黃 琦，吳 芹，李 菲，王令儀，石京山

(1.遵義醫(yī)學院藥理學教研室暨貴州省基礎藥理重點實驗室，貴州 遵義 563099;2.遵義醫(yī)學院附屬醫(yī)院 內(nèi)分泌科，貴州遵義 563099)

非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)是一種與胰島素抵抗和遺傳易感密切相關的代謝應激性肝臟損傷。2型糖尿病和高脂血癥患者NAFLD患病率分別為 28% ～ 55% 和 27% ～ 92%［1－2］。NAFLD 的危險因素包括:高脂肪高熱量膳食結構、胰島素抵抗、代謝綜合征及其組分(肥胖、高血壓、血脂紊亂和2型糖尿病)［2］。隨著經(jīng)濟發(fā)展及人民生活水平提高，糖尿病患者日益增多，由中華醫(yī)學會糖尿病學分會(CDS)組織的糖尿病流行病學調查結果顯示，在20歲以上的人群中，年齡標化的糖尿病患病率為9.7%，而糖尿病前期的比例更高達15.5%［3］，隨之糖尿病合并NAFLD患者數(shù)劇增。二甲雙胍作為一種經(jīng)典的降糖藥物在臨床已廣泛應用多年，其主要作用機制為抑制肝葡萄糖輸出，增加對葡萄糖的攝取和利用。本實驗采用高脂高糖飲食聯(lián)合小劑量STZ誘導糖尿病大鼠模型，觀察二甲雙胍對糖尿病大鼠NAFLD的影響。

1 材料與方法

1.1 藥品和試劑 鏈脲佐菌素(Sigma公司)，鹽酸二甲雙胍片(貴州天安藥業(yè)公司)，大鼠超敏胰島素放免試劑盒(美國LINCO公司)，游離脂肪酸試劑盒(英國RANDOX公司)，AU2700型全自動生化分析儀(日本 OLYMPUS公司)，GAMBYTCR型Y放免儀 (Gcr－2010)(中國科大中佳公司)。

1.2 高脂高糖飼料 配比參照Srinivasan等和周迎生等的方法改良［4－5］，含 20%豬油、10%蔗糖、5%蛋黃。

1.3 模型制備及給藥 雄性SD大鼠，清潔級，體重160～180 g，由第三軍醫(yī)大學大坪醫(yī)院實驗動物中心提供(許可證:SCXK－軍2007－017)?；A飼料飼養(yǎng)1周后，按體重隨機分為2組:正常對照組10只，繼續(xù)普通飼料飼養(yǎng);模型組25只，給予高脂高糖飼料(基礎飼料+20%豬油+10%蔗糖+5%蛋黃)飼養(yǎng)?；A飼料由第三軍醫(yī)大學大坪醫(yī)院實驗動物中心提供。予高脂高糖飼料連續(xù)飼養(yǎng)6周，禁食8 h后腹腔注射STZ 40 mg/kg一次(臨用前用pH 4.4的0.1 mol/L檸檬酸－檸檬酸鈉緩沖液配制)，于注射后第3天禁食8 h，剪尾取血，篩選出血糖≥11.1 mmol/L，并持續(xù)保持上述標準1周不變者定為糖尿病大鼠，剔除不成模的大鼠并按血糖隨機分為2組:模型組、二甲雙胍組(100 mg/kg)，繼續(xù)高脂高糖飼料飼養(yǎng)。每日灌胃給藥1次，連續(xù)4周，正常對照組及模型組給予相應體積的雙蒸水灌胃。

1.4 指標檢測 ① 生化指標:最后一次給藥后，禁食8 h后將各組大鼠斷尾取血，采用全自動血生化分析儀分別測定各組大鼠的空腹血糖(FBG)、甘油三酯(TG)、總膽固醇(CHOL)水平，應用放射免疫法測定空腹胰島素(FINS)，酶法測定游離脂肪酸(FFA);②計算胰島素抵抗指數(shù)(HOMA－IR)=FBG ×FINS/22.5［6］;③肝組織 HE 染色:取大鼠肝臟組織固定后行HE染色，觀察各組大鼠肝臟形態(tài)學變化。

2 結果

2.1 二甲雙胍對糖尿病大鼠血糖、血脂的影響與正常對照組比較，模型組FBG、FINS、HOMAIR明顯升高(P ＜0.05);與模型組比較，二甲雙胍組FBG、FINS、HOMA －IR 顯著降低(P ＜0.05);與正常對照組比較，模型組大鼠FFA、TG明顯升高(P ＜0.05);與模型組比較，二甲雙胍組FFA、TG無顯著差異(P ＞0.05，見表1)。

2.2 二甲雙胍對糖尿病大鼠肝臟脂肪變性的影響 正常對照組大鼠肝小葉結構清楚，肝細胞結構正常，而模型組大鼠肝小葉內(nèi)肝細胞索排列紊亂，肝細胞出現(xiàn)脂變，表現(xiàn)為空泡狀，細胞核被脂滴擠向一邊，形似脂肪細胞。二甲雙胍100 mg/kg組大鼠肝小葉結構較清楚，肝細胞內(nèi)脂滴明顯減少(見圖1)。

表1 二甲雙胍對糖尿病大鼠FBG、FINS、HOMA－IR、FFA、TG、CHOL的影響(x ± s，n=10)

圖1 二甲雙胍對糖尿病模型大鼠肝臟脂肪變性的影響(HE×400)

3 討論

高脂飲食可引起肝臟和外周組織的胰島素抵抗，血中的FFA增加，當進入肝細胞的FFA超過肝臟的氧化能力時就會轉化為TG，而TG在肝細胞內(nèi)沉積，導致肝臟發(fā)生脂肪變性。

在本研究中，給予高脂高糖飼料喂養(yǎng)及腹腔注射 STZ后，模型大鼠 FBG、FINS、HOMA －IR、FFA、TG均顯著增高，肝臟發(fā)生脂肪變性，成功復制2型糖尿病大鼠模型，實驗結果表明糖尿病大鼠模型存在不同程度胰島素抵抗，且合并脂代謝紊亂及肝臟脂肪變性，與文獻報道相符合［7－8］。

2型糖尿病由于胰島素抵抗致糖代謝障礙、脂肪動員增加、FFA釋放相應增加，一方面肝細胞對FFA的攝取及用于合成TG相繼增多，造成肝內(nèi)脂肪蓄積;另一方面，F(xiàn)FA的“脂毒性”加重了胰島β細胞的損害及胰島素抵抗，形成惡性循環(huán)。因此，胰島素抵抗是糖尿病并脂肪肝的共同發(fā)病基礎［9］，且有研究顯示，胰島素增敏劑對改善2型糖尿病導致的肝病療效明確［10－11］。

本研究中二甲雙胍100 mg/kg能夠降低糖尿病大鼠FINS、HOMA－IR水平，同時 FBG明顯下降，但仍較正常大鼠水平高，表明二甲雙胍改善了糖尿病大鼠胰島素抵抗，增加胰島素敏感性，從而參與發(fā)揮降低血糖及減輕肝臟脂肪變性的作用。二甲雙胍治療2型糖尿病尚伴有血脂譜改善是其治療作用之一，而在本研究中二甲雙胍100 mg/kg對糖尿病大鼠血清FFA、TG水平有一定的降低趨勢，但無顯著改善作用，考慮與其單獨應用且用量較小有關。

綜上所述，二甲雙胍100 mg/kg對高脂高糖聯(lián)合小劑量鏈脲佐菌素誘導的糖尿病大鼠不僅有降血糖作用，還對糖尿病合并的NAFLD有一定的治療作用，其作用機制與改善胰島素抵抗有關，具體的作用機制有待進一步研究。

［1］de Alwis N M，Day C P.Non － alcoholic fatty liver disease:the mist gradually clears［J］.J Hepatol，2008，48(Suppl)1:104－112.

［2］Fan J G，Saibara T，Chitturi S，et al.What are the risk factors and settings of non－alcoholic fatty liver disease in Asia－Pacific［J］.J Gastroenterol Hepatol，2007，22:794 －800.

［3］Yang W，Lu J，Wang J ，et al.Prevalence of Diabetes among Men and Women in China［J］.N Engl J Med，2010，362:1090－1101.

［4］Srinivasan K，Viswanad B，Asrat L，et al.Combination of high－fat diet－fed and low－dose streptozotocin－treated rat:a model for type 2 diabetes and pharmacological screening［J］.Pharmacol Res，2005，52:313 －320.

［5］周迎生，高妍.高脂喂養(yǎng)聯(lián)合鏈脲佐菌素注射的糖尿病大鼠模型特征［J］.中國實驗動物學報，2005，13(3):154.

［6］張家慶.新的HOMA－IR－從空腹血糖、空腹胰島素測胰島素抵抗［J］.中華糖尿病雜志，2005，13(4):245 －246.

［7］梁海霞，原海燕，李煥德，等.高脂喂養(yǎng)聯(lián)合低劑量鏈脲佐菌素誘導的2型糖尿病大鼠模型穩(wěn)定性觀察［J］.中國藥理學通報，2008，24(4):551 －555.

［8］李國生，劉栩晗，黃瀾，等.2型糖尿病中國地鼠脂肪肝相關胰島素抵抗的形成機制［J］.世界華人消化雜志，2011，19(5):457 －466.

［9］肖鳳英，胡愛明.糖肝煎對糖尿病性脂肪肝模型大鼠糖脂代謝及轉胺酶的影響［J］.中國老年學雜志，2007(16):1560－1562.

［10］Portincasa P，Grattagliano I，Palmieri VO，et al.Current pharmacological treatment of nonalcoholic fatty liver［J］.J Curr Med Chem，2006，13(24):2889 －2900.

［11］Chavez－ Tapia N C，Barrientos－Gutierrez T，Tellez－Avila FI，et al.Insulin sensitizers in treatment of nonalcoholic fatty liver disease:Systematic review［J］.World J Gastroenterol，2006，12(48):7826 － 7831.