劉起勝 劉懷 彭微

·實驗研究·

Plk1、Ki67和Survivin在肝癌中的表達及相關(guān)性研究

劉起勝 劉懷 彭微

目的 探討Plk1、Ki67和Survivin在原發(fā)性肝細胞癌(HCC)組織中的表達及其臨床意義。 方法 采用免疫組織化學SP法檢測60例肝癌組織和20例正常肝組織、肝硬化組織、癌旁組織中Plk1、Ki67和Survivin的表達水平。 結(jié)果 60例肝癌組織中Plk1、Ki67和Survivin的陽性表達率分別為83.3% (50/60)、76.7%(46/60)、78.3%(47/60), 20例正常肝組織、癌旁組織、肝硬化組織中均未見表達。Plk1、Ki67、Survivin 在 HCC 中的表達均與包膜侵犯、癌栓形成及腫瘤轉(zhuǎn)移有關(guān)(P＜0.05), 而與年齡、性別無關(guān)。Plk1與Ki67、Survivin與Ki67、Plk1與Survivin的表達相關(guān)(P＜0.05)。 結(jié)論 plk1、Ki67、Survivin三者聯(lián)合檢測可為肝癌的診斷和治療提供新的依據(jù)。

肝細胞癌； plk1；Ki67；Survivin；免疫組織化學

肝細胞癌組織中Plk1、Ki-67和Survivin的表達及相關(guān)性的研究, Polo-Like 激酶 1( Plk1) 是一種參與調(diào)控有絲分裂并與細胞增殖密切相關(guān)的重要因子。Plk1 在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著重要作用。細胞核增殖抗原( Ki67) 、凋亡抑制蛋白( Survivin) 的異常表達也與多種惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān), 本研究采用免疫組織化學SP法檢測Plk1與Ki67、Survivin在原發(fā)性肝細胞癌(HCC)和正常肝組織、癌旁組織、肝硬化組織中的表達,探討Plk1與Ki67、Survivin的表達與病理參數(shù)之間的關(guān)系及三者表達之間的相關(guān)性, 并為肝癌的靶向治療、預后判斷提供實驗依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料：收集湖南中醫(yī)藥高等?？茖W校附屬醫(yī)院2001年1月至今手術(shù)切除經(jīng)病理證實的肝癌組織60例, 其中男37例, 女23例, 年齡23~70歲, 平均(46.43±11.78)歲,所有患者術(shù)前均未行化療、放療或免疫治療。全部病例均有完整的臨床病理資料。

1.2 試劑與方法

常規(guī)S-P免疫組化試劑盒、二硝基聯(lián)苯胺(DAB)顯色液及鼠抗人Plk1、Ki67和 Survivin抗原等。每例均行 SP法染色, 取已知陽性肝癌標本作陽性對照, 以0.01 mol/L PBS緩沖液代替一抗作陰性對照。

1.3 結(jié)果判斷

Plk1染色以在細胞質(zhì)著棕色顆粒為陽性。本實驗采用傳統(tǒng)的人工計數(shù)方法。免疫組織化學結(jié)果根據(jù)染色細胞陽性數(shù)和染色強度乘積評分。陽性細胞數(shù)：連續(xù)5個高倍視野, 細胞陰性為0.l%~25%為1, 26%~50%為2, 50%~75%為3,≥75%為4；染色強度：無色為0, 淡黃為l, 棕黃為2, 棕褐色為3。細胞陽性數(shù)和染色強度兩者乘積≥3為(+), 兩者乘積≥6為(++)。所有乘積≥3的結(jié)果視為陽性。

Survivin 和 Ki67 以細胞漿和細胞核內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性。參照 Parenti 等［1］的標準, 每張切片均隨機觀察5 個具有代表性的高倍視野, 著色細胞占計數(shù)細胞百分率<5 %為(-),5 % ~25 %為(+), 25 % ~50 %為(++), >50 %為(+++)。

1.4 統(tǒng)計學方法

采用SPSSl5.0 統(tǒng)計軟件包進行分析, 采用χ2檢驗、spearman等級相關(guān)分析, (P＜0.05)為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 Plk1、Ki67和Survivin的表達特點及其與HCC臨床病理參數(shù)的關(guān)系見表1。

2.2 Plk1、Ki67和Survivin表達的相關(guān)性 相關(guān)分析顯示：

HCC 組織中 Ki67 與 Survivin 表達呈正相關(guān)( r =0.566, P <0.05)；HCC組織中Ki67與Plk1表達呈正相關(guān)(r=0.570, P＜0.05)；HCC組織中, Plk1與Survivin表達呈正相關(guān)(r=0.631, P＜0.05)。

3 討論

Plk1是一種高度保守的絲氨酸/蘇氨酸激酶。Plk1在細胞有絲分裂的不同時期都起到十分重要的作用。 在分裂活躍的組織器官或腫瘤細胞中Plk1 活性較高［2,3］。研究結(jié)果顯示, 腫瘤組Plk1陽性率明顯高于正常肝組織組、癌旁組織組和肝硬化組織組, Plk1的陽性表達與癌栓形成、包膜侵犯、腫瘤轉(zhuǎn)移等不良預后因素呈明顯相關(guān)。這三個病理參數(shù)代表肝癌侵襲和轉(zhuǎn)移程度和時效, 研究結(jié)果說明Plk1陽性表達可能與肝癌的侵襲和轉(zhuǎn)移相關(guān), 所以Plk1與腫瘤的密切關(guān)系可能有助于Plk1成為新的腫瘤生物學行為判斷指標。 蘭斌等［4］認為Plk1 的表達狀態(tài)與患者的預后有關(guān), 高表達者預后差。這也許能為我們提供一個判斷患者預后的新的分子標志物。

Ki67是反映細胞增殖的核抗原, 是目前已知的增殖抗原中最具增殖能力代表性、應(yīng)用最廣泛的增殖細胞標記之一。Ki67的檢測已被廣泛用于反映腫瘤細胞增殖速度和預測腫瘤預后［5-6］。本研究發(fā)現(xiàn)Ki67不僅在HCC組織中高表達, 而且其陽性表達與包膜侵犯、癌栓形成及腫瘤轉(zhuǎn)移均呈正相關(guān)(P＜0.05)。提示Ki67是肝癌診斷與判定預后的一項重要指標。

Survivin 蛋白是迄今發(fā)現(xiàn)最強的凋亡抑制因子, Survivin蛋白的表達與多種腫瘤的生物學( 或) 疾病分期有關(guān)［7］, 本研究中腫瘤組 Survivin 陽性率為78.33%, 明顯高于正常肝組織、癌旁組織和肝硬化組織組, 本研究顯示, Survivin 在HCC中的表達與癌栓形成及腫瘤轉(zhuǎn)移、包膜侵犯相關(guān)。提示survivin可能參與 HCC 的發(fā)生、發(fā)展, 可使肝癌生物學行為惡變, 從而影響肝癌患者的預后。

表1 Ki67、Plk1、Survivin表達水平與HCC病理參數(shù)的關(guān)系

本實驗肝癌Plk1、Ki67和Survivin的陽性表達較高,三者均與包膜侵犯、癌栓形成及腫瘤轉(zhuǎn)移有關(guān), 而且 Plk1、Ki67和Survivin三者之間存在相關(guān)性, 因此作者認為Plk1、Ki67和Survivin三者作為均與細胞增殖相關(guān)的蛋白, 在肝癌細胞增殖過程中均發(fā)揮了重要作用, 在肝癌的治療中有望采取從Plk1、Ki67和Survivin 三個治療靶點聯(lián)合治療的方法。

［1］ Parenti A, Leo G, Porzionato A, et al. Expression of survivin, p53, and caspase3 in Barrett's esophagus carcinogenesis. Hum Pathol,2009,175(6):2625-2636.

［2］ Strebhardt K,Ullrich A.Targeting Polo-like kinase1 for cancer therapy.Nat Rev Cancer,2006,6(4):321-330.

［3］ Kishi K,van Vugt MA,Okamoto K, et al.Functional dynamica of Polo-like kinase1 at the centrosome. Mol Cell Biol,2009,29(11): 3134-3150.

［4］ 蘭斌, 劉炳亞, 陳雪華, 等.保羅樣激酶1 表達對胃癌的生物學行為及預后判定的意義.中華胃腸外科雜志, 2007,10(1): 70-72.

［5］ 張景麗,張紅英,步 宏,等. 乳腺癌Ki267及PCNA表達的比較研究. 臨床與實驗病理學雜志, 2003, 19(1):70- 72.

［6］ Potemski P, Pluciennik E, BednarekAK, et al. Ki-67 expression in operable breast cancer: a comparative study of immunostaining and a real-time RT-PCR assay. Pathol Res Pract, 2006, 202(7):491-495.

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湖南省教育廳科學研究項目(項目編號：11C0974)

412012 湖南中醫(yī)藥高等?？茖W校基礎(chǔ)醫(yī)學部病理組