梁永紅 趙飛 阿達來提·依迪熱斯

注射用鹽酸格拉斯瓊氯化鈉細菌內(nèi)毒素檢查方法研究

梁永紅 趙飛 阿達來提·依迪熱斯

目的 研究用細菌內(nèi)毒素檢查方法替代鱟試劑法。 方法 對藥廠生產(chǎn)的注射用鹽酸格拉斯瓊氯化鈉采用試劑檢查細菌內(nèi)毒素。結(jié)果 細菌內(nèi)毒素檢查的方法比鱟試劑動物檢查的方法更安全、靈敏。 結(jié)論 用該方法使結(jié)果更安全、準(zhǔn)確。

格拉斯瓊氯化鈉;細菌內(nèi)毒素;動物實驗

1 一般資料

注射用鹽酸格拉司瓊氯化鈉, (新疆制藥廠生產(chǎn), 批號：06120621、06120631、06121641), (熱源檢查均符合規(guī)定), 規(guī)格：50ml/瓶 ：注射用鹽酸格拉司瓊(以 C18H24N4O計)3mg與氯化鈉。鱟試劑(湛江安度斯生物有限公司, 批號：06120521、06120621、06120631, 規(guī)格：0.1ml/支, 靈敏度：0.25EU/ml。)細菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品：由中國藥品生物制品檢定所,批號：2006-10, 效價：160EU/A, 細菌內(nèi)毒素檢查用水(BET水):湛江博康海洋生物有限公司生產(chǎn), 批號：0603182, 規(guī)格50ml/瓶。

2 方法與結(jié)果

2.1 鱟試劑靈敏度復(fù)核, 按《中國藥典》［1］2005年版細菌內(nèi)毒素檢查方法的要求：結(jié)果,鱟試劑的靈敏度復(fù)核規(guī)定均在(0.5~2.0)λ之間符合規(guī)定。表1 鱟試劑靈敏度復(fù)核試驗結(jié)果。由表1 可見3批鱟試劑均在(0.5~2.0)λ之間, 由此鱟試劑靈敏度均符合規(guī)定, 可見于細菌內(nèi)毒素檢查, 標(biāo)示靈敏度λ為該批鱟試劑的靈敏度。

2.2 供試品內(nèi)毒素限值(L)的確定, 《中國藥典》［1］2005版二部附錄采用細菌內(nèi)毒素檢查方法, 根據(jù)公式 L=K/M 確定供試品的內(nèi)毒素限值。式中L為供試品的細菌內(nèi)毒素的限值,以EU/ml考慮到合并用藥因素, 供試品細菌內(nèi)毒素限值 L為0.25EU/ml。

2.3 供試品最大有效稀釋倍數(shù)的確定, 采用公式 MVD=CL/ λ確定供試品最大不干擾濃度。根據(jù)公式MVD=CL/λ, 選用市售鱟試劑靈敏度標(biāo)示值為0.25 EU/ml。來確定供試品注射用格拉斯瓊氯化鈉的最大不干擾濃度MVD=CL/λ=2 。

2.4 干擾預(yù)試驗, 細菌內(nèi)毒素檢查用水對供試品2倍的稀釋, 取供試品(原液)及1：2稀釋的供試品溶液, 將細菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品逐一稀釋, 稀釋的倍數(shù)是1倍、2倍、4倍、8倍、把結(jié)果設(shè)立陰性和陽性的對照, 并且做陰、陽性對照(各2管), 表明原液對鱟試劑有干擾, 供試品稀釋后對鱟試劑試驗無任何干擾。見表2。

2.5 供試品干擾試驗,用兩個廠家的靈敏度為0.25EU/mg,制成細菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品分別含內(nèi)毒素(2.0、 1.0、 0.5、0.25) λ濃度的溶液。分別平行做4管, 并且做細菌內(nèi)毒素檢查用水和供試品的溶液為(1：2)分別做2管比較, 并計算以樣品稀釋液配制的細菌內(nèi)毒素溶液反應(yīng)到終點濃度幾何均值(Et)觀察結(jié)果, 表明ES在(0.5~2.0)λ之間, Et在(0.5 s~2.0) Es之間, 表明該注射液的2倍稀釋液對鱟試劑試驗沒有產(chǎn)生干擾作用。供試品的細菌內(nèi)毒素取三批注射用鹽酸格拉斯瓊依次加入細菌內(nèi)毒素檢查用水制成每1ml中含格拉斯瓊30μg的溶液, 按《中國藥典》2005年版檢查法進檢查, 每1ml中含內(nèi)毒素的量應(yīng)(>0.25EU)。見表3。表3供試品干擾試驗結(jié)果。

表1 鱟試劑靈敏度復(fù)核實驗結(jié)果

表2 供實品干擾實驗結(jié)果

表3 供試品干擾實驗

3 討論

本文主要通過干擾試驗預(yù)試驗, 取3批注射用鹽酸格拉斯瓊氯化鈉溶液2倍稀釋液對細菌內(nèi)毒素檢查無干擾。用細菌內(nèi)毒素檢查法代替熱原檢查法是合理的, 表明用細菌內(nèi)毒素檢查方法控制內(nèi)毒素的方法是可行的。

［1］ 國家要點委員.中華人民共和國藥典(二部).2005年版、北京:化學(xué)工業(yè)出版社, 2005.

830011 新疆醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院藥劑科 (梁永紅趙飛)；新疆喀什莎車縣人民醫(yī)院院部(阿達來提·依迪熱斯)

阿達來提?依迪熱斯