李漢臣，趙希艷，吉志新，楊曉寬，繳寶豐

（1.河北科技師范學(xué)院，河北秦皇島 066600；2.秦皇島糧豐貿(mào)易有限公司，河北秦皇島 066000）

關(guān)于黃粉蟲(chóng)（Tenebrio molitorLinneeus）的營(yíng)養(yǎng)成分和營(yíng)養(yǎng)價(jià)值已有諸多報(bào)道。黃粉蟲(chóng)的飼養(yǎng)也具有比較成熟的技術(shù)，適合進(jìn)行工廠化生產(chǎn)[1-2]，是一種極具開(kāi)發(fā)潛力的昆蟲(chóng)資源。李漢臣等就黃粉蟲(chóng)及其成分對(duì)小鼠的生長(zhǎng)發(fā)育、學(xué)習(xí)記憶能力、抗疲勞能力等方面的營(yíng)養(yǎng)保健作用做了初步報(bào)道[3-4]。近年來(lái)，高血糖和高脂血癥的發(fā)病率逐年升高，輔助降血糖和降血脂保健食品的開(kāi)發(fā)也受到廣泛關(guān)注。因此，進(jìn)一步研究了不同劑量的黃粉蟲(chóng)脫脂粉對(duì)小鼠血糖和血脂水平的影響。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 黃粉蟲(chóng)及其脫脂粉

黃粉蟲(chóng)由秦皇島糧豐貿(mào)易有限公司養(yǎng)殖并提供，微波干燥后經(jīng)超臨界二氧化碳流體萃取除去油脂，剩余物為脫脂粉，粉碎40目過(guò)篩備用。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

ICR品系雌性小鼠，購(gòu)于北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司，合格證號(hào)：0163865，0156761。飼養(yǎng)管理?xiàng)l件為：室溫（23±2）℃，相對(duì)濕度為 50%～60%，自然照明。飼喂方法采用摻入飼料自由攝食，飲水均為純凈水。

1.1.3 動(dòng)物飼料

基礎(chǔ)飼料配方：玉米粉31.5%、小麥粉20%、麩皮10%、豆粕22%、魚(yú)粉8%、骨粉2.5%、酵母粉2%、預(yù)混料4%[5]。

高脂飼料配方：78.8%基礎(chǔ)飼料、1%膽固醇、10%蛋黃粉、10%豬油、0.2%豬膽鹽[6]。

對(duì)血糖影響試驗(yàn)劑量組飼料配方：黃粉蟲(chóng)脫脂粉分別占飼料總量的20%、10%、5%，其余為基礎(chǔ)飼料。

對(duì)血脂影響試驗(yàn)劑量組飼料配方：黃粉蟲(chóng)脫脂粉分別占飼料總量的20%、10%、5%，其余為高脂飼料。

飼料按配方混拌均勻后，用預(yù)先溫?zé)岬募儍羲疂駶?rùn)并攪拌，直至飼料軟硬度適當(dāng)，以模具成型后于鼓風(fēng)干燥箱中90℃～100℃烘干，冷卻后備用。

1.2 主要試劑與儀器設(shè)備

四氧嘧啶（Alloxan）：Sigma公司；膽固醇、膽鹽、肝素鈉：北京奧博星生物技術(shù)有限責(zé)任公司。

HA221-50-06型超臨界萃取裝置：南通市華安超臨界萃取有限公司；干片式快速血脂檢測(cè)儀：南京豐達(dá)醫(yī)療儀器有限公司；GT-1640型日本京都血糖儀；GZX-9240型數(shù)顯鼓風(fēng)干燥箱；分析天平，電子秤，等。

1.3 黃粉蟲(chóng)脫脂粉對(duì)小鼠血糖影響試驗(yàn)的動(dòng)物分組及處理

1.3.1 糖尿病小鼠模型的建立

將小鼠購(gòu)回適應(yīng)實(shí)驗(yàn)室環(huán)境1周后，選25 g～27 g者，禁食（不禁水）12 h后，留10只腹腔注射生理鹽水為對(duì)照，其余分別按總劑量270 mg/kg體重間隔24 h分兩次腹腔注射0℃～4℃下現(xiàn)配的四氧嘧啶生理鹽水溶液，用于制備糖尿病模型[7]。前后兩次注射劑量為3∶2，第一次注射完4 h后，各組均給予5%的葡萄糖水自由飲用，預(yù)防出現(xiàn)低血糖引起小鼠死亡，4 h后換為普通純凈水；第二次注射完后自由進(jìn)食和飲水。每天于固定時(shí)間測(cè)定各組小鼠平均進(jìn)食量和平均飲水量。1周后禁食（不禁水）12 h，斷尾取血測(cè)定空腹血糖，血糖值大于11.1 mmol/L者視為造模成功[8-9]。

1.3.2 動(dòng)物分組及處理

將成模小鼠按血糖值從小到大排序，淘汰血糖值大于25 mmol/L和小于11.1 mmol/L者，取其中40只按隨機(jī)區(qū)組分組設(shè)計(jì)方法平均分為4組，分別為模型對(duì)照組和高、中、低劑量組。其中模型對(duì)照組喂給基礎(chǔ)飼料；喂給含黃粉蟲(chóng)脫脂粉20%、10%、5%飼料者分別為高、中、低劑量組。每天更換墊料及清洗飲水瓶。連續(xù)喂養(yǎng)20 d，分別于第10天和第20天禁食（不禁水）12 h，斷尾采血測(cè)定空腹血糖值。

1.4 黃粉蟲(chóng)脫脂粉對(duì)小鼠血脂影響試驗(yàn)的動(dòng)物分組及處理

選?。?3.5g±1）g小鼠50只隨機(jī)分為5組，喂飼基礎(chǔ)飼料為正常對(duì)照組，喂飼高脂飼料為模型對(duì)照組，另喂飼含黃粉蟲(chóng)脫脂粉20%、10%、5%的高脂飼料者分別為高、中、低劑量組。保證小鼠良好的生活衛(wèi)生條件，連續(xù)喂養(yǎng)30 d后，禁食（不禁水）12 h，摘眼球采血于事先制備好的抗凝管中，測(cè)定小鼠全血中總膽固醇（TC）、總甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白膽固醇（HDLC）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）的含量。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

數(shù)據(jù)以（±s）表示，采用 t檢驗(yàn)，以 Excel 2003 軟件分析數(shù)據(jù)。

2 結(jié)果與分析

2.1 建模期間四氧嘧啶對(duì)小鼠進(jìn)食量、飲水量和血糖值的影響

開(kāi)始時(shí)各組小鼠進(jìn)食量和飲水量差別不明顯，給藥各組小鼠腹腔注射四氧嘧啶后第3天開(kāi)始出現(xiàn)多飲、多食、多尿的癥狀，從第3天至第7天給藥各組小鼠平均進(jìn)食量和飲水量均顯著高于對(duì)照組（見(jiàn)表1），而對(duì)照組小鼠平均進(jìn)食量和飲水量比較平穩(wěn)。與對(duì)照組小鼠相比，給藥組小鼠血糖水平均極顯著升高，說(shuō)明該方法建立小鼠糖尿病模型成功。

表1 糖尿病模型及對(duì)照組小鼠的平均進(jìn)食量、平均飲水量和血糖值（±s）Table 1 Average feed and water intake and blood glucose level of control and diabetes model group（±s）

表1 糖尿病模型及對(duì)照組小鼠的平均進(jìn)食量、平均飲水量和血糖值（±s）Table 1 Average feed and water intake and blood glucose level of control and diabetes model group（±s）

注：與對(duì)照組相比，a：P＜0.01。

血糖值/（mmol/L）對(duì)照組 10 3.9±0.3 5.2±0.5 3.78±0.21糖尿病建模組 70 7.3±1.3 31±4.4 13.25±4.47a組別 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物數(shù)平均進(jìn)食量/（g/d）平均飲水量/（mL/d）

2.2 黃粉蟲(chóng)脫脂粉對(duì)糖尿病小鼠血糖水平的影響

黃粉蟲(chóng)脫脂粉對(duì)糖尿病小鼠血糖水平的影響，見(jiàn)表2。

表2 黃粉蟲(chóng)脫脂粉對(duì)各組小鼠血糖水平的影響（±s）Table 2 Effects of fatless Tenebrio molitor Linneeus powder on blood glucose level in varided group mice（±s）

表2 黃粉蟲(chóng)脫脂粉對(duì)各組小鼠血糖水平的影響（±s）Table 2 Effects of fatless Tenebrio molitor Linneeus powder on blood glucose level in varided group mice（±s）

注：a與喂養(yǎng)開(kāi)始相比P＜0.05。

第20天血糖值/（mmol/L）模型對(duì)照組 13.31±2.62 16.06±6.51 13.48±6.38高劑量組 13.33±2.74 15.04±6.84 11.70±5.82中劑量組 13.28±2.50 15.16±5.40 11.14±4.41低劑量組 13.11±2.52 18.25±6.89a 17.28±8.65a組別 喂養(yǎng)開(kāi)始血糖值/（mmol/L）第10天血糖值/（mmol/L）

從表2可知，連續(xù)喂給糖尿病模型小鼠黃粉蟲(chóng)脫脂粉10 d和20 d后，高、中、低劑量組與對(duì)照組小鼠相比，血糖值均未見(jiàn)顯著差異。同時(shí)，高、中同一劑量組小鼠喂養(yǎng)前后其血糖值也無(wú)顯著差異，低劑量組小鼠血糖值還有繼續(xù)升高趨勢(shì)。說(shuō)明不同劑量的黃粉蟲(chóng)脫脂粉對(duì)該糖尿病模型小鼠血糖水平無(wú)顯著降低作用。

2.3 黃粉蟲(chóng)脫脂粉對(duì)不同處理小鼠血脂水平的影響

黃粉蟲(chóng)脫脂粉對(duì)不同處理小鼠血脂水平的影響，見(jiàn)表3。

表3 黃粉蟲(chóng)脫脂粉對(duì)各組小鼠血脂水平的影響（±s）Table 3 Effects of fatless Tenebrio molitor Linneeus powder on blood lipid level in varided group mice（±s）

表3 黃粉蟲(chóng)脫脂粉對(duì)各組小鼠血脂水平的影響（±s）Table 3 Effects of fatless Tenebrio molitor Linneeus powder on blood lipid level in varided group mice（±s）

注：a與正常對(duì)照組相比P＜0.05，b與模型對(duì)照組相比P＜0.05，bb與模型對(duì)照組相比P＜0.01。

LDL-C/（mmol/L）正常對(duì)照組 1.76±1.41 0.47±0.54 0.95±1.03 0.51±0.57模型對(duì)照組 3.47±1.33a 0.95±0.49a 1.95±0.73a 0.89±0.85高劑量組 1.73±1.40b 0.41±0.10bb 0.71±0.74bb 0.96±1.14中劑量組 1.89±1.63b 0.50±0.61bb 1.02±0.75bb 0.64±0.91低劑量組 1.96±1.46b 0.55±0.81b 0.78±0.76bb 0.92±1.49組別 TC/（mmol/L）TG/（mmol/L）HDL-C/（mmol/L）

從表3數(shù)據(jù)可知，模型對(duì)照組小鼠全血TG和TC含量均顯著高于正常對(duì)照組。對(duì)于喂飼高脂飼料時(shí)血液中HDL-C含量是升高還是降低文獻(xiàn)中各有報(bào)道，本實(shí)驗(yàn)中HDL-C含量模型對(duì)照組也顯著高于正常對(duì)照組，這可能與TC水平升高幅度較大有關(guān)，其原因需要進(jìn)一步探索。但仍能夠說(shuō)明該方法建立小鼠高血脂模型成功。

高、中、低劑量組小鼠全血中TC、TG和HDL-C含量均顯著或極顯著低于模型對(duì)照組，且趨于正常對(duì)照組水平；而各劑量組之間差異不顯著。說(shuō)明給小鼠喂飼高脂飼料時(shí)，摻入不同劑量黃粉蟲(chóng)脫脂粉能有效抑制其血脂水平的升高，且5%劑量即可達(dá)到理想效果。

3 結(jié)論與討論

給該試驗(yàn)四氧嘧啶致糖尿病模型小鼠飼料中添加不同劑量黃粉蟲(chóng)脫脂粉，均不能有效降低其升高的血糖水平。而給小鼠高脂飼料的同時(shí)，在其中添加黃粉蟲(chóng)脫脂粉含量達(dá)5%劑量時(shí)，即可有效預(yù)防其血液甘油三酯和膽固醇水平的升高。

本文黃粉蟲(chóng)脫脂粉對(duì)血糖水平的影響試驗(yàn)中采用注射四氧嘧啶法制備小鼠糖尿病模型，其機(jī)理是部分損傷小鼠胰腺β細(xì)胞導(dǎo)致胰島素分泌不足造成，試驗(yàn)中未發(fā)現(xiàn)對(duì)已升高的血糖水平有顯著改善作用；但對(duì)于常見(jiàn)的由于胰島素受體異常所致糖尿病是否有效需進(jìn)一步研究。在其對(duì)血脂水平的影響試驗(yàn)中本文只進(jìn)行了預(yù)防性試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)有顯著抑制小鼠血脂水平升高的效果；但對(duì)于已形成高血脂水平的小鼠是否有治療性作用也需進(jìn)一步研究。

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