趙友誼，孫 浩，王 鳴，馮 煦

(江蘇省中國(guó)科學(xué)院植物研究所/江蘇省藥用植物研究開(kāi)發(fā)中心，江蘇南京 210014)

中藥白芷為傘形科植物白芷［Angelica dahurica(Fisch.ex Hoffm.)Benth.et Hook.f.］或杭白芷［Angelica dahurica(Fisch.ex Hoffm.)Benth.et Hook.f.var.formosana(Boiss.)Shan et Yuan］的干燥根［1］，其主要有效成分為香豆素類。具有解表散寒，祛風(fēng)止痛，宣通鼻竅，燥濕止帶，消腫排膿功效;用于感冒頭痛、眉棱骨痛、鼻塞、鼻淵、牙痛、帶下、瘡瘍腫痛等。此外白芷還是一種很好的調(diào)味輔料和香料，可以食用，也可以用于保健品和化妝品。白芷人工栽培歷史悠久，全國(guó)各地均有栽培。商品及藥用上有川白芷、杭白芷、祁白芷、禹白芷之分。經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期人工栽培和適生性生長(zhǎng)，不同產(chǎn)地白芷已明顯區(qū)別于野生白芷，并形成相對(duì)各自獨(dú)立的產(chǎn)地特性［2］。本文旨在將不同種質(zhì)來(lái)源的白芷引種到江蘇后進(jìn)行栽培種植基礎(chǔ)上，利用現(xiàn)代分析技術(shù)對(duì)其有效化學(xué)成分進(jìn)行研究，以篩選出適合江蘇省栽培、香豆素含量高、產(chǎn)量大的優(yōu)良種質(zhì)。

1 儀器和材料

1.1 儀器

Agilent 1100 Series高效液相色譜儀(美國(guó)安捷倫科技公司)，配置UV檢測(cè)器，色譜數(shù)據(jù)處理由Agilent化學(xué)工作站完成。Ro－di純水機(jī)(銳思捷科學(xué)儀器有限公司);KH2200DB型數(shù)控超聲波清洗器，功率250 W，頻率25 KHz(昆山禾創(chuàng)超聲儀器有限公司);LiBORAR AEL－200電子分析天平(島津公司)。

1.2 試劑

甲醇(色譜純)，由南京化學(xué)試劑有限公司提供。

1.3 對(duì)照品

以上對(duì)照品均為本實(shí)驗(yàn)室自行分離純化所得，經(jīng)NMR、MS等方法鑒定其結(jié)構(gòu)，HPLC檢測(cè)純度，均在98%以上。

圖1 5種對(duì)照品的名稱和化學(xué)結(jié)構(gòu)式

1.4 藥材

選擇川白芷、杭白芷、祁白芷、禹白芷等主要白芷品種，每個(gè)產(chǎn)地白芷品種收集2～3份。將收集到的種質(zhì)材料于4月初(春播)及10月初(秋播)栽種于江蘇省中國(guó)科學(xué)院植物研究所苗圃基地，常規(guī)種植方式進(jìn)行田間管理，于次年采收期(七月間)，隨機(jī)挖取30株檢測(cè)白芷的生長(zhǎng)量及香豆素成分含量。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

采用 Phenomenex Gemini C18(250 mm ×4.60 mm，5 μm)色譜柱，柱溫30℃;流動(dòng)相為甲醇－水(70∶30)，流速為 0.8 mL/min，洗脫 30 min;UV 檢測(cè)波長(zhǎng) λ =310 nm;進(jìn)樣量5 μL。

2.2 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取對(duì)照品比克白芷素2.20 mg、氧化前胡素 1.01 mg、歐前胡素 3.13 mg、珊瑚菜內(nèi)酯 0.72 mg、異歐前胡素2.64 mg，置同一10 mL容量瓶中，加50%甲醇定容至刻度，制成濃度分別為0.220 mg·mL－1、0.101 mg·mL－1、0.313 mg·mL－1、0.072 mg·mL－1、0.264 mg·mL－1的混合對(duì)照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備

新鮮藥材切塊經(jīng)66℃烘干，粉碎過(guò)4號(hào)篩，精密稱取藥材粉末5 g，用95%乙醇80 mL在水浴85℃加熱回流，提取3次，每次2 h。合并提取液，濃縮至干后用甲醇溶解，并定容至25 mL容量瓶中，經(jīng)0.45 μm 濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.4 線性關(guān)系的考察

分別吸取混合對(duì)照品溶液 2 μL、4 μL、6 μL、8 μL、10 μL，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定。各對(duì)照品以峰面積Y對(duì)相應(yīng)的濃度X進(jìn)行線性回歸，5個(gè)成分的線性方程見(jiàn)表1。

表1 5種香豆素對(duì)照品線性關(guān)系

2.5 精密度試驗(yàn)

精密吸取混合對(duì)照品溶液5 μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積，按“2.1”項(xiàng)下條件測(cè)定含量。結(jié)果各標(biāo)準(zhǔn)品含量的RSD均小于2.13%，表明精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取杭白芷的同一供試品溶液，在前述色譜條件下分別在 0，2，4，6，8，10，24 h 進(jìn)樣 10 μL，各標(biāo)準(zhǔn)品含量的RSD均小于1.97%。結(jié)果表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

取杭白芷的同一供試品溶液，按“2.3”項(xiàng)下方法重復(fù)提取5份，按上述色譜條件測(cè)定含量，結(jié)果表明各標(biāo)準(zhǔn)品含量的RSD均小于2.05%，表明重復(fù)性良好。

表2 5種香豆素成分回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.8 加樣回收率試驗(yàn)

量取已知含量的杭白芷供試品溶液1 mL至10 mL容量瓶，加甲醇定容至10 mL。分別精密加入五種香豆素對(duì)照品適量，按供試品項(xiàng)下方法制備，測(cè)定各標(biāo)準(zhǔn)品的含量計(jì)算回收率，結(jié)果見(jiàn)表2。

2.9 樣品測(cè)定

精密稱取各樣品5.0 g，按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液。樣品含量在線性范圍內(nèi)時(shí)直接進(jìn)樣10 μL，通過(guò)回歸方程計(jì)算含量。生長(zhǎng)量=30株白芷根部干重/30。結(jié)果見(jiàn)表3，色譜圖見(jiàn)圖1。

表3 不同種質(zhì)白芷中5種香豆素成分的含量(%)

圖2 對(duì)照品及樣品的HPLC圖

3 討論

3.1 本實(shí)驗(yàn)首次建立了HPLC同時(shí)測(cè)定白芷根部5個(gè)香豆素成分含量的方法，該方法簡(jiǎn)便、靈敏、準(zhǔn)確。

3.2 從實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)可以看出，不同種質(zhì)來(lái)源的白芷引種至江蘇后，其生長(zhǎng)量及香豆素含量差別較明顯。春播白芷生長(zhǎng)量比較:川白芷(春)＞杭白芷(春)＞祁白芷(春)＞禹白芷(春)，秋播白芷生長(zhǎng)量比較:川白芷(秋)＞禹白芷(秋)＞杭白芷(秋)＞祁白芷(秋)，五種香豆素總含量比較:川白芷(秋)＞川白芷(春)＞杭白芷(秋)＞杭白芷(春)＞祁白芷(秋)＞禹白芷(春)＞禹白芷(秋)＞祁白芷(春)。由此，從不同種質(zhì)來(lái)源的白芷生長(zhǎng)量及香豆素含量考慮，川白芷更適合江蘇地區(qū)栽培。

［1］國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典:一部［S］.北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2010:98.

［2］黃璐琦，王敏，付桂芳，等.中藥白芷種質(zhì)資源的 RAPD分析［J］.中國(guó)中藥雜志，1999，24(8):457－458.