張 靜，張艷貞，陳 文，姜程曦

（1.北京聯(lián)合大學(xué)應(yīng)用文理學(xué)院，北京 100191；2.溫州醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，浙江溫州 325000；3.九華山黃精研究所，安徽九華山 242811）

黃精（Polygonatum sibiricum Delar.ex Redoute）是多年生的百合科草本植物，現(xiàn)代藥理研究表明，多糖（Polysaccharide）具有抗腫瘤、調(diào)節(jié)血糖血脂、調(diào)節(jié)免疫等生理功能。作為黃精主要藥用成分之一的黃精多糖，由黃精根莖（Rhizoma Polygonati）提取的乙醇提取物（Solomonseal Rhizome P.E.）與其他多糖一樣具有抗腫瘤、抗衰老、免疫調(diào)節(jié)作用以及抗氧化損傷等作用，還證明了黃精多糖具有抑菌、抗動脈粥樣硬化等功能[1]。通過黃趙剛等[2]對不同產(chǎn)地黃精多糖的檢測，結(jié)果表明，各地黃精中多糖含量差別明顯，以葡聚糖（Dextran）計，其含量從高到低依次為安徽九華山、貴州、河南周口、云南、河北、湖南、河南濟(jì)源，其中安徽九華山產(chǎn)地的黃精多糖含量最高，為17.79%。本實(shí)驗(yàn)為了解不同產(chǎn)地黃精多糖的抗氧化能力（Antioxidant capacity），通過測定不同產(chǎn)地黃精多糖含量以及抗氧化能力，分析多糖含量與抗氧化能力的關(guān)系。實(shí)驗(yàn)中選用九華山黃精、浙江溫州黃精、浙江大盤山黃精和貴州遵義黃精進(jìn)行多糖含量及抗氧化量效關(guān)系的比較研究。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

多花黃精 產(chǎn)地分別為安徽九華山、浙江溫州、貴州遵義、浙江大盤山，實(shí)驗(yàn)中選用多花黃精的地下莖，清洗后烘干、脫脂，打碎機(jī)打碎后備用。

UV-2000型紫外可見分光光度計 上海尤尼柯儀器有限公司；AE-100型電子分析天平 梅特勒－拖利多儀器公司；KQ-500DE型數(shù)控超聲清洗器 昆山市超聲儀器有限公司；HH SY21-NI型電熱恒溫水浴鍋 北京市長風(fēng)儀器儀表有限公司；FW-100型高速萬能粉碎機(jī) 天津市泰斯特儀器有限公司；DHG-9023A型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱 上海一恒科技有限公司；3K15型高速冷凍離心機(jī) 德國sigma；L530型臺式離心機(jī) 湖南長沙湘儀檢測設(shè)備有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 多糖提取 分別取四產(chǎn)地的黃精粉50g，無水乙醇脫脂后70℃烘干，加入400mL去離子水，100Hz功率超聲提取1h，分離濾液，濾液中加入等體積無水乙醇靜置過夜沉淀多糖。粗多糖產(chǎn)率計算公式見式（1）：

1.2.2 多糖脫色[3]由于產(chǎn)地為浙江溫州、貴州遵義、浙江大盤山的黃精提取的多糖提取物顏色較深，故在提取結(jié)束后，在濾液中加入2%的顆粒狀活性炭，振蕩過夜，離心取清液加入無水乙醇沉淀多糖以達(dá)到脫色的效果。脫色后粗多糖產(chǎn)率計算公式見式（2）。

1.2.3 脫還原糖 在提取得到的多糖沉淀中加入95%的乙醇，振蕩過夜，離心，收集沉淀待測[4]。脫還原糖后粗多糖產(chǎn)率計算公式見式（3）。

1.2.4 含量測定 以葡萄糖為標(biāo)準(zhǔn)，硫酸苯酚法測定多糖含量[5]。

1.2.5 體外抗氧化活性測定

1.2.5.1 鄰苯三酚法檢測黃精多糖對超氧陰離子的影響[6]在試管中加入pH8.2的0.05mol/L Tris－HCl緩沖液2.5mL，加入濃度為10mg/mL樣品（對照用蒸餾水代替）1mL。于25℃保溫10min，加入同樣預(yù)溫的30mmol/L鄰苯三酚溶液0.5mL，迅速搖勻倒入比色皿，在325nm下，每隔30s測一次吸光值。反應(yīng)時間為4min，滯后30s。計算每分鐘吸光值的增值，此即為自氧化速率（ΔOD）。

1.2.5.2 丙二醛法檢測黃精多糖對有羥自由基引起的脂質(zhì)過氧化的影響[7]向試管中依次加入小鼠肝勻漿液100μL，6mmol/mL硫酸亞鐵溶液50μL，濃度為12.5mg/mL黃精多糖提取物50μL，對照管加入測定樣品相同量的蒸餾水，所有測定管加入10mmol/mL雙氧水50μL，于37℃溫浴1h。通過黃精多糖粗提物參與上述體系中的反應(yīng)，抑制體系中MDA生成，使用MDA試劑盒測定MDA含量，以黃精多糖對MDA的生成抑制率（式4），進(jìn)行不同產(chǎn)地黃精抗氧化活性的比較。

2 結(jié)果與討論

2.1 四產(chǎn)地黃精中多糖含量的比較

表1 黃精中多糖含量（n=4）Table 1 The content of Polygonatum polysaccharide（n=4）

由表1可見，九華山黃精的多糖含量顯著高于其他三產(chǎn)地的黃精，且所含雜質(zhì)更少。

從檢測出的黃精多糖含量數(shù)據(jù)看出，實(shí)際檢測的多糖含量與文獻(xiàn)報道的含量接近，尤其是在進(jìn)一步純化后。九華山黃精中多糖的含量高于其他產(chǎn)地的黃精，而且其多糖粗提物中的雜質(zhì)相對更少，提取比例較高。由于本實(shí)驗(yàn)用此方法多次重復(fù)所測出的多糖含量比較穩(wěn)定，提取液可用于抗氧化值的檢測。

2.2 四產(chǎn)地黃精多糖對超氧陰離子的抑制

表2 黃精多糖對鄰苯三酚自氧化速率的影響（n=4）Table 2 The effects on The inhibition rate of pyrogallol self-oxidationcontent of Polygonatum polysaccharide（n=4）

由表2可見，四產(chǎn)地的黃精多糖提取物（10mg/mL）對鄰苯三酚自氧化產(chǎn)生超氧陰離子的速率均有明顯的降低作用（p＜0.01），其中九華山黃精多糖的效果更好，與其他各產(chǎn)地產(chǎn)黃精相比有顯著差異（p＜0.05）。

2.3 四產(chǎn)地黃精多糖對羥自由基的抑制

表3 黃精多糖對羥自由基的抑制率（n=4）Table 3 The inhibition rate of hydroxyl free radical of Polygonatum polysaccharide（n=4）

自由基對機(jī)體的損害作用中以對脂質(zhì)的損害作用最為嚴(yán)重[8]。羥自由基（·OH）是活性氧一種，能導(dǎo)致生物體內(nèi)DNA，蛋白質(zhì)和脂質(zhì)氧化損傷。在體外體系中，通過硫酸亞鐵溶液與過氧化氫溶液生成氧自由基，攻擊小鼠肝組織生物膜中的多不飽和脂肪酸，引發(fā)脂質(zhì)過氧化作用，并因此形成脂質(zhì)過氧化物，如丙二醛（MDA）[9]，使用MDA檢測試劑盒測定，通過測試可以反映出體外系統(tǒng)細(xì)胞水平及亞細(xì)胞水平的脂質(zhì)過氧化的情況。本實(shí)驗(yàn)選用檢測體外系統(tǒng)中MDA生成量的方法進(jìn)行黃精多糖抑制羥自由基能力檢測。

由表3可見，四產(chǎn)地的黃精多糖均可抑制羥自由基對細(xì)胞膜的損傷，其中九華山黃精多糖效果最好，抑制率約為28%，更與溫州產(chǎn)黃精有極顯著性差異。

3 結(jié)論

本文以黃精多糖為實(shí)驗(yàn)對象，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示九華山黃精的多糖含量顯著高于其他三產(chǎn)地的黃精，且所含雜質(zhì)更少。黃精多糖對鄰苯三酚自氧化產(chǎn)生超氧陰離子的速率均有明顯的降低作用，對羥自由基對細(xì)胞膜的損傷有抑制作用，九華山黃精多糖的作用明顯優(yōu)于其余三產(chǎn)地的黃精多糖。

實(shí)驗(yàn)中選用的提取原料是多花黃精的地下莖，是植株貯存營養(yǎng)物質(zhì)的場所，糖類、脂類含量豐富，而且其營養(yǎng)物質(zhì)的貯存及其生物活性與氣候、生長環(huán)境有很大關(guān)系。九華山地區(qū)氣候溫和，雨量充沛，日照充足，自然條件非常適合黃精的生長，生產(chǎn)的黃精質(zhì)量也比較好。本實(shí)驗(yàn)證明九華山產(chǎn)黃精的多糖含量和抗氧化活性都比較出色。

[1]曹明菊，鄭曉燕，陳麗華.黃精多糖的研究進(jìn)展[J].中國食品添加劑實(shí)驗(yàn)研究，2007（4）：51－53.

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[4]余瑞元，袁明秀，陳麗榮，等.生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)原理和方法[M].第二版.北京：北京大學(xué)出版社，2008：197－201.

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[6]韓少華，朱靖博，王妍妍.鄰苯三酚自氧化法測定抗氧化活性的方法研究[J].中國釀造，2009，207（6）：155－157.

[7]Ming Sun，Seymour Zigman.An improved spectrophotometric assay for superoxide dismutase based on epinephrine autoxidation[J].Analytical Biochemistry，1978，90：81－89.

[8]姚林，王廣增，趙伯陽，等.泡利芬對大鼠脂質(zhì)過氧化及抗氧化能力的影響[J].衛(wèi)生毒理學(xué)雜志，1998，12（2）：124－125.

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