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        丁苯酞注射液對(duì)大鼠腦出血后血腫周圍組織腦含水量及自由基代謝的影響

        2013-08-08 11:21:26倪小宇鞏娟娟齊素華
        當(dāng)代醫(yī)學(xué) 2013年6期
        關(guān)鍵詞:丁苯腦水腫腦組織

        倪小宇 鞏娟娟 齊素華

        腦出血(ICH)是一種嚴(yán)重危害人們健康的疾病。在我國ICH的發(fā)病率為(120~180)/10萬,每年新生病例約130萬,死亡100萬,其中一半是在2 d內(nèi)死亡[1],而病情的惡化往往與ICH隨后繼發(fā)的腦水腫有關(guān)。Wagner等[2]認(rèn)為早期將血腫清除可減輕ICH血腫周圍腦水腫及血腦屏障的破壞;Cherubini等[3]認(rèn)為氧自由基的產(chǎn)生與腦水腫形成有關(guān)。國內(nèi)外有關(guān)丁苯酞注射液神經(jīng)保護(hù)作用的大部分研究都集中在急性腦缺血模型,有關(guān)丁苯酞注射液作用于腦出血模型的實(shí)驗(yàn)研究報(bào)道較少。本研究通過丁苯酞對(duì)大鼠腦出血含水量及氧自由基影響,探討其對(duì)腦出血的治療作用。

        1 材料與方法

        1.1 試劑與動(dòng)物模型的制備

        1.1.1 主要器材與試劑 動(dòng)物立體定位儀(江灣二型),超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)試劑(南京建成生物工程研究所提供),丁苯酞(石藥集團(tuán)恩比普藥業(yè)有限公司提供)。

        1.1.2 動(dòng)物與分組 取健康成年SD雄性大鼠72只,體重250~300 g,由徐州醫(yī)學(xué)院動(dòng)物中心提供,隨機(jī)分成對(duì)照組、假手術(shù)組、腦出血組、腦出血+丁苯酞組,每組18只,其中每組6只用于腦組織含水量測定,6只用于SOD測定,6只用于MDA測定。

        1.1.3 動(dòng)物模型制作 參照Rynkowski等[4]報(bào)道的方法制作動(dòng)物模型,大鼠經(jīng)10%水合氯醛溶液(350 mg/kg)腹腔麻醉后,固定于立體定位儀上。選擇注射點(diǎn)為右側(cè)尾殼核(前囟前0.2 mm,中線右旁開 3.0 mm,進(jìn)針深度 5.8 mm,即尾殼核位置)。腦出血組取大鼠尾血50 μL,用微量進(jìn)樣器立即注入右側(cè)尾殼核,以10 μL/min的速度勻速注射,留針10 min后緩慢移出針頭。對(duì)照組在相同位點(diǎn)注入50 μL生理鹽水。假手術(shù)組在相同位點(diǎn)只進(jìn)針而不注血,留針5 min后拔除。丁苯酞治療組于腦出血模型成功后半小時(shí)(25 mg/kg)腹腔注射一次,一天2次,注射3 d,動(dòng)物都于72 h后處死,分別進(jìn)行檢測,研究顯示大鼠腦出血后72 h腦含水量及氧自由基變化最明顯[5]。

        1.2 實(shí)驗(yàn)方法

        1.2.1 腦組織含水量測定 將大鼠在模型制作成功后72 h再次麻醉,立即斷頭取出腦組織,應(yīng)用干一濕重法,迅速分離出血腫周圍腦組織,并立即稱濕重。然后將組織塊放入電熱烘箱中1000℃烘烤24 h,再稱干重。按下列公式計(jì)算:腦組織含水量(%)=(濕重-干重)/濕重×100%。

        1.2.2 SOD及MDA測定 將大鼠在模型制作成功后72 h再次麻醉,立即斷頭取出腦組織,分析天平稱重,按1∶9(W/V)加入生理鹽水,玻璃勻漿器勻漿,2000 r/min,離心12 min,取上清液。分別采用黃嘌呤氧化法和硫代巴比妥酸顯色法測定,嚴(yán)格按試劑盒操作程序進(jìn)行。

        1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行數(shù)據(jù)分析,各組數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示,兩組間比較用t檢驗(yàn),配對(duì)資料采用配對(duì)t檢驗(yàn),多組間比較采用單因素方差分析,P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

        2 結(jié)果

        2.1 腦組織含水量測定 假手術(shù)組和對(duì)照組腦血腫周圍組織含水量無明顯變化,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。腦出血組血腫周圍組織含水量顯著增加,明顯高于假手術(shù)組和對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),同時(shí)丁苯酞治療組血腫周圍組織含水量較腦出血組有顯著下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

        表1 腦出血和丁苯酞治療后腦組織血腫周圍腦含水量的變化(±s)

        表1 腦出血和丁苯酞治療后腦組織血腫周圍腦含水量的變化(±s)

        注:與腦出血組比較,aP<0.05

        組別 例數(shù) 腦含水量(%)假手術(shù)組 6 72.37±0.93a對(duì)照組 6 72.83±1.07a腦出血組 6 81.73±0.73丁苯酞治療組 6 74.23±0.57a

        2.2 SOD及MDA測定 假手術(shù)組和對(duì)照組SOD、MDA測定無明顯變化,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。腦出血組MDA顯著增加,SOD顯著降低,和假手術(shù)組、對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),同時(shí)丁苯酞治療組較腦出血組MDA值明顯降低(P<0.05),SOD值明顯升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表 2。

        表2 腦出血和丁苯酞治療后腦組織血腫周圍MDA、SOD的變化(±s)

        表2 腦出血和丁苯酞治療后腦組織血腫周圍MDA、SOD的變化(±s)

        注:與腦出血組比較,aP<0.05

        組別 例數(shù) MDA(nmol/mg·prot) SOD(U/mg·prot)假手術(shù)組 6 8.87±1.89 47.26±2.12對(duì)照組 6 9.03±1.77 46.73±2.03腦出血組 6 27.21±2.12 26.83±1.91丁苯酞治療組 6 15.43±2.04 39.16±1.88

        3 討論

        急性腦出血中,腦損傷、腦水腫形成不僅由于血腫的占位效應(yīng)和對(duì)周圍腦組織的直接破壞[6],血腫內(nèi)炎性細(xì)胞活化、化學(xué)物質(zhì)對(duì)周圍腦組織繼發(fā)性損害也非常重要,其中氧自由基機(jī)制是其中的重要原因[7-8]。自由基大量產(chǎn)生后攻擊中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)不飽和脂肪酸,引起脂質(zhì)過氧化,使膜通透性增加,膜功能喪失,線粒體功能障礙,溶酶體破裂,細(xì)胞溶解和組織水腫,大量微血管內(nèi)皮細(xì)胞壞死,通透性增加,腦水腫形成[9-10]等一系列損害。丁苯酞對(duì)腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用已經(jīng)得到公認(rèn),有研究顯示[11],可能與以下機(jī)制有關(guān),保護(hù)缺血腦組織和改善腦能量代謝,抑制自由基損傷,抑制炎癥損傷,抑制Ca2+超載,抑制細(xì)胞凋亡等。但是丁苯酞在腦出血中的應(yīng)用很少,本實(shí)驗(yàn)研究表明,丁苯酞可以顯著改善腦出血血腫周圍的腦含水量及有效清除氧自由基從而起到保護(hù)作用,但是丁苯酞有抗血小板作用[12],它應(yīng)用到腦出血中的安全性如何,時(shí)間點(diǎn)、劑量的選擇等一些列問題都有待于進(jìn)一步研究。

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