曲 墨,柳 藝,隋殿軍

(長春中醫(yī)藥大學,長春130117)

肺癌發(fā)生于支氣管黏膜上皮,亦稱支氣管癌。目前,治療肺癌的主要方法有手術治療、放射治療、化學治療、介入治療、生物治療、冷凍治療、電化學治療、熱療及中醫(yī)藥治療等[1]。中醫(yī)藥治療肺癌有病灶穩(wěn)定率高、生存期長、抗復發(fā)轉(zhuǎn)移等優(yōu)勢。白蓮參膠囊由白花蛇舌草、半枝蓮、參靈菌質(zhì)3味藥組成的,具有清熱解毒,固本益氣的功效[2-3]。本品組方獨特,配伍新穎,治則明確[4]。處方以清熱解毒藥為君,以理氣化瘀藥為臣,從根本上達到治療非小細胞肺癌的目的[5]。筆者以高效液相色譜法建立白蓮參膠囊的質(zhì)量控制方法,控制產(chǎn)品質(zhì)量,保證臨床療效。

1 設備與材料

1.1 實驗設備 安捷倫1200液相色譜儀,安捷倫ZORBAX SB 色譜柱(4.6 mm×250 mm,5 μ m),TP-150超聲波清洗機,BP211D電子分析天平。

1.2 實驗材料 野黃芩苷由中國藥品生物制品檢定所提供,甲醇為色譜純(美國Fisher公司),水為超純水,其他試劑均為分析純。

2 處方與制備

白蓮參膠囊由白花蛇舌草、半枝蓮和參靈菌質(zhì)組成。處方中只有半枝蓮被《中國藥典》2010年版一部收載,所以選擇半枝蓮中野黃芩苷的含量為質(zhì)量控制的指標。白花蛇舌草加10倍量水煎煮2次,1 h/次,合并煎液,濾過,濾液濃縮至相對質(zhì)量濃度1.08～1.10(40～45℃)的清膏,以8 000 r/min離心20 min后,上清液濃縮,干燥,粉碎成細粉;半枝蓮加10倍量水煎煮3次,1.5 h/次,合并煎液,濾過,濾液用陶瓷膜(50 nm)過濾,滲透液濃縮,干燥,粉碎成細粉;參靈菌質(zhì)粉成細粉與上述粉末混勻,制粒,裝入膠囊,制成1 000粒 ,即得 。

2.1 系統(tǒng)適應性試驗 十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;甲醇-0.2%磷酸溶液(33∶67)為流動相;檢測波長為335 nm;柱溫為30℃;流速為 1.0 mL/min;進樣量為10 μ L;理論板數(shù)按野黃芩苷峰計算應不低于1 500。

2.2 藥液制備

2.2.1 對照品溶液的制備 取野黃芩苷對照品適量,精密稱定,加甲醇制成每1 mL 含40 μ g的溶液,即得。

2.2.2 供試品溶液的制備 取本品內(nèi)容物3 g,研細,精密稱定,加甲醇90 mL,置于100 mL量瓶中,超聲處理(功率 250 W,頻率25 kHz)30 min,放冷,加甲醇稀釋至刻度,搖勻,精密量取25 mL,蒸干,殘渣用20%甲醇溶解,并轉(zhuǎn)移至10 mL量瓶中,稀釋至刻度,搖勻,濾過,取續(xù)濾液,即得。

2.2.3 陰性對照品溶液的制備 將缺少半枝蓮的陰性樣品制成陰性對照品溶液。結果顯示,在野黃芩苷相同保留時間處無任何色譜峰,表明陰性對照無干擾。

2.3 方法學考察

2.3.1 標準曲線的制備 以野黃芩苷為對照品,以野黃芩苷進樣量為橫坐標,峰面積值為縱坐標,繪制標準曲線,Y=224.84X+21.61,r=0.999 9,結果表明,野黃芩苷進樣量在 0.0808～ 0.404 μ g范圍內(nèi),進樣量與峰面積呈良好的線性關系。

2.3.2 精密度考察 取野黃芩苷對照品溶液,重復進樣6次,并計算峰面積RSD值,RSD=0.153 9%(n=6),符合要求。

2.3.3 穩(wěn)定性的考察 取野黃芩苷對照品溶液和白蓮參膠囊供試品溶液,依法測定,結果表明,2者在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.3.4 重現(xiàn)性的考察 取樣品6份,精密稱定,制成供試品溶液,依法測定,計算野黃芩苷含量,RSD=0.38%(n=6),符合要求。

2.3.5 加樣回收率試驗 取樣品6份,精密稱定,分別精密加入等量的野黃芩苷對照品,依法測定,計算回收率,結果表明,平均回收率為97.64%,RSD=0.79%(n=6),符合要求。

2.4 樣品含量測定 測定3批樣品中野黃芩苷的含量,平均含量為0.194 3 mg/g,將平均含量下浮20%作為制劑的含量測定限度,即每粒含半枝蓮以野黃芩苷(C21H18O12)計 ,不得少于 78 μ g 。

3 結語

白蓮參膠囊為中藥六類新藥,現(xiàn)代藥理學研究表明,處方中白花蛇舌草和參靈菌質(zhì)具有抗腫瘤和增強機體免疫力的作用,半枝蓮的水提取物有明顯的抗肺癌活性,本產(chǎn)品用于肺癌的輔助治療,本試驗對其質(zhì)量標準進行了研究。實驗用高效液相色譜法對君藥半枝蓮中的主要成分野黃芩苷含量進行了測定。測定結果表明,該方法操作較為簡單,色譜峰分離度好,精密度與回收率符合要求,重現(xiàn)性好,便于對白蓮參膠囊的質(zhì)量進行控制。試驗測定的三批樣品系不同批次藥材制成,測量結果比較穩(wěn)定,建立的質(zhì)量標準為本制劑提供含量測定的依據(jù)。規(guī)定本品含半枝蓮以野黃芩苷(C21H18O12)計,每粒不得少于78 μ g。

[1]尤杰.劉嘉湘教授辨治肺癌經(jīng)驗[J].長春中醫(yī)藥大學學報,2011,27(2):185-186.

[2]張秀娟,楊姍姍.半枝蓮化學成分及提取物抗腫瘤作用的研究現(xiàn)狀[J].亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥,2008,4(8):75-77.

[3]席榮英,李聰輝,王翠紅.半枝蓮微量元素含量測定[J].微量元素與健康研究,2002(2):37-38.

[4]YinX,ZhouJ;JieC.Anticancer activity and mechanism of Scutellaria barbata extract on human lung cancer cell line A549[J].Life Sci,2004,75(18):2233-2244.

[5]肖海濤,李銑.半枝蓮化學成分和藥理活性研究進展[J].中藥研究與信息,2005,7(4):21-25.