） 后胚胎的卵裂率和囊胚率，并檢測卵母細胞內(nèi)谷胱甘肽（GSH）的濃度及活性氧（ROS） 水平。結(jié)果表明：與對照組（83.50%±1.00%） 相比，添加0.6、6.0和60.0mg/L的R S P均能提高其核成熟率，但差異不顯著（P>0.05）；6.0和60.0mg/L的R S P組能顯著提高卵母細胞內(nèi)G S H含量（P<0.05），隨著R S P濃度的增加可以降低ROS水平，但是各組之間差異不顯著（P>0.05）；孤雌激活中，60.0mg/LR S P組的卵裂率（88.44%±5.06%） 和6.0mg/LR S P的囊胚率（40.94%±8.23%） 最高，且顯著高于對照組 （72.16%±7.38%和24.06%±5.16%，P<0.05）；與對照組（33.52%±4.05%） 相比，0.6、6.0和60.0mg/LR S P組體外受精卵裂率均顯著提高（P<0.05），60.0mg/LR S P組的囊胚率達（19.20%±3.13%），顯著高于對照組的（9.60%±0.65%，P<0.05）。由此可見，在豬卵母細胞成熟過程中添加適當濃度的R S P，能提高其核成熟率，促進胞質(zhì)成熟，從而提高其孤雌激活和體外受精后的胚胎發(fā)育能力。

本刊摘自：徐利，戴建軍，張廷宇，等.紅景天多糖對豬卵母細胞體外成熟及其發(fā)育潛力的影響.畜牧獸醫(yī)學報，2013，44（4）：557-561.

替代的異源5'非翻譯區(qū)可以保持2型豬繁殖與呼吸綜合征病毒的全部活動功能

基因組5'非翻譯區(qū)（untranslate dregion，UTR） 被認為在豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）基因組RNA復制、亞基因組mRNA轉(zhuǎn)錄和蛋白翻譯過程中發(fā)揮關(guān)鍵作用，然而其主要的作用機制仍不為人知。本試驗確定了病毒復制和感染的順式作用元件，基于兩種不同的基因型的全長感染性c DNA克隆pAPRRS和pSHE骨架，構(gòu)建了5'UTR交換嵌合克隆pTLV8和pSHSP5。在這兩者中間，vTLV8可從pTLV8逃逸出來，并且具有與vAPRRS類似的病毒學特征，如表型特征和RNA的合成水平。然而，沒有證據(jù)表明pSHSP5具有傳染性。綜上所述，1型PRRSV的5'UTR并沒有影響2型PRRSV在體外的感染和復制，2型PRRSV的5'UTR可以在功能上被1型PRRSV所取代。（陳舒楠編譯，譯自《病毒學》）

譯自：GAO F, YAO H C, LU J Q, et al. Replacement of the heterologous 5’ untrans lated region allows preservation of the fully functional activities of type 2 porcine reproductive and respiratory syndrome virus . Virology, 2013, 439(1): 1- 12.

稀釋液成分對豬精液堿性N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的影響

以豬精液稀釋液主要成分為效應物，研究其對杜洛克豬精液中N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶Ⅱ活力的影響。結(jié)果表明：在一定濃度下青霉素鉀和硫酸鏈霉素對酶活力沒有影響；E D T A·2N a和維生素C對酶活力有顯著的激活作用；葡萄糖和蔗糖對酶活力有先揚后抑的作用；果糖、檸檬酸三鈉、三羥甲基氨基甲烷、碳酸氫鈉對酶活力則有不同程度的抑制作用；其中，三羥甲基氨基甲烷表現(xiàn)為可逆的非競爭性抑制，抑制常數(shù)K1為9.81mmo l/L；碳酸氫鈉則表現(xiàn)為可逆的混合型抑制，抑制常數(shù)K1和K1S分別為111.18mmo l/L和26.61mmo l/L。

本刊摘自：林心宇，胡崇偉，章文，等.稀釋液成分對豬精液堿性N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的影響.中國獸醫(yī)學報，2012，32（11）：1730-1735.