楊赟平，楊雙雙，張莉萍

（重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院檢驗(yàn)科 400016）

人乳頭瘤狀病毒（human papillomavirus，HPV）是一種具有高度宿主特異性的嗜上皮病毒，人類是其惟一宿主。研究表明，HPV感染可能誘導(dǎo)多種腫瘤的發(fā)生，例如結(jié)膜鱗狀細(xì)胞癌、頭頸部腫瘤、食管癌、乳腺癌、子宮頸癌、前列腺癌、陰莖癌等［1］；宮頸癌是常見(jiàn)的婦科惡性腫瘤之一，發(fā)病率僅次于乳腺癌，居女性惡性腫瘤的第二位。在全世界范圍內(nèi)，宮頸癌的發(fā)病率和病死率均較高，我國(guó)每年宮頸癌的新發(fā)病例超過(guò)13萬(wàn)，占全球的1／4～1／3，給家庭和社會(huì)造成巨大的經(jīng)濟(jì)和社會(huì)負(fù)擔(dān)［2］。HPV疫苗的問(wèn)世使宮頸癌的預(yù)防成為可能。目前在發(fā)達(dá)國(guó)家HPV疫苗已經(jīng)應(yīng)用于臨床，但研究表明HPV基因型的分布具有明顯的年齡和地區(qū)分布特異性［3］，因此，臨床使用HPV疫苗應(yīng)考慮此異質(zhì)性，目前在中國(guó)基于年齡分布的HPV感染研究報(bào)道較少，因此，本研究基于高危型HPV感染的現(xiàn)狀以及年齡進(jìn)行分層分析，旨在為HPV疫苗在重慶地區(qū)人群中的使用提供流行病學(xué)參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料 采集2008年4月至2012年1月本院就診的10 856例女性患者，年齡14～82歲，回顧性收集患者的相關(guān)臨床信息。根據(jù)HPV檢測(cè)結(jié)果將10 856例女性患者分為HPV陽(yáng)性組和HPV陰性組。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本采集及保存方法 用無(wú)菌棉拭子將宮頸口過(guò)多的分泌物輕輕擦拭干凈，更換宮頸刷，將其置于宮頸口，輕輕順時(shí)針旋轉(zhuǎn)5周，所有標(biāo)本置已加有專用細(xì)胞保存液的取樣管內(nèi)，擰緊瓶蓋，立即送檢。

1.2.2 試劑及儀器 購(gòu)于廣東潮州凱普生物化學(xué)有限公司的HPV分型檢測(cè)試劑盒，thermal cycler S1000PCR擴(kuò)增儀以及Hybrimax醫(yī)用核酸分子快速雜交儀。

1.2.3 DNA提取 取含有宮頸細(xì)胞的細(xì)胞保存液0.5mL，按照凱普生物化學(xué)有限公司的細(xì)胞裂解液說(shuō)明書(shū)步驟提取DNA。

1.2.4 PCR擴(kuò)增 按照說(shuō)明書(shū)配置PCR mix，加入1μL DNA模板，瞬時(shí)離心5s，PCR反應(yīng)條件為95℃，9min；94℃，20s；55℃，30s；72℃，30s；循環(huán)40次；72℃，5min。

1.2.5 雜交及結(jié)果判定 按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作，檢測(cè)21種HPV基因型，其中高危型（16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68型），低危型（6、11、4、43、44型）和其他型（53、66、Cp8304型），并在1h內(nèi)分析結(jié)果。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SAS9.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料采用表示，用t檢驗(yàn)分析兩組之間的差異，計(jì)數(shù)資料采用率表示，并采用χ2檢驗(yàn)分析不同年齡組型感染率的差異，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 HPV檢測(cè)結(jié)果 在10 856例婦科門診樣本中，HPV陽(yáng)性者4 050例，檢出率為37.3%，檢出高危亞型2 956例，檢出率為27.2%。其中，單一感染者2 472例，多重感染者484例，其中以二重感染最為常見(jiàn)。而在414例二重感染標(biāo)本中以16型合并其他高危感染（52、58、33、18、31、39、56型）最為常見(jiàn)，其中16型合并52、58型感染最常見(jiàn)。

2.2 高危型HPV基因亞型分布 本院門診就診婦女單一高危型HPV感染率為22.8%。2 472例女性HPV單一亞型感染標(biāo)本中，16型911例，18型160例，31型73例，33型203例，35型12例，39型64例，45型14例，51型15例，52型441例，56型41例，58型413例，59型23例，68型102例。16型（36.8%）最為常見(jiàn)，其次為52型（17.8%），58型（16.7%）。

2.3 HPV感染的年齡分層分布情況 HPV陽(yáng)性組2 956例和HPV陰性組7 900例；HPV陽(yáng)性組平均（35.99±8.63）歲，HPV陰性組平均（35.81±8.59）歲。結(jié)果顯示 HPV陽(yáng)性組和陰性組年齡分布差異無(wú)統(tǒng)計(jì)意義（t＝3.59，P＞0.05），不同年齡段 HPV感染率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2＝21.57，P＜0.01）。10 856患者中90例年齡信息不全，其中含有HPV高危型陽(yáng)性者14例，因此將10 766女性患者按照年齡不同分為4個(gè)年齡段，分別為14～＜30歲，30～＜40歲，40～＜50歲，≥50歲。統(tǒng)計(jì)不同年齡段女性患者的高危型HPV感染率，結(jié)果顯示14～＜30歲感染率為24.3%，30～＜40歲為28.0%，40～＜50歲為28.4%，≥50歲感染率為31.9%，隨著年齡增長(zhǎng)，HPV感染率也逐漸增加，≥50歲患者感染率最高，見(jiàn)表1。

表1 不同年齡段女性患者高危型HPV感染率

3 討 論

HPV感染是女性宮頸癌以及癌前病變的主要病因，目前已發(fā)現(xiàn)100多種HPV基因型，其中至少有40多種基因型主要侵襲生殖道［4］。根據(jù)其導(dǎo)致的病變程度，可將其分為高危型、低危型以及其他型［5］。隨機(jī)對(duì)照研究結(jié)果顯示HPV的檢測(cè)能夠比細(xì)胞學(xué)檢測(cè)更早期地發(fā)現(xiàn)持續(xù)性HPV感染相關(guān)瘤變［6］。由于高危型HPV與腫瘤發(fā)生有直接關(guān)系，因此，高危型HPV的檢測(cè)則可能反映早期瘤變，在西方國(guó)家已成為婦女普查項(xiàng)目之一［7］。2006年，HPV預(yù)防性疫苗，獲美國(guó)FDA批準(zhǔn)上市，其的問(wèn)世使得宮頸癌的預(yù)防和攻克成為可能。目前HPV疫苗主要針對(duì)的是高危型16型和18型、低危型6型和11型［8］。但由于HPV基因型的分布具有明顯的地區(qū)差異，因此研究各個(gè)地區(qū)HPV高危型的分布有利于有針對(duì)性地進(jìn)行HPV疫苗研發(fā)和臨床應(yīng)用［9］。本研究結(jié)果顯示本院就診婦女HPV檢出率為37.3%，高于國(guó)外報(bào)道的20%～25%［10］，分析其原因可能是由于本研究的樣本來(lái)自門診就診婦女，可能存在選擇偏倚。高危型HPV分型分析顯示重慶婦女的HPV易感基因型以16型、52型、58型為主，這與國(guó)內(nèi)其他報(bào)道相一致［11］，而作為西方國(guó)家HPV感染主要基因型的18型則相對(duì)少見(jiàn)，此外，HPV感染主要以單一型感染為主，在多重感染中則以16型合并52型、58型感染最為多見(jiàn)［12］，提示針對(duì)16型＋58＋52型三價(jià)HPV疫苗的研制將可能覆蓋大多數(shù)易感人群。進(jìn)一步的HPV感染與年齡的相關(guān)性分析結(jié)果顯示；HPV感染患者年齡差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，HPV感染的年齡分布結(jié)果顯示：隨著年齡增長(zhǎng)，HPV感染率也逐漸增加，≥50歲患者感染率最高。這與國(guó)外報(bào)道“雙峰型”感染率一致［13］，提示不同地區(qū)HPV感染率的年齡分布特點(diǎn)也各有差異，這也為HPV疫苗的臨床使用提出了新的挑戰(zhàn)，各地區(qū)應(yīng)因地制宜的選擇最佳接種年齡。對(duì)多重感染的年齡相關(guān)性分析結(jié)果顯示，不同年齡段多重感染呈倒“U”字，與Jin等［14］報(bào)道不一致，可能與研究對(duì)象異質(zhì)性有關(guān)。但由于HPV疫苗對(duì)已感染的HPV的患者無(wú)明顯治療作用，推測(cè)早期接種可能意義更大，本研究顯示于本院就診的25歲以下的患者僅占12.15%。綜上所述，本研究結(jié)果為重慶地區(qū)HPV疫苗臨床使用前基因型的選擇以及年齡的考慮等提供了流行病學(xué)資料。

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