吳文君，杜菲菲，劉全旭，宮 婷，高 明

(大連大學(xué)醫(yī)學(xué)院，遼寧大連 116622)

復(fù)方兒茶止瀉霜(CCAO)具有收斂、斂瘡、抗菌和消炎等多種功能，臨床用于治療小兒濕熱泄瀉效果較好。2012年12月，我們通過(guò)建立炎癥動(dòng)物模型，對(duì)CCAO的抗炎作用進(jìn)行研究，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物、試劑與儀器 清潔級(jí)昆明種小鼠90只，18～22 g，雌雄各半;雄性 SD大鼠 24只，180～220 g，均購(gòu)自大連醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。CCAO(低劑量載生藥量0.40 g/g基質(zhì)，高劑量載生藥量0.73 g/g基質(zhì));空白基質(zhì)由大連大學(xué)醫(yī)學(xué)院中醫(yī)藥研究所制備;復(fù)方醋酸地塞米松乳膏購(gòu)自珠海安生鳳凰制藥公司;二甲苯購(gòu)自國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑公司。TU-1810紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)(北京普析通用儀器公司)，ZH-YLS-7B足趾容積測(cè)量?jī)x(淮北正華生物儀器設(shè)備公司)。

1.2 方法

1.2.1 CCAO對(duì)二甲苯所致小鼠耳廓腫脹的影響［1］取小鼠40只，雌雄各半，隨機(jī)分為陰性對(duì)照組，CCAO高、低劑量組，復(fù)方醋酸地塞米松軟膏陽(yáng)性對(duì)照組各10只。腹部脫毛后涂抹給藥2次/d，連續(xù)7 d，陰性對(duì)照組給予空白基質(zhì)。末次給藥后1 h，于小鼠右耳耳廓正反面各滴二甲苯0.05 mL，左耳不做任何處理，30 min后頸椎脫位法處死，在左、右耳廓相同部位用9 mm打孔器取下耳片，用分析天平準(zhǔn)確稱取質(zhì)量，計(jì)算腫脹度、腫脹率及抑制率。左右耳質(zhì)量之差為腫脹度，腫脹率(%)=［(陰性對(duì)照組平均腫脹度-給藥組平均腫脹度)/陰性對(duì)照組平均腫脹度］×100%。抑制率(%)=［(陰性對(duì)照組平均腫脹率-給藥組平均腫脹率)/陰性對(duì)照組平均腫脹率］×100%。

1.2.2 CCAO對(duì)小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性的影響［2］取小鼠50只，雌雄各半，隨機(jī)分為空白組，陰性對(duì)照組，CCAO高、低劑量組，復(fù)方醋酸地塞米松軟膏陽(yáng)性對(duì)照組各10只?？瞻捉M不做任何處理，其余4組給藥方法同上。末次給藥1 h后，尾靜脈注射1%伊文斯藍(lán)生理鹽水溶液0.02 mL/g，隨即腹腔注射0.7%醋酸生理鹽水溶液0.2 mL/只，30 min后處死，打開(kāi)腹腔，用6 mL生理鹽水洗滌腹腔，吸出洗滌液10 mL，離心取上清，于590 nm測(cè)定光密度OD值。

1.2.3 CCAO對(duì)蛋清致足腫脹及致炎大鼠胸腺、脾臟質(zhì)量指數(shù)的影響［3］將24只雄性SD大鼠隨機(jī)分為陰性對(duì)照組，CCAO高、低劑量組，復(fù)方醋酸地塞米松軟膏陽(yáng)性對(duì)照組各6只，給藥方法同上。末次給藥后1 h，每只大鼠測(cè)右足足容積作為給藥前值，隨后右足掌底皮內(nèi)注射新鮮蛋清0.05 mL。分別于注射后1、2、3、4 h測(cè)大鼠右足容積，以所測(cè)容積減去給藥前值作為腫脹度。大鼠處死后剪下致炎足，剝皮，剪碎，稱質(zhì)量，于5 mL生理鹽水浸泡1 h，將浸泡液離心，取上清 0.1 mL，加入 0.5 mol/L KOH-甲醇溶液3 mL，50℃水浴異構(gòu)20 min后加甲醇稀釋至20 mL，于波長(zhǎng)278 nm處測(cè)A值，以每克炎性組織相當(dāng)?shù)腁值代表前列腺素E2(PGE2)含量［4］。取胸腺和脾臟稱取質(zhì)量，計(jì)算胸腺和脾臟的質(zhì)量指數(shù)，即大鼠胸腺質(zhì)量/大鼠體質(zhì)量、大鼠脾臟質(zhì)量/大鼠體質(zhì)量。

1.2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件，組間計(jì)量資料比較采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)。P≤0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組耳廓腫脹度及腫脹率比較 見(jiàn)表1。

表1 各組耳廓腫脹度及腫脹率比較

2.2 各組腹腔洗滌液光密度OD值比較 空白組，陰性對(duì)照組，CCAO高、低劑量組，陽(yáng)性對(duì)照組的腹腔洗滌液光密度 OD 值分別為0.473±0.103、0.466±0.110、0.354 ± 0.072、0.382 ± 0.066、0.338 ± 0.085。CCAO高、低劑量組及陽(yáng)性對(duì)照組與陰性對(duì)照組比較P ＜0.05 或 ＜0.01。

2.3 各組足腫脹率、PGE2含量、胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)比較 見(jiàn)表2、3。

3 討論

腹瀉的病理基礎(chǔ)為腸道在感染或非感染因素刺激下黏膜發(fā)炎、水腫、腸分泌及運(yùn)動(dòng)功能亢進(jìn)，出現(xiàn)稀便和便頻等癥狀［4］。CCAO處方來(lái)源于《醫(yī)宗金鑒》龍骨兒茶散，由兒茶、黃柏、五倍子、木香四味中藥組成，具有收斂、斂瘡、抗菌和消炎功能。復(fù)方兒茶水提取液的抗腹瀉機(jī)制與其抗炎作用有關(guān)［6］。CCAO是其提取液的外用制劑，含有兒茶素、表兒茶素、沒(méi)食子酸、鞣質(zhì)和小檗堿等抗腹瀉成分?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，兒茶主要含有兒茶素和表兒茶素，具有明顯的抑菌抗炎作用，可治療多種細(xì)菌感染性疾病;五倍子的主要有效成分為鞣質(zhì)及沒(méi)食子酸，具有抗菌、抗病毒、收斂、清除自由基和抗氧化作用，所含鞣酸作用于炎癥腸道可止瀉;黃柏的主要有效成分為小檗堿，具有很強(qiáng)的抗炎止瀉作用［7］。

表2 各組足腫脹率及PGE2含量比較()

表2 各組足腫脹率及PGE2含量比較()

注:與陰性對(duì)照組比較，*P ＜0.05，＊＊P ＜0.01

組別 n含量陰性對(duì)照組 6 1.265 ±0.108 1.490 ±0.105 1.116 ±0.099 0.8241 h 2 h 3 h 4 h PGE2足腫脹率±0.064 0.663 ±0.086 CCAO 高劑量組 6 0.794 ±0.091* 0.994 ±0.080* 0.818 ±0.629* 0.692 ±0.067 0.501 ±0.062＊＊CCAO 低劑量組 6 0.917 ±0.091* 1.046 ±0.096* 0.908 ±0.077 0.752 ±0.059 0.525 ±0.108*陽(yáng)性對(duì)照組 6 0.885 ±0.115＊＊ 0.934±0.121＊＊ 0.717±0.107＊＊ 0.563±0.095* 0.463±0.097＊＊

表3 各組胸腺和脾臟指數(shù)比較(%，)

表3 各組胸腺和脾臟指數(shù)比較(%，)

注:與陰性對(duì)照組比較，*P ＜0.05，＊＊P ＜0.01

組別 n 胸腺指數(shù) 脾臟指數(shù)陰性對(duì)照組6 0.215 ±0.023 0.203 ±0.017 CCAO 高劑量組 6 0.140 ±0.018* 0.138 ±0.018*CCAO 低劑量組 6 0.154 ±0.021* 0.145 ±0.022*陽(yáng)性對(duì)照組 6 0.133 ±0.016＊＊ 0.109 ±0.015＊＊

炎癥是機(jī)體對(duì)損傷因子產(chǎn)生的一種防御反應(yīng)，其局部反應(yīng)主要包括紅、腫、熱、痛及功能障礙。二甲苯致小鼠耳腫脹、醋酸致小鼠毛細(xì)血管通透性增加、蛋清致足腫脹是用于研究炎癥的常見(jiàn)動(dòng)物模型［8］。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與各模型的陰性組比較，CCAO高低劑量組耳腫脹容積、小鼠腹腔血管通透性、大鼠足腫脹容積和其致炎足中PGE2含量均明顯降低。說(shuō)明CCAO具有抑制二甲苯致耳腫脹、醋酸致毛細(xì)血管通透性增加及蛋清致足腫脹的作用。急性炎癥發(fā)生時(shí)局部組織產(chǎn)生大量PGE2，PGE2是強(qiáng)效擴(kuò)血管物質(zhì)，并協(xié)同其他活性物質(zhì)參與血管滲漏、水腫等炎癥反應(yīng)［9］。本實(shí)驗(yàn)中，大鼠致炎足組織中PGE2含量變化表明，CCAO可能是通過(guò)抑制PGE2的合成和釋放而發(fā)揮抗炎作用，是否同時(shí)對(duì)其他活性物質(zhì)也有抑制作用有待進(jìn)一步研究。此外，胸腺和脾臟均為重要的免疫器官，炎癥反應(yīng)能刺激免疫器官增生。楊宇清等［10］研究表明，兒茶素能下調(diào)胸腺、脾臟指數(shù)，抑制增強(qiáng)的胸腺T淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)。因此推測(cè)，CCAO通過(guò)抗炎作用達(dá)到保護(hù)機(jī)體免疫器官的作用，這很可能是其治療腹瀉的機(jī)理之一。

［1］王小曉，閆艷倉(cāng)，王旭丹，等.復(fù)方牛蒡子含片的抗炎作用及其對(duì)急性咽炎模型大鼠的治療作用［J］.中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2010，16(11):147.

［2］張沂，于春令，王強(qiáng)，等.復(fù)方苦芩軟膏的抗炎鎮(zhèn)痛作用研究［J］.中國(guó)藥學(xué)雜志，2012，47(21):1725.

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［4］趙博，陳超，饒婭琦，等.復(fù)方麥冬丸的鎮(zhèn)痛抗炎作用［J］.基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)，2007，11(25):4188.

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［9］朱依諄.藥理學(xué)［M］.北京:人民衛(wèi)生出版社，2011:311-314.

［10］楊宇清，魏偉.兒茶素對(duì)環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)小鼠遲發(fā)性超敏反應(yīng)的影響［J］.中國(guó)新藥雜志，2007，16(23):1940.