李傳勝 徐宏飛 魏 莉 張?zhí)m香 張燕華 解宗麟

先天性甲狀腺機(jī)能減退(甲低)是引起常見(jiàn)先天性癡呆的病因之一，他是以外周血甲狀腺激素(T3和T4)水平降低為特征的新生兒內(nèi)分泌障礙。世界范圍內(nèi)先天性“甲低”的平均發(fā)病率為1∶4000。“甲低”的特點(diǎn)是外周血中甲狀腺激素低于正常水平，而促甲狀腺素高于正常水平[1]。人體的促甲狀腺素是由腦垂體前葉合成分泌，調(diào)節(jié)和刺激甲狀腺產(chǎn)生甲狀腺激素。甲狀腺激素缺乏刺激TSH分泌，存在負(fù)反饋。TSH水平受下丘腦分泌的促甲狀腺素釋放激素的影響[2]。因此，新生兒外周血促甲狀腺素濃度水平提高，可作為篩查判斷先天性“甲低”的根據(jù)。但由于患“甲低”疾病的嬰兒缺乏早期癥狀，不易及時(shí)發(fā)現(xiàn)并治療，從而導(dǎo)致了患“甲低”疾病的嬰兒終身殘疾。為此，自1974年始發(fā)達(dá)國(guó)家已普遍實(shí)行新生兒先天性甲狀腺機(jī)能篩查，從而使發(fā)病造成對(duì)嬰兒的危害大幅降低。本試驗(yàn)是采用改良的酶聯(lián)免疫“雙抗夾心法”吸附試驗(yàn)為原理進(jìn)行設(shè)計(jì)的，具有準(zhǔn)確分辨“甲低”人群及正常人群的功能[3]。新生兒出生前后和出生后數(shù)月內(nèi)甲狀腺激素的不足將妨礙其大腦的正常發(fā)育，其最終結(jié)果導(dǎo)致不可修復(fù)的大腦功能障礙和骨骼神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育障礙。早期篩查出新生兒先天性“甲低”，用甲狀腺激素的替代治療可防止大腦的發(fā)育不良，適用于新生兒先天性甲狀腺機(jī)能的篩查。

1 資料與方法

1.1 標(biāo)本采集

(1)對(duì)采集的血片應(yīng)嚴(yán)格按要求驗(yàn)收。標(biāo)本驗(yàn)收可以減少假陽(yáng)性率，避免造成不必要的浪費(fèi)。嬰兒出生后3～5 d，用濾紙從嬰兒的足跟取一滴血液，獲得帶血點(diǎn)(直徑0.8 cm)的濾紙片，并確信濾紙片被血樣完全浸透，帶血樣的濾紙片至少晾干2 h，將帶血樣的干燥濾紙片密封，在4～8 ℃的室溫下貯存4月。

(2)濾紙片標(biāo)本的收集必須為單一的一滴血液，否則會(huì)造成假陽(yáng)性結(jié)果。血樣在濾紙片上擴(kuò)展的面積要足夠大，保證血液從濾紙的上面均勻浸透到下面，浸透不完全則會(huì)造成測(cè)定的TSH量偏低。

(3)采血點(diǎn)應(yīng)稍微靠近足跟的左表面皮膚，抹掉第一滴血用隨后形成的血滴。為提高嬰兒足跟針刺點(diǎn)血流，嬰兒足跟可用熱濕毛巾(約42 ℃)敷3 min。不可過(guò)分?jǐn)D壓足部，否則會(huì)導(dǎo)致溶血或組織液的稀釋。血滴形成后，用濾紙片輕輕地接觸血滴，但不可向足跟擠壓，從濾紙背面觀察血滴透過(guò)濾紙。通常1個(gè)嬰兒要收集3個(gè)血點(diǎn)(3滴血)的濾紙標(biāo)本，血樣點(diǎn)應(yīng)避免污染。置濾紙于水平位置，室溫空氣需干燥2～6 h[4]。

(4)注意不可將血樣加熱和堆積，不可接觸其他物品表面。將每個(gè)帶血標(biāo)本的濾紙片置于單獨(dú)的信封中，并郵寄至新生兒篩查中心實(shí)驗(yàn)室。中心實(shí)驗(yàn)室收到標(biāo)本后應(yīng)放置于4～8 ℃的室內(nèi)防濕保存，并及時(shí)篩查。

(5)標(biāo)本收集卡應(yīng)注明以下內(nèi)容：醫(yī)院名稱、編號(hào)、嬰兒姓名、出生日期、住院號(hào)、家庭地址、電話和采血日期。血片打孔時(shí)應(yīng)盡量避免血斑邊緣，應(yīng)取中心與邊緣之間部位。

1.2 試劑準(zhǔn)備

檢測(cè)試劑不可使用超過(guò)有效期的試劑，不可互用不同批號(hào)的試劑，因其每批試劑的批號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品和質(zhì)量控制值有可能不同，注意標(biāo)準(zhǔn)品和質(zhì)量控制的單位，應(yīng)分清是血清還是全血，并堅(jiān)持使用原廠試劑[5]。試劑應(yīng)在2～8 ℃冰箱內(nèi)儲(chǔ)存[6]，試劑盒從冰箱取出30 min后方能打開(kāi)外包裝，等待試劑溫度與室內(nèi)溫度平衡后方可使用。所用的蒸餾水和去離子水都應(yīng)保證其質(zhì)量，否則將會(huì)提高假陽(yáng)性率。酶的配置時(shí)間應(yīng)在使用前1 h內(nèi)，酶配制完畢輕微晃動(dòng)混勻后靜止放置30 min以上[7]。

1.3 加樣

加樣時(shí)嚴(yán)格操作方能獲得理想的檢測(cè)結(jié)果。應(yīng)準(zhǔn)確地使用加液器，不可使加液頭接觸孔壁，避免孔間污染；配制底物溶液等時(shí)所用的器具必須潔凈，應(yīng)仔細(xì)清洗加樣板是很重要的。避免加在孔壁上部，也不可濺出或產(chǎn)生氣泡。加完后震蕩混勻，但不可使液體濺出孔外。

(1)溫度。加入酶后的反應(yīng)溫度應(yīng)控制在25～27 ℃之間。冬天的假陽(yáng)性率偏高的原因，由于早上和晚間的溫度不穩(wěn)定有關(guān)。保溫時(shí)間過(guò)長(zhǎng), 保溫溫度過(guò)高,都會(huì)引起試驗(yàn)的高本底現(xiàn)象。

(2)清洗加樣板。每次清洗加樣板要徹底，拍板要干凈，盡可能的不留殘余。清洗每塊加樣板的時(shí)間應(yīng)盡可能保持相對(duì)一致。

1.4 TMB顯色劑的配制

TMB顯色劑必須在臨用前配制，TMB顯色劑溶解于二甲基亞砜中，二甲基亞砜對(duì)眼睛和皮膚有刺激，若接觸到眼睛時(shí)應(yīng)立即用清水沖洗，然后去醫(yī)院治療；接觸皮膚后應(yīng)立即用大量清水沖洗；操作應(yīng)帶手套；氧化劑，金屬離子和肥皂殘留物均能干擾TMB的反應(yīng)。TMB的熔點(diǎn)為18 ℃，低于此溫度則易結(jié)晶。使用前應(yīng)放置于18～25 ℃的室內(nèi)，待平衡溶解后用底物緩沖液稀釋配制[8]。TMB顯色劑對(duì)光具有敏感性，應(yīng)避免暴露在強(qiáng)光下。

2 結(jié)果

2.1 結(jié)果判斷

判斷結(jié)果應(yīng)以吸光度來(lái)判斷，不可憑目測(cè)判斷。使用酶標(biāo)儀測(cè)光密度(optical density，OD)值[2]，比色時(shí)間不可超過(guò)30 min。比色時(shí)間過(guò)長(zhǎng)將會(huì)造成結(jié)果OD值偏高。

2.2 實(shí)驗(yàn)室內(nèi)質(zhì)量控制

由實(shí)驗(yàn)室工作人員采取一定的方法和步驟，連續(xù)評(píng)價(jià)出本實(shí)驗(yàn)室工作的可靠性程度，旨在監(jiān)測(cè)和控制本室常規(guī)工作的精確度，提高本科室常規(guī)工作批次內(nèi)樣品檢驗(yàn)的一致性，以確定測(cè)定結(jié)果是否可靠，可否發(fā)出檢測(cè)報(bào)告[9-12]。

3 結(jié)論

在TSH酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)中嚴(yán)格按照操作規(guī)程進(jìn)行試驗(yàn)，其試驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確、可靠，可極大減少假陽(yáng)性率和可疑召回率，降低人力和試劑地消耗，為醫(yī)院節(jié)約了成本，提高篩查結(jié)果的準(zhǔn)確率，切實(shí)使真正的陽(yáng)性兒童及時(shí)進(jìn)行復(fù)查，值得推廣。

[1]王君林.ELISA雙抗夾心法間接法檢測(cè)血清抗-HIV結(jié)果比較[J].醫(yī)學(xué)研究通訊,2003,32(3):55-56.

[2]謝艷玲,甘紹軍.ELISA法中終止反應(yīng)后放置時(shí)間對(duì)OD值結(jié)果的影響[J].中國(guó)社區(qū)醫(yī)師,2011(35):241.

[3]趙建萍,王莉敏.洗板因素對(duì)ELISA方法檢測(cè)HIV抗體的影響[J].中外醫(yī)學(xué)研究,2011,9(27):126.

[4]楊海霞.新生兒疾病篩查血樣采集方法的探討[J].中外醫(yī)學(xué)研究,2011,9(18):137-138.

[5]陳琪明,葛閩霞.Sysmex XE-2100全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀工作原理和故障維護(hù)思路[J].中國(guó)醫(yī)學(xué)裝備,2012.9(3):88.

[6]顧學(xué)范,葉軍.新生兒疾病篩查[M].上海:上?？茖W(xué)技術(shù)文獻(xiàn)出版社,2003:276-277.

[7]白占杰.論酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)中影響因素及解決方法[J].實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2012,30(2):185-186.

[8]蔣小滔,吳砂,左大明,等.新型雙組分3.3'.5.5'-四甲基聯(lián)苯胺顯色劑的配制[J].實(shí)用預(yù)防醫(yī)學(xué),2008,18(6):1752-1754.

[9]胡麗濤,王治國(guó).計(jì)算機(jī)的檢驗(yàn)項(xiàng)目室內(nèi)質(zhì)量控制方法研究[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2012,27(2):99-102.

[10]李正祥,葛建新.淺談現(xiàn)代化醫(yī)院醫(yī)療設(shè)備管理的重要意義[J].中國(guó)醫(yī)學(xué)裝備,2012,9(3):58.

[11]畢秀欣.酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)檢測(cè)HIV抗體影響因素探討[J].中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)生,2012,5(2):76-77.

[12]顧學(xué)范,葉軍.新生兒疾病篩查[M].上海:上海科學(xué)技術(shù)文獻(xiàn)出版社,2003:278.