王曉東， 張 莉， 杜 娟

（石河子大學綠洲農(nóng)作物病害防控重點實驗室，石河子 832003）

近年來，隨著種植業(yè)結(jié)構(gòu)的調(diào)整，大力發(fā)展高產(chǎn)、優(yōu)質(zhì)、高效農(nóng)業(yè)，新疆甘薯種植面積有逐年擴大的趨勢，目前全疆甘薯種植面積約1萬hm2，主要分布在烏魯木齊市、昌吉回族自治州、沙灣縣、霍城縣、新源縣等地區(qū)。甘薯產(chǎn)業(yè)迅猛發(fā)展帶來豐厚效益的同時，病蟲害的危害日趨猖獗，僅塔城地區(qū)沙灣縣烏拉烏蘇鎮(zhèn)東海子村2010年近20hm2甘薯毀于甘薯莖線蟲病（又稱糠心?。?，減產(chǎn)30%以上，嚴重地塊造成絕產(chǎn)。研究該病的癥狀、發(fā)生特點，明確其病原種類，將為甘薯安全生產(chǎn)提供參考依據(jù)。20世紀80年代前，我國將甘薯莖線蟲病的病原定為鱗球莖莖線蟲［Ditylenchus dipsaci （Kühn）Filipjev］［1］，后尹光德等人［2］認為我國甘薯莖線蟲病原屬于腐爛莖線蟲（Ditylenchus destructor Thorne）。鱗球莖莖線蟲和腐爛莖線蟲的重要區(qū)別特征之一是側(cè)區(qū)的側(cè)線數(shù)目，前者為4條，后者6條［3－4］。也有人認為造成中國甘薯糠心病的線蟲可能同時存在有鱗球莖莖線蟲和腐爛莖線蟲［5－6］。但國外一直認為該病病原為鱗球莖莖線蟲（D.dipsaci）［7－8］。2003年，張淑玲報道福建發(fā)生的甘薯干裂腐爛病，癥狀似糠心病，經(jīng)病原鑒定是由雙尾滑刃線蟲和甘薯擬莖點霉復合侵染所致［9］。2003年以來，沙灣縣烏蘭烏蘇地區(qū)薯農(nóng)曾多次來我校反映薯田病害，通過對病田的現(xiàn)場調(diào)查及根據(jù)田間甘薯病害所表現(xiàn)出的癥狀特點，參考已報道的相關(guān)文獻［4，10－14］，認為該病害為甘薯莖線蟲病。為了進一步準確診斷和明確其病原的分類地位，了解其發(fā)病特點，有效控制其危害與蔓延，本文對該病病原進行了鑒定。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

采樣的工具主要有小手鏟、塑料袋等。室內(nèi)分離、殺死、固定甘薯病原線蟲的工具主要有帶乳膠管的漏斗、恒溫水浴鍋、TAF雙倍液（8%的甲醛）等。觀察、測量病原線蟲的工具和藥品主要有Olympus SZX10型體視顯微鏡、麥克奧迪DMBA400型生物顯微鏡、甘油、乳酸等。

1.2 病薯的采集

供試的甘薯病薯樣本采自塔城地區(qū)沙灣縣烏蘭烏蘇鎮(zhèn)東海子村的病田中。病薯樣品用保鮮袋密封，帶回室內(nèi)，保存于4℃冰箱。

1.3 線蟲的分離、殺死和固定

線蟲采用貝曼漏斗法分離［15］。分離獲得的線蟲經(jīng)55℃水浴恒溫處理5min后，用1倍TAF雙倍液固定，保存在玻璃瓶中待用。

1.4 致病性測定

參照采用章淑玲［9］和宮衛(wèi)波［16］的方法進行致病性測定。供試無病甘薯購自新疆石河子市蔬菜市場。病原線蟲用0.5%次氯酸鈉消毒2min后，移入0.5%青霉素和0.5%硫酸鏈霉素混合液中消毒10min，再經(jīng)2500r／min離心3min后棄去消毒液，用無菌水重復離心洗滌3次備用。選用薯塊大小一致，表面無傷口的新鮮健薯，用50%多菌靈可濕性粉劑600倍液浸泡消毒1h后自然晾干，用經(jīng)火焰消毒的解剖刀在薯塊上挖取一個約2cm深的三角形薯塊組織，用滅菌的滴管吸取表面消毒后的線蟲1000條左右接入三角形穴內(nèi)，然后將切取下的三角形薯塊組織塞回原處，用石蠟封口。接種后的薯塊置于26℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，35d后剖開甘薯觀察其侵染情況。

1.5 線蟲的鑒定

在解剖鏡下挑取已固定好的雌、雄線蟲各20條，采用系列脫水法用甘油作負載劑制作永久玻片或臨時玻片，置于麥克奧迪DMBA400型顯微鏡10×40倍下觀察、測量（蟲體側(cè)線在10×100倍下觀察），記錄形態(tài)學特征并拍照。根據(jù)所觀察到的特征，參照劉維志［4，12－17］、謝暉［18］等關(guān)于植物線蟲分類系統(tǒng)描述進行種屬鑒定，以確定分離所獲的線蟲是否為甘薯莖線蟲。

線蟲個體形態(tài)特征測量數(shù)據(jù)的代表符號及其定義：

n：測量的線蟲數(shù)；L：線蟲體長；W：線蟲體寬；St.L.：口針長度；Oe.L.：食道長度；Htoexp.：頭頂至排泄孔的距離；Cp.：后食道腺體長度；Tail：尾長；a：體長／蟲體最寬處體寬；b：體長／食道腺體長度；c：體長／尾長；c′：尾長／肛門處蟲體直徑；VA：肛門至陰門的蟲體距離／尾長；VBD：陰門處蟲體直徑；Spi.L.：交合刺長度。

2 結(jié)果與分析

2.1 田間癥狀觀察及描述

該病主要危害地下薯塊，地上部往往表現(xiàn)葉片發(fā)黃，似營養(yǎng)不良。感病薯塊重量明顯變輕，表皮多有壞疽或開裂，裂口處變褐色（圖1a）。切開病薯，薯塊內(nèi)組織變褐色，白色糠道相間其中，無白漿，呈棉絮狀，嚴重時薯內(nèi)變?yōu)楹诤稚▓D1b），濕度大時，病薯呈腐爛狀，擠壓時有褐色汁液流出。莖蔓染病后主蔓基部拐子上表皮出現(xiàn)黃褐色裂紋，后漸成褐色（圖1c），髓部呈白色干腐，嚴重的基蔓短，葉變黃或主蔓枯死。

2.2 致病性測定

接種35d后觀察接種薯塊，其整體外形不變，薯塊重量明顯變輕，切開薯塊，內(nèi)部組織出現(xiàn)糠腐，被侵染前端的病組織為白色，接種處組織變?yōu)楹职紫嚅g，嚴重時呈黑褐色（圖2），最后整個薯塊變成褐色糠心狀，后期濕度大時，出現(xiàn)薯塊內(nèi)部腐爛。試驗中所接種的甘薯全部發(fā)病，接種癥狀與田間的病薯表現(xiàn)一致。

圖1 甘薯莖線蟲病外觀癥狀Fig.1 The symptom of sweet potato stem nematode disease

圖2 接種甘薯內(nèi)部癥狀Fig.2 The interior symptom of sweet potato inoculated with nematodes

2.3 病原鑒定

2.3.1 特征數(shù)據(jù)測量

病原線蟲的測量結(jié)果如下：（單位：μm）

雌蟲（n＝20）：L＝953～1155；W＝19～41；St.L＝5.5～8.0；Oe.L＝102.3～148.7；Htoex.p＝102～119；Cp＝23～43；Tail＝69.8～87.5；VBD＝20～32.8；VA＝110～153.2；a＝26.9～49.7；b＝6.8～9.3；c＝11.4～17.6；c′＝3.75～4.39；

雄蟲（n＝20）：L＝964～1078；W＝17.3～29；St.L＝6.6～7.7；Oe.L＝127.4～167.5；Htoex.p＝91.8～113；Cp＝25～46；Tail＝65.3～85.2；a＝32.9～46.2；b＝6.3～8.5；c＝4.0～6.9；c′＝3.8～5.3。

2.3.2 病原線蟲形態(tài)描述

在生物顯微鏡下觀察，病原線蟲雌、雄成蟲呈線形或蠕蟲形，雄蟲體型小于雌蟲。溫熱殺死后蟲體稍向腹面彎曲。線蟲頭部前端唇區(qū)較平，口腔內(nèi)口針長5.5～8.0μm，有明顯的口針基部球，圓形（圖3a）。食道前體細狹，中食道球卵圓形（圖3b），肌肉質(zhì)，食道腺明顯，從背面或側(cè)面覆蓋腸的前端，屬墊刃型食道。排泄孔位于腸與食道交接處上方。半月體恰在排泄孔前。線蟲體表角質(zhì)環(huán)不明顯，蟲體側(cè)區(qū)有6條側(cè)線（圖3e）。線蟲尾部錐形，稍向腹面彎曲，尾端細圓（圖3f）。雌蟲陰門清晰，稍外凸（圖3d），單卵巢，向前伸展有時可達食道區(qū)，成熟卵單行排列。卵白色，橢圓形（圖3g）。后陰子宮囊向肛門延伸，長度約是陰門至肛門距離的3／4。尾長是肛門處蟲體直徑的3～5倍，末端窄圓。雄蟲尾與雌蟲的尾相似或略窄，尾端細圓；交合傘始于交合刺前端相對應(yīng)的位置，向后伸至尾長的3／4處；交合刺向腹面彎曲，前尖后寬，基部膨大（圖3c）；引帶簡單，短。

2.3.3 鑒定結(jié)果

根據(jù)顯微觀察線蟲重要形態(tài)分類特征，線蟲蟲體線形，側(cè)區(qū)為6條側(cè)線；后陰子宮囊較長，延伸到尾長的3／4；蟲體的尾末端鈍圓等，結(jié)合所測量數(shù)據(jù)，與劉維 志［4，17］、林 茂 松［14］、張 紹 升［19］、尹 光 德［2］等人對馬鈴薯莖線蟲D.destructor Thorne，1945的描述基本一致。因此，作者將新疆沙灣縣烏蘭烏蘇鎮(zhèn)甘薯莖線蟲病病原鑒定為馬鈴薯腐爛莖線蟲（D.destructor Thorne）。屬于線蟲門（Nematoda），墊刃目（Tylenchida），墊刃總科（Tylenchioidea），粒線蟲科（Anguinidae），莖線蟲屬（Ditylenchus）。

圖3 病原線蟲形態(tài)特征Fig.3 Morphological characteristics of nematodes

3 討論

馬鈴薯腐爛莖線蟲是農(nóng)作物重要病原線蟲，主要通過種薯、薯苗的調(diào)運、糞肥以及土壤傳播［10－12］。甘薯莖線蟲病是甘薯生產(chǎn)過程中危險性病害之一，被我國列入檢疫性病害。該病一旦被傳入，其傳播途徑較廣，線蟲抗逆性強，易產(chǎn)生嚴重危害［6，13，20］。因此，新疆塔城地區(qū)有關(guān)部門應(yīng)引起重視，加強檢疫，防止其蔓延。

馬鈴薯腐爛莖線蟲主要生活在土壤的耕作層，屬遷移性專性寄生線蟲，除了利用口針造成寄主組織機械損傷外，主要的致病機理是其食道腺的分泌物對寄主細胞產(chǎn)生直接或間接的作用［21］。Myer等推測，馬鈴薯腐爛莖線蟲引起植物組織壞死、腐爛是由于其食道腺分泌的水解酶降解離析細胞壁所致［22］。作者在病薯病原分離的過程中除獲得大量線蟲外，而且還獲得了大量常見腐生微生物，如鐮刀菌、鏈格孢菌、青霉菌、根霉菌及黑曲霉菌等，這些微生物是否參與或協(xié)助病原線蟲對甘薯的致病作用還有待進一步研究。

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