危 晴 王曉杰 王維彬 張佳琦 陳 亮

（1.北京電子科技職業(yè)學(xué)院，北京 100029；2.北京化工大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，北京 100029）

烏骨藤又名通光散、通光藤，是蘿藦科牛奶菜屬植物通光藤 （Marsdenia tenacissima （Roxb）Wight et Am.）的干燥藤莖［1］，主要分布在云南、貴州、廣東、廣西等地，含酚酸類、甾體皂苷類、多糖類、生物堿類等有效成分［2－5］。研究［6－8］表明烏骨藤具有清熱解毒、止咳平喘、消炎鎮(zhèn)痛、抗腫瘤、抗病毒、調(diào)節(jié)免疫、保肝利尿等作用，已制成注射劑和片劑等多種劑型應(yīng)用于臨床。張慧［7］、趙陸華等［9］均對(duì)烏骨藤的脂溶性成分進(jìn)行了研究，結(jié)果表明烏骨藤脂溶性成分中含有脂肪酸、甾類、醇類、角鯊烯等主要成分，其中脂肪酸中的不飽和脂肪酸具有抗腫瘤的活性成分，脂溶性成分中的角鯊烯也具有抑制腫瘤生長(zhǎng)的作用。目前脂肪酸的提取方法主要有超聲波輔 助 提 取 法［10，11］、超 臨 界 提 取 法［12］、索 氏 提 取 法［13］。李雙石等［14］采用超臨界萃取烏骨藤揮發(fā)油的主要成分為二十四烷、油酸、油酸乙酯、二十八烷。王曉杰等［15］采用頂空固相微萃取烏骨藤揮發(fā)油，采用干法前處理得到的主要成分為1－氯－4－［（4－硝基苯）磺?；荼?、α－蒎烯、正丁醇、乙酸乙酯，采用濕法前處理得到的主要成分為1－辛烯－3－醇、蘇合香醇、反氧化芳樟醇、苯乙酮。以上方法繁瑣且對(duì)儀器的要求較高。本試驗(yàn)采用水浴回流提取烏骨藤中的脂肪酸，同時(shí)利用氣相色譜－質(zhì)譜（GC－MS）聯(lián)用技術(shù)對(duì)烏骨藤脂肪酸中的活性成分進(jìn)行分析鑒定，探討不同提取方法對(duì)烏骨藤脂肪酸組成的影響，為烏骨藤脂肪酸的提取和開(kāi)發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

1.1.1 材料與試劑

烏骨藤：購(gòu)自安徽毫州；

CO2氣體：純度99.5%，北京天佑順氣體有限公司；

石油醚（60～90℃）、氫氧化鉀、甲醇、正己烷、無(wú)水硫酸鈉：分析純，北京化工廠。

1.1.2 主要儀器設(shè)備

氣相測(cè)譜儀：GC－MS7890A型，安捷倫公司；

質(zhì)譜儀：5975型，安捷倫公司；

電子天平 ：AR224CN型，奧豪斯儀器上海有限公司；

恒溫水浴鍋：HH－S型，江蘇省金壇市醫(yī)療儀器廠；

旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀：LR4000型，瑞士Buchi公司。

1.2 方法

1.2.1 烏骨藤樣品制備

（1）烏骨藤的預(yù)處理：將烏骨藤用蒸餾水沖洗后，放入40℃電熱鼓風(fēng)干燥箱中干燥2h，粉碎過(guò)40目篩，置于試劑瓶中備用。

（2）水浴回流提?。涸?50mL圓底燒瓶中加入烏骨藤粉10g，石油醚150mL，放入90℃恒溫水浴鍋中，回流提取4h，提取液減壓蒸餾得揮發(fā)油，重量為1.422g。

（3）脂肪酸的甲酯化：取烏骨藤油樣50mg，置于10mL具塞試管中，依次加入0.5mL苯、0.5mL乙醚和1.0mL 2%NaOH－CH3OH溶液，45℃水浴酯化20min，冷卻后加水定容至10mL，待分層后吸取上清液用于GC／MS分析［16，17］。

1.2.2 GC－MS分析

（1）色譜條件：色譜柱為DB－FFAP柱（30m×0.25mm×0.5μm）；載氣：氦氣（99.999%）；進(jìn)樣量：1μL；進(jìn)樣口溫度：230℃；流速：1.0mL／min；溶劑延遲：5.00min；柱溫：升溫程序?yàn)槠鹗紲囟?00℃，保持2min，以5℃／min速率升到260℃，保持20min。

（2）質(zhì)譜條件：電子轟擊離子源（EI），電離能量為70eV；離子源溫度為230℃；四級(jí)桿溫度150℃；接口溫度為250℃；激活電壓1.5V；質(zhì)量掃描范圍m／z35～450。

2 結(jié)果與討論

2.1 GC－MS分析烏骨藤中脂肪酸的化學(xué)成分

通過(guò)對(duì)烏骨藤成分進(jìn)行GC－MS分析，得到總離子流譜圖，見(jiàn)圖1。

應(yīng)用色譜峰面積歸一法測(cè)定各組分的相對(duì)含量，鑒定結(jié)果見(jiàn)表1。

由表1可知，烏骨藤中共檢測(cè)出27種成分，占提取物總量的97.36%。其中脂肪酸類16種，占提取物總量的78.36%，烴類9種，占提取物總量的16.31%，醇類2種，占提取物總量的3.14%。脂肪酸中含量較多的為正十六碳酸（18.08%）、（E）－9－十八碳烯酸（16.70%）、（10E，12Z）－十八碳二烯酸（16.38%）、肉桂酸（5.28%）。

圖1 烏骨藤水浴回流提取物總離子流圖Figure 1 The gas chromatogram of water refluxing extraction of Caulis marsdeniae tenocissimae

表1 烏骨藤提取物的化學(xué)成分及相對(duì)含量Table 1 Chemical composition and relative content of Caulis marsdeniae tenocissimae

2.2 烏骨藤中脂肪酸生物活性成分分析

水浴回流提取烏骨藤揮發(fā)油27種成分中，有多種具有生物活性，如含量較高的不飽和脂肪酸（10E，12Z）－十八碳二烯酸（16.70%）和（E）－9－十八碳烯酸（16.38%）具有抗氧化、抗自由基、抗腫瘤、增強(qiáng)免疫的作用［18］。不飽和脂肪酸中的（10E，12Z）－十八碳二烯酸（16.38%）具有抗動(dòng)脈粥樣化形成，抗糖尿病、抗過(guò)敏、調(diào)節(jié)免疫、促進(jìn)生長(zhǎng)、降低身體脂肪并增加瘦肉量及影響骨骼形成等多種生理作用［19］。飽和脂肪酸中含量較高的十六碳酸具有較強(qiáng)的增強(qiáng)心肌活性的功能［20］。角鯊烯（1.46%）是一種具有抗氧化、增強(qiáng)免疫功能和抑制腫瘤生長(zhǎng)的化合物［7］。

3 結(jié)論

通過(guò)水浴回流法提取烏骨藤中的脂肪酸，利用氣相色譜－質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)進(jìn)行分析檢測(cè)，共鑒定出27種化合物，其中6種不飽和脂肪酸（43.77%）、10種飽和脂肪酸（33.53%）、2種醇類（5.18%）、9種烴類（12.48%）。這些化合物中有多種生物活性成分，如含量較高的（E）－9－十八碳烯酸 （16.70%）、（10E，12Z）－十八碳二烯酸（16.38%）、十六酸（18.08%）和含量較少的角鯊烯（1.46%）均有抗氧化、抗自由基、抗癌的作用，與烏骨藤的藥理活性相一致。烏骨藤揮發(fā)油中的其它成分是否有生物活性有待進(jìn)一步研究。

1 趙陸華，相秉仁，陸紅柳.烏骨藤藥材HPLC指紋圖譜研究［J］.中成藥，2008，30（8）：1 093～1 095.

2 王文驪，張雪慧.烏骨藤藥材中綠原酸的含量測(cè)定研究［J］.現(xiàn)代中醫(yī)藥，2009，29（5）：79～80.

3 張家俊，胡德禹，宋寶安，等.烏骨藤化學(xué)成分和生物活性研究進(jìn)展［J］.貴州大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2007，24（2）：213～216.

4 張慧，裴志東，李春雪，等.烏骨藤的化學(xué)成分研究［J］.中國(guó)中藥雜志，2010，35（23）：3 175～3 177.

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6 張文平，王昌利，仲英，等.烏骨藤及其制劑的研究進(jìn)展［J］.齊魯藥事，2006，25（5）：293～295.

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11 孫曉飛，時(shí)素珍，楊國(guó)紅.遠(yuǎn)志脂肪油成分分析［J］.中藥材，2000，23（1）：35～37.

12 韓小金，張榮，畢繼誠(chéng).超臨界CO2萃取紅花籽油的實(shí)驗(yàn)研究［J］.食品與機(jī)械，2007，23（2）：23～26.

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14 李雙石，王曉杰，李浡，等.烏骨藤超臨界萃取油氣相色譜－質(zhì)譜聯(lián)用分析［J］.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2012，23（11）：2 673～2 675.

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16 寇秀穎，于國(guó)萍.脂肪和脂肪酸甲酯化方法的研究［J］.食品研究與開(kāi)發(fā)，2005，26（2）：46～47.

17 陶靜，王曉春，范艷萍，等.兩種不同產(chǎn)地松籽脂肪酸成分的GC／MS分析［J］.食品與機(jī)械，2009，25（5）：46～49.

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19 范亞葦.共軛亞油酸對(duì)心血管脂肪代謝的影響研究［D］.南昌：南昌大學(xué)，2007.

20 王慧娜，趙樺.開(kāi)口箭脂肪酸成分氣相色譜－質(zhì)譜分析［J］.中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2011，17（8）：85～88.