茹立軍，李文有

酒泉職業(yè)技術學院，甘肅酒泉 735000

毛細管電泳技術發(fā)展至今已經走過了幾個世紀，早在1981 年，就已經有研究人員使用75pm 熔融石英毛細管作為分離通道，將氨基酸進行了快速、高效的分離，此外還根據色譜理論對毛細管區(qū)帶點臃腫所出現的譜帶分散過程進行了系統的解釋，形成了現代毛細管電泳。毛細管凝膠電泳以及毛細管等電聚焦法是由Hjerten 在1983 ～1985 三年間先后提出的，這兩種方法對于分辨效率的提高起著非常關鍵的作用，同時也實現了自動化操作。下面在介紹幾種重要的毛細管電泳分離模式：

1）毛細管區(qū)帶電泳

毛細管電泳使用最為廣泛的就是該分離模式，它是根據不同荷質比的組分在充滿電解質溶液的毛細管中，在電場作用下所形成的淌度不同而實現分離的。這種分離模式雖然適用性很大，但是該模式不能夠用于中性物質的分離。因為中性物質的淌度差為零，不滿足該分離模式的分離原理。

2）毛細管凝膠電泳法

該分離模式是毛細管電泳中分離效率最高的。想毛細管中注入粘度大且抗對流的凝膠后，可以進一步的降低溶質擴散程度，把譜帶的展寬限制在一定范圍內。這樣就可以得到一個非常尖銳的峰型，而且所形成的住效也極高。此外，由于凝膠的存在，溶質在毛細管壁上的吸附也將得到一定的控制，可以進一步的減少電滲流。該分離模式最大的缺點就在于柱制備較為困難，而且使用壽命較短。

3）毛細管等速電泳

該分離模式的分離原理也是基于樣品組分在電場作用下所形成的不同電泳淌度。使用該分離模式需要兩種還有不同電泳淌度離子的電解質，將樣品組分放置于兩種電解質的交界面上，就可以在電壓的作用下，實現樣品組分在兩種不同離子間的移動分離。

微流控芯片是一種實驗裝置，它屬于微機電加工技術應用范疇。實際上，微流控芯片就是在硅、石英、玻璃或者高分子聚合物等介質上，加工出的微管道、微反應器、微小電極等能夠實現某些功能的微小裝置。在具體應用中，微流控芯片可以對生物或者化學成分進行純化、反應、萃取、分離等操作。微尺寸效應是微流控芯片工作的理論基礎，微管道網絡是其應用時的基本特征，微流體是其實際應用過程的直接核心。芯片毛細管電泳就是基于微流控芯片平臺的可以對樣品中的多個目標實施分離的一種技術，它的分離通道就是在硅、石英、玻璃或者高分子聚合物等介質上所加工出來的微通道。相較于傳統的毛細管電泳技術而言，芯片毛細管電泳具有以下幾點優(yōu)勢：

1）散熱性好、可控性及分離效率高：微流控芯片的導熱系數可以達到1.4W/m.k，具有非常好的散熱性，所以對于微流控芯片而言，不用過多的考慮因高壓所引起的熱量上升問題。此外，微流控芯片還可以控制進樣過程，保證樣品在可控速度、可控距離的前提下進行分離；

2）可以進行高通量分離分析：實際應用中還可以對微流控芯片的表面進行更為高密度的陣列分離通道加工，以實現樣品高通量的分離分析；

3）有利于商業(yè)化進程：微流控芯片可以在高聚物材料上進行加工，并且能夠一次成型毛細管電泳芯片，這對于芯片的商業(yè)化發(fā)展非常有利。

下面簡要介紹一下芯片薄層電解池-毛細管電泳聯用裝置的設計方案。

1 設計的基本思路

1）方案一

（1）選用玻璃作為芯片材料，玻璃的電滲行以及光學特性均較好，同時像玻璃這種透明介質，可以對芯片內液體的流動進行實時的觀察，而且相比較其他介質而言，價格較低。使用光刻技術對玻璃進行加工，制造玻璃芯片微通道。所謂光刻技術，就是利用光成像以及光敏膠的原理，在微流控芯片上實現圖形化。

（2）對于薄層電解池而言，這里設計成三電極體系（工作電極、對電極、參比電極）。這三個電極的相互位置以及相互之間的連通通道一定要進行合理的設計規(guī)劃，而且通道的阻抗系統一定要盡量的降低。為了實現短時間內迅速完成樣品耗竭性電解，一定要將薄層區(qū)的厚度降至最低。

（3）芯片將薄層電解池以及毛細管電泳的進樣接口集成在一起，并將接口的位置進行了合理的設計規(guī)劃，盡可能的減少了死體積的出現。

2）方案二

（1）使用高分子聚合物聚二甲基硅氧烷PDMS 作為芯片的制作材料。PDMS 非常耐用，具有一定的化學惰性，不易被反應，而且該聚合物無毒、生產成本低，PDMS 是一種固化型聚合物。我們使用光刻膠的方法制作一個模具，之后在模具上固化液態(tài)的高聚物，從而制作出PDMS 微芯片。這個過程可以稱之為模塑法制作微芯片。

（2）傳統電進樣過程出現了比較嚴重的電歧視情況，所以在本實驗中所使用的進樣方式是壓力進樣。壓力進樣的方式大致可以分為以下三種，即加壓進樣，也可以稱為正壓進樣；減壓進樣，也可以稱為負壓進樣；高差進樣，也可以稱為虹吸進樣。所謂正壓進樣，就是在樣品溶液池的上空加以正向壓力，促使樣品進入毛細管或者微流控通道；所謂負壓進樣，就是在毛細管的另一端，通過抽吸來促使樣品進入毛細管或者微流控通道，這種方式也可以看做是降低了樣品溶液池上方壓力；所謂高差進樣，就是利用高度差來促使樣品進入毛細管或者微流控通道，本實驗中是將毛細管的一端先插入樣品池，然后將樣品池的位置升高，使得毛細管兩端出現一定的高度差。

2 芯片通道的形成

制作芯片通道所選用的芯片材料是聚甲基丙烯酸甲酯（PMMA），其是一種很常用的熱塑性塑料。將微通道設計為T 字型，控制毛細管外徑在400μm。T 通道的四個臂與通道底面是分離的，之所以這樣設計是為了能夠順利的進行脫模操作。同時在通道的左側壁以及下壁上，設計了四個小正方形結構，用于壁與底片的固定。電解槽的左側還設計了一個參比電極槽，以滿足三電極體系的要求；同時還設計了一些應用固定芯片的裝置，是為了能夠更好的將芯片進行固定。反應固化的過程可以簡述為：將兩根毛細管放置在模具0.5mm 孔處，同時將它們搭在與小圓柱體相同高度、相互交叉放置的一個搭片上，且對接兩根毛細管。按照50:1:1 的比例還配置乙烯基硅油、含氫硅油、催化劑三種溶液的混合液，并將這種混合液涂抹在T 通道的四壁上，將四壁與通道底面進行粘合。之后放在80℃的烘箱中實現四壁與地板的反應固化粘結。之后在模具中，先加入10g 乙烯基硅油與0.2g 含氫硅油攪拌均勻，再放入0.2g催化劑攪拌2min。脫模過程首先要做的就是抽真空操作，之后放置于80℃的烘箱中進行反應固化。這個過程大約需要3h，在固化之后，要先冷卻至室溫才能進行脫模操作。經過實驗可以發(fā)現，使用PMMA 來制作芯片通道可以很好的進行脫模操作，同時所制作的芯片性能也較好。

3 芯片電泳測試

1）基線測試

將芯片的緩沖液池以及兩個通道中均加入緩沖液。該實驗所用緩沖液是20mmol·L-1，且PH 值為9.0 的硼砂緩沖溶液。對緩沖液池施加20KV 的高壓，并將緩沖液池的D 端可靠接地，就可以測量到一個波長為200nm，毛細管有效長度為50cm 的芯片基線。

2）進樣測試

該測試所用樣品溶液的制作：將1.0×l 0-2mol·L-1槲皮素母液溶解在乙醇中，再用二測蒸餾水把所得到的混合液（槲皮素母液與乙醇混合）稀釋為1.0×10-3mol·L-1的槲皮素工作業(yè)。所使用的緩沖液是20mmol·L-1，且PH 值為9.0 的硼砂緩沖溶液。同樣對緩沖液池施加20KV 的高壓進行測試。測試結果顯示不同時間段電流的值也不同，經過分析可以知道，之所以電流會出現這些變化主要是由于樣品溶液中乙醇的存在而造成的，因此將樣品中的乙醇改為茶氨酸在進行測試。

上面簡要介紹了一下設計原理、芯片的形成過程以及芯片電泳的測試方法?，F在芯片薄層電解池-毛細管電泳聯用技術已經廣泛應用于樣品分離分解中，它的優(yōu)勢非常明顯。但該技術還存在著很多可以改進的地方，在今后的工作中，筆者將繼續(xù)對該技術進行更為深入的研究，以期能夠進一步的提高該技術的分離性能及適用性。

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