來永廣 王玉霞

血清乙型肝炎病毒載量的研究

來永廣 王玉霞

目的 研究血清病毒載量與乙型肝炎病毒基因型的關(guān)系。方法 選擇在2010年3月至2012年是本院收治的100例乙型肝炎感染患者作為研究對象, 分別對乙型肝炎感染患者病毒基因型和血清病毒載量進行有效的檢測和記錄, 并對檢測結(jié)果進行有效的分析。結(jié)果 通過對100例乙型肝炎感染患者基因型進行檢測, 其中B型有36例, C型有56例, BC型有8例。C型病毒基因患者HBV-DNA為(7.01±1.16)log值, HBeAg為66.7%, 均比B型病毒基因患者高, 而C型病毒基因患者 HBeAb陽性率為33.3% , 比B型病毒基因患者低。結(jié)論 乙型肝炎患者病毒基因型多為C型, 乙型肝炎病毒C型基因患者血清病毒載量明顯高于乙型肝炎病毒B型基因患者, 臨床上依據(jù)血清病毒載量, 明確乙型肝炎病毒基因型。

血清；乙型肝炎病毒；載量

臨床研究表明, 乙型肝炎病毒可分為A至H8個不同基因型。不同基因型具有不同的在血清病毒載量, 對預(yù)后效果也有所不同。因此, 醫(yī)務(wù)人員在對乙型肝炎病毒感染患者進行檢診療時, 可通過血清病毒載量, 明確病毒基因型, 為乙型肝炎臨床治療提供重要依據(jù)。本文就山東省莒縣人民醫(yī)院肝病科于收治的100例乙型肝炎感染患者作為研究對象, 對患者基因型和血清病毒載量進行有效的檢測和分析, 具體情況如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇在2010年3月至2012年本院收治的100例乙型肝炎感染患者作為研究對象, 其中男54例, 女47例, 患者年齡在16~68歲之間, 平均32. 7歲；其中慢性乙型肝炎有45例,原發(fā)性肝癌有18例, 乙型肝炎并發(fā)肝硬化有37例。對所有患者進行組織活檢、病理檢查和臨床診斷后, 均確診為乙型肝炎感染患者, 并將重疊感染患者排除, 且所有患者在檢測前, 未采取任何抗病毒預(yù)防和治療措施。

1.2 方法

1.2.1 檢測試劑 在乙型肝炎病毒基因型和血清病毒載量實驗中, 所需的檢測試劑主要包括乙型肝炎病毒熒光試劑盒、乙肝三系試劑、乙型肝炎病毒基因芯片、引物及探針等。

1.2.2 檢測方法 ①乙型肝炎病毒血清標志物的檢測。血清病毒載量主要通過熒光定量PCR進行檢測, 而乙肝三系則主要通過具有化學發(fā)光作用的為微粒子型免疫儀進行檢測。②乙型肝炎病毒基因型的檢測。提取乙肝病毒基因與PCR檢測條件設(shè)置。檢測人員必須按照具體的操作要求, 將乙肝病毒基因有效的提出。PCR檢測條件：使乙型肝炎病毒模板及其PCR 檢測液在PCR檢測擴增儀中進行有序循環(huán), 具體如下, 在溫度為94 ℃條件進行5min預(yù)變性后, 按照溫度94 ℃條件預(yù)變性30s——溫度50℃條件預(yù)變性30s——溫度72 ℃ 條件預(yù)變性30s的順序進行循環(huán), 共需循環(huán)35次, 最后再將其放入溫度為72℃條件下進行延伸, 時間為5min。基因芯片雜交及顯色。當把PCR反應(yīng)檢測形成產(chǎn)物放置到溫度為98 ℃進行5min變性后, 快速將其放置到冰浴中, 時間為5min, 然后取出2L變性物, 把適量雜交液加入變性物后混勻, 并取適量滴至基因芯片中的雜交艙內(nèi), 然后將基因芯片快速放置到溫度為39 ℃的保溫箱中, 時間為30min, 即可完成基因芯片雜交試驗［1］。將基因芯片取出, 然后對其進行有效的清洗后, 將剩余液體清除, 然后再向芯片雜交艙添加適量的現(xiàn)實液體, 放置到溫度為39 ℃的保溫箱中, 時間為40min,最后將芯片雜交艙清除, 同時用蒸餾水對芯片顯色區(qū)域進行有效的清洗, 放置到溫度為39 ℃ 條件下進行烘干, 最后利用芯片檢測以及相關(guān)軟件, 讀取芯片檢測數(shù)據(jù)。乙型肝炎病毒脫氧核糖核酸序列對 PCR擴增后的產(chǎn)物和p GEM-T載體之間的連接；與大腸埃希菌間的轉(zhuǎn)化；與菌落間的篩選等進行有效的鑒定, 并對陽性克隆進行有效檢查和分析, 最后對乙型肝炎病毒基因型和基因型芯片測試結(jié)果進行有效的對比。

2 結(jié)果

2.1 乙型肝炎病毒基因型

通過對100例乙型肝炎感染患者基因型進行檢測, 其中B型有35例, C型有57例, BC型有8例。乙型肝炎病毒基因型檢測結(jié)果與其基因芯片測試結(jié)果相符合。

2.2 乙型肝炎病毒基因型與血清病毒載量關(guān)系

由表1可知, C型病毒基因患者HBV-DNA為(7.01±1.16) log值, HBeAg為66.7%, 均比B型病毒基因患者高, 而C型病毒基因患者 HBeAb陽性率為33.3% , 比B型病毒基因患者低。

表1 乙型肝炎病毒基因型與血清病毒載量關(guān)系分析

3 討論

乙型肝炎病毒基因型能夠?qū)σ倚透窝撞《靖腥咀儺愡M行有效的反應(yīng), 是乙型肝炎病毒感染患者預(yù)防和質(zhì)量的重要影響因素, 并形成一定的區(qū)域性特點。通過對乙型肝炎病毒基因型進行研究后, 發(fā)現(xiàn)大多數(shù)乙型肝炎病毒感染患者基因型主要以C 型及B 型較多。本文通過對本院收治的100例乙型肝炎病毒感染患者基因型進行檢測, 發(fā)現(xiàn)B型有35例, C型有57例, BC型有8例。充分說明了乙型肝炎病毒基因型檢測結(jié)果與其基因芯片測試結(jié)果相符合［2］。

不同乙型肝炎病毒基因序列存在的差異性, 導(dǎo)致血清病毒蛋白表達受到一定的影響, 同時不同的乙型肝炎病毒基因, 其病毒復(fù)制情況、血清病毒載量及發(fā)病機制也將有所不同, 從而導(dǎo)致乙型肝炎病毒感染患者病癥表現(xiàn)、預(yù)后效果均有所不同?，F(xiàn)階段很多醫(yī)學研究者認為, 乙型肝炎病毒C基因型容易對患者肝臟造成嚴重損害, 預(yù)后效果較差。有關(guān)研究表明, 乙型肝炎病毒B基因型抗原體系中的血清更換幾率較高, 發(fā)生時間較早, 病毒復(fù)制時間相對較短, 而C基因型則相反, 因此容易對患者肝臟造成嚴重損害［3］。本研究結(jié)果顯示, C型病毒基因患者HBV脫氧核糖核酸為(7.01±1.16)log值, 乙型肝炎E抗原陽性率為66.7%, 均比B型病毒基因患者高, 而C型病毒基因患者HBVE抗體陽性率為33.3% , 比B型病毒基因患者低。證明了乙型肝炎病毒C基因型患者存在較高的血清病毒載量, 并對病毒預(yù)后結(jié)果造成嚴重影響, 必須引起醫(yī)務(wù)人員的高度重視。

總之, 大多數(shù)的乙型肝炎患者病毒基因型均為C型, 且乙型肝炎病毒C型基因患者血清病毒載量明顯高于乙型肝炎病毒B型基因患者, 并對病毒預(yù)后效果具有一定的影響, 臨床上依據(jù)乙型肝炎病毒血清病毒載量, 明確其基因型, 做好相關(guān)預(yù)后, 以保證病毒預(yù)后效果。

［1］ 陳成進.乙型肝炎病毒檢測技術(shù)的研究進展.職業(yè)與健康, 2011, 9(8):89-90.

［2］ 汪文明,簡芳,楊夕,等.乙型肝炎患者3種血清標志物模式HBV DNA含量比較.檢驗醫(yī)學與臨床, 2010,12(19):76-77.

［3］ 韓立兵,龐曉鷹,于立新等.乙型肝炎病毒前S1抗原與病毒復(fù)制水平的相關(guān)性.實用臨床醫(yī)藥雜志, 2010,3(23):54-55.

276500 山東省莒縣人民醫(yī)院肝病科(來永廣) ；山東省莒縣浮來山衛(wèi)生院（王玉霞）