徐小紅，王力，張寧坤，鄭楠，高連如，朱智明

Apelin-13對5-Aza誘導(dǎo)臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞向心肌細(xì)胞分化的影響

徐小紅，王力，張寧坤，鄭楠，高連如，朱智明

目的探討apelin-13蛋白在體外對5-氮胞苷(5-Aza)誘導(dǎo)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(hUC-MSCs)向心肌細(xì)胞分化的影響。方法采用組織塊貼壁法培養(yǎng)hUC-MSCs，胰酶消化傳代；取P2代細(xì)胞置于不同分化條件的培養(yǎng)液中分化培養(yǎng)14d，實(shí)驗(yàn)分為A、B、C、D組(apelin-13濃度分別為0、1×10－6、2×10－6和10×10－6mol/L)，各組培養(yǎng)基中5-Aza濃度均為10×10－6mol/L。采用流式細(xì)胞儀檢測hUC-MSCs表面免疫標(biāo)記，MTT法檢測細(xì)胞在570nm處的吸光度(A)值，RTPCR檢測肌鈣蛋白T(cTnT)、GATA-4 mRNA表達(dá)水平，免疫組織化學(xué)染色法檢測心肌細(xì)胞表面標(biāo)志物cTnT的表達(dá)。結(jié)果流式細(xì)胞儀鑒定結(jié)果表明，hUC-MSCs表達(dá)CD44、CD90、CD105、CD73、經(jīng)典人類白細(xì)胞抗原Ⅰ類抗原(HLAABC)，不表達(dá)CD34、CD45、經(jīng)典人類白細(xì)胞抗原Ⅱ類抗原(HLA-DR)。MTT檢測顯示，0、10×10－6mol/L apelin-13處理的hUC-MSCs在570nm處的A值分別為0.841±0.290、0.875±0.325，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。B、C、D組cTnT mRNA表達(dá)水平分別是A組的2.09±1.35、5.24±1.30、1.17±0.63倍，B、C、D組GATA-4 mRNA表達(dá)水平分別是A組的2.68±1.18、4.82±0.14、2.14±0.27倍；C組與B、D組比較，cTnT、GATA-4 mRNA表達(dá)差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。免疫組化染色顯示，誘導(dǎo)14d后C組細(xì)胞cTnT蛋白表達(dá)呈陽性。結(jié)論10×10－6mol/L apelin-13對hUC-MSCs無毒性作用，一定濃度的apelin-13蛋白可增強(qiáng)5-Aza誘導(dǎo)hUC-MSCs向心肌細(xì)胞分化的效率，濃度為2×10－6mol/L時增強(qiáng)作用最明顯。

臍帶；間質(zhì)干細(xì)胞；心肌；細(xì)胞分化；apelin-13；5-氮胞苷

目前，藥物、介入、外科搭橋手術(shù)均無法補(bǔ)充因心肌壞死丟失的心肌細(xì)胞，心肌梗死后缺血性心力衰竭的發(fā)病率正日益升高[1]。Wang等[2]采用apelin加含有bFGF、activin-A、BMP4的培養(yǎng)基誘導(dǎo)鼠和人胚胎干細(xì)胞向心肌細(xì)胞分化，證實(shí)apelin可以增強(qiáng)含bFGF、activin-A、BMP4的培養(yǎng)基誘導(dǎo)鼠和人胚胎干細(xì)胞向心肌細(xì)胞分化的能力。目前尚未見有關(guān)apelin蛋白在體外對5-氮胞苷(5-Aza)誘導(dǎo)hUCMSCs向心肌細(xì)胞分化影響的報道，本實(shí)驗(yàn)通過觀察5-Aza聯(lián)合apelin-13誘導(dǎo)hUC-MSCs向心肌細(xì)胞分化的效率，探討apelin蛋白在hUC-MSCs向心肌細(xì)胞分化中的作用，以期建立更優(yōu)的誘導(dǎo)hUC-MSCs向心肌細(xì)胞分化的方案。

1 材料與方法

1.1 細(xì)胞及主要試劑 所有標(biāo)本均取自海軍總醫(yī)院產(chǎn)科當(dāng)日剖宮產(chǎn)健康嬰兒的新鮮臍帶，長度約8cm。胎齡37～40周，均無先天性疾??；產(chǎn)婦體健，無肝炎、梅毒、艾滋病等傳染性疾病，產(chǎn)婦及家屬對臍帶用于實(shí)驗(yàn)研究均知情同意。Trizol(Gibco公司)；5-Aza、MTT(Sigma公司)；apelin-13(Santa Cruz公司)；兔抗人肌鈣蛋白T(cTnT)抗體(工作濃度1:100，北京博奧森生物技術(shù)公司)；二抗為聚合HRP標(biāo)記羊抗兔IgG(武漢博士德生物公司)；DAB試劑盒、即用型兔IgG兩步法免疫組化試劑盒(SV0002，武漢博士德生物公司)；Prime ScriptTMRT reagent Kit with gDNA Eraser、SYBR? Premix Ex TaqTMⅡ (Tli RNaseH Plus，大連寶生物公司)。

1.2 方法

1.2.1 hUC-MSCs的分離、培養(yǎng) 無菌取剖宮產(chǎn)嬰兒的新鮮臍帶，以平衡鹽溶液洗去臍帶殘留血液，剪成3～4cm的小段，每段均沿靜脈腔剪開，平鋪后剔除靜脈，再深入剪開華通膠(血管之間、血管與外膜之間的膠狀物)，剔除2根動脈，取華通膠并剪切成1mm3及以下小塊，接種于T75培養(yǎng)瓶內(nèi)，細(xì)胞貼壁約90%融合后傳代培養(yǎng)。

1.2.2 hUC-MSCs的鑒定 流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞表面標(biāo)志物：取擴(kuò)增傳代2代的臍帶華通膠間充質(zhì)干細(xì)胞，棄培養(yǎng)基，PBS洗2遍，用0.25%胰蛋白酶消化，血清終止消化，用PBS洗滌、重懸，調(diào)整細(xì)胞密度為1×106/ml，取1ml/管，共8管，分別加入鼠抗人單克隆抗體PE-CD90、PE-CD105、PE-CD44、PE-CD73、PE-HLA-ABC、FITC-CD45、FITCCD34、FITC-HLA-DR各20μl，充分混勻，避光室溫孵育30min，PBS洗2遍，250×g離心10min，重新制成細(xì)胞懸液0.5ml，流式細(xì)胞儀檢測。

1.2.3 MTT法檢測細(xì)胞增殖情況 常規(guī)胰酶消化P2代細(xì)胞，得到細(xì)胞懸液，1000r/min離心5min，棄上清，加新鮮培養(yǎng)基制成懸液，計數(shù)，調(diào)整細(xì)胞密度為1×105/ml，按2×104/孔接種于96孔板，加新鮮培養(yǎng)基培養(yǎng)24h。24h后棄舊培養(yǎng)基，實(shí)驗(yàn)分為對照組(單純基礎(chǔ)培養(yǎng)基)和實(shí)驗(yàn)組(含有10×10－6mol/L apelin-13的培養(yǎng)基處理細(xì)胞24h)，每組設(shè)5個復(fù)孔。繼續(xù)置于37℃、5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)24h。24h后棄培養(yǎng)基，換新鮮培養(yǎng)基，各孔加10μl MTT(5mg/L)，4h后吸棄，加二甲基亞砜，在搖床上低速搖10min，用酶標(biāo)儀檢測兩組細(xì)胞在570nm處的吸光度(A)值。

1.2.4 hUC-MSCs向心肌細(xì)胞的誘導(dǎo)分化 常規(guī)0.25%胰酶消化P2代細(xì)胞，血清終止消化，PBS洗滌、重懸，調(diào)整細(xì)胞密度為5×106/ml，接種于T25瓶，實(shí)驗(yàn)分為A、B、C、D 4組(apelin-13濃度分別為0、1×10－6、2×10－6和10×10－6mol/L)，置于37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，待細(xì)胞約80%融合后向各組培養(yǎng)基中加入終濃度為10×10－6mol/L的5-Aza。繼續(xù)置于37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h。24h后棄培養(yǎng)基，繼續(xù)換用新鮮培養(yǎng)基培養(yǎng)，以后每隔2～3d換液1次，B、C、D組每天分別加入1×10－6、2×10－6和10×10－6mol/L apelin-13。分別于誘導(dǎo)后1、7、10、14d在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)及生長情況。

1.2.5 RT-PCR檢測心肌細(xì)胞表面標(biāo)志物mRNA表達(dá) 收集上述各組誘導(dǎo)14d后的細(xì)胞，按Trizol試劑盒說明書提取總RNA。取適量RNA進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，以cDNA為模板，引物序列如下：cTnT，正義5'-ACAGAGCGGAAAAGTGGGAAG-3'，反義5'-TCGTTGATCCTGTTTCGGAGA-3'，產(chǎn)物大小230bp；GATA-4，正義5'- CGACACCCCAATCTCGA TATG-3'，反義5'-GTTGCACAGATAGTGACCCGT-3'，產(chǎn)物大小117bp；內(nèi)參照GAPDH，正義5'-GACATG CCGCCTGGAGAAAC-3'，反義5'-AGCCCAGGATGCCCTTTAGT-3'，產(chǎn)物大小1166bp。使用Bio-Rad RCR儀進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)，總反應(yīng)體系25μl。擴(kuò)增條件：95℃ 30s；95℃ 5s、60℃ 60s，共40個循環(huán)。目的基因與內(nèi)參照基因同時檢測，每個樣本設(shè)置3個復(fù)孔，比較各組間的差異，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.2.6 免疫組織化學(xué)染色檢測心肌細(xì)胞表面標(biāo)志物CTnT的表達(dá) 實(shí)驗(yàn)組(2×10－6mol/L apelin-13+10×10－6mol/L 5-Aza)細(xì)胞在T25瓶分化培養(yǎng)至11d時，以0.25%胰酶消化細(xì)胞，離心棄上清；加新鮮培養(yǎng)基制成懸液，調(diào)整細(xì)胞密度為5×104/ ml，接種于預(yù)置蓋玻片的24孔板內(nèi)。待細(xì)胞在蓋玻片貼壁生長，融合達(dá)80%時，吸棄培養(yǎng)液。采用SP法行免疫組化檢測cTnT的表達(dá)，按說明書操作，用PBS代替一抗作為陰性對照。DAB顯色，高倍鏡觀察結(jié)果。對照組不加apelin-13和5-Aza，其余處理同實(shí)驗(yàn)組。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理 應(yīng)用SPSS 18.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析。數(shù)據(jù)以表示，多組間比較采用單因素方差分析，進(jìn)一步兩兩比較采用SNK-q檢驗(yàn)；實(shí)驗(yàn)組與空白對照組的比較采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 hUC-MSCs分離、傳代培養(yǎng)結(jié)果 臍帶華通膠組織塊接種于完全培養(yǎng)基培養(yǎng)10d后，顯微鏡下可見在組織塊周圍有黏附培養(yǎng)瓶壁生長、成纖維細(xì)胞樣、有偽足伸出、有折光性的細(xì)胞，15、16d后細(xì)胞融合(圖1A)；按1×106個/75cm2培養(yǎng)瓶傳代培養(yǎng)，3～5d后細(xì)胞即融合(圖1B)。

圖1 倒置顯微鏡下的hUC-MSCs形態(tài)(×40)Fig.1 Morphology of hUC-MSCs under inverted microscope (×40)

2.2 臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞表面抗原分子表達(dá) 流式細(xì)胞儀檢測顯示，P2代hUC-MSCs高表達(dá)間充質(zhì)干細(xì)胞抗原CD44、CD90、CD105、CD73，HLAABC，而不表達(dá)造血干細(xì)胞抗原CD45、CD34和白細(xì)胞相關(guān)抗原HLA-DR(圖2)。

圖2 hUC-MSCs表面標(biāo)記物的流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果Fig.2 hUC-MSCs surface markers detected by flow cytometry

2.3 細(xì)胞增殖能力 MTT法檢測顯示：10×10－6mol/L的apelin-13可促進(jìn)hUC-MSCs增殖，但與對照組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義(0.875±0.325vs0.841±0.290，P＞0.05)。

2.4 心肌細(xì)胞表面標(biāo)志物cTnT、GATA-4 mRNA的表達(dá) B、C、D組cTnT mRNA的表達(dá)水平分別是A組的2.09±1.35、5.24±1.30、1.17±0.63倍，C組與B、D組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，而B組與D組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。B、C、D組GATA-4 mRNA的表達(dá)水平分別是A組的2.68±1.18、4.82±0.14、2.14±0.27倍，C組與B、D組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，而B組與D組的表達(dá)差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05，圖3)。

圖3 心肌細(xì)胞表面標(biāo)志物cTnT、GATA-4的mRNA表達(dá)Fig.3 mRNA expression of myocardial cell surface markers, cTnT and GATA-4

2.5 cTnT蛋白免疫組化檢測結(jié)果 cTnT蛋白在實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞有著色，著色位于細(xì)胞質(zhì)，而對照組細(xì)胞未著色(圖4)。

圖4 cTnT蛋白表達(dá)的免疫組化檢測結(jié)果(×200)Fig.4 Expression of cTnT protein detected by immunohistochemisty (×200)

3 討 論

Apelin是孤兒G蛋白耦聯(lián)受體血管緊張素受體1(AT1)相關(guān)受體的內(nèi)源性配體，由Tatemoto等[3]于1998年從牛胃組織提取物中提取并純化，近年研究發(fā)現(xiàn)apelin/APJ信號通路在心血管定向分化中具有極其重要的地位。Gao等[4]研究發(fā)現(xiàn)，骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone mesenchymal stem，BMSCs)向心肌細(xì)胞分化中有APJ受體及其配體apelin表達(dá)，且隨著BMSCs向心肌細(xì)胞的分化，APJ和apelin mRNA呈現(xiàn)出動態(tài)高表達(dá)。Gao等[5]進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)hUC-MSCs與胚胎干細(xì)胞表達(dá)類似水平的APJ及apelin mRNA。Apelin前體肽(preproApelin)含有77個氨基酸，其C末端為特異結(jié)合APJ受體的部位，富含堿性氨基酸殘基，也是翻譯后加工酶修飾剪切的部位，可被肽酶分解成多種相對分子量不同的成熟apelin活性肽，如apelin-36、apelin-17、apelin-13、apelin-12等[6]。近年來研究發(fā)現(xiàn)，apelin/APJ與胚胎心肌分化有關(guān)，外源性給予apelin mRNA可嚴(yán)重影響斑馬魚心肌的分化，表現(xiàn)為CMLC2、Nkx2.5表達(dá)下降[7]。Zeng等[8]研究也發(fā)現(xiàn)，apelin過表達(dá)會造成原腸胚受損，心肌細(xì)胞特異分化破壞，如局部apelin缺乏，則心臟前體細(xì)胞不能到達(dá)特定的生心區(qū)，即胚胎前側(cè)中胚葉區(qū)域，進(jìn)而影響心臟發(fā)育。Wang等[2]在蛋白水平證實(shí)了0.5mmol/L apelin-13可以增強(qiáng)bFGF、activin-A、BMP4誘導(dǎo)人胚胎干細(xì)胞向心肌細(xì)胞分化的能力。

cTnT是心肌細(xì)胞特異性的表面標(biāo)志物，GATA-4是心臟形成過程中必需的劑量依賴性轉(zhuǎn)錄因子，參與調(diào)節(jié)心肌細(xì)胞結(jié)構(gòu)基因和相關(guān)調(diào)控基因的表達(dá)，還可與多種心肌基因調(diào)控區(qū)域結(jié)合，參與心肌細(xì)胞的分化過程。在心臟發(fā)育早期抑制GATA-4的表達(dá)將抑制前心肌細(xì)胞及分化終末期心肌細(xì)胞的發(fā)育，阻斷原始肌管的形成。相反，增加GATA-4表達(dá)將加速心臟的發(fā)育，并明顯增加分化末期搏動的心肌細(xì)胞數(shù)量[9]。本實(shí)驗(yàn)中，誘導(dǎo)分化14d后，實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞GATA-4 mRNA的表達(dá)較對照組明顯增高，但不足之處在于未動態(tài)監(jiān)測多個時間點(diǎn)GATA-4 mRNA的表達(dá)水平。

目前，5-Aza作為一種促使間充質(zhì)干細(xì)胞向心肌細(xì)胞分化的誘導(dǎo)劑已得到確認(rèn)，本研究通過5-Aza聯(lián)合使用不同濃度apelin-13誘導(dǎo)hUC-MSCs向心肌細(xì)胞分化，采用RT-PCR及免疫組化方法檢測心肌細(xì)胞表面標(biāo)志物cTnT和心肌早期轉(zhuǎn)錄因子GATA-4的表達(dá)，結(jié)果提示hUC-MSCs細(xì)胞均已向心肌定向分化，并表達(dá)心肌特異性蛋白cTnT。加入不同濃度apelin-13后cTnT、GATA-4 mRNA的表達(dá)均明顯高于對照組。Zeng等[8]研究結(jié)果提示，apelin mRNA過表達(dá)和缺乏均影響心臟發(fā)育，表明合適濃度的apelin才會促進(jìn)心臟前體細(xì)胞到達(dá)生心區(qū)促進(jìn)心臟發(fā)育。本研究結(jié)果顯示，3個不同apelin-13濃度組中，2×10－6mol/L apelin-13促進(jìn)5-Aza誘導(dǎo)hUC-MSCs向心肌細(xì)胞分化的能力最強(qiáng)，與Zeng等的觀點(diǎn)一致。Wang等[2]在實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，0.1×10－6、0.5×10－6mol/L的apelin-13分別是促進(jìn)鼠、人胚胎干細(xì)胞向心肌分化的最合適濃度，與本實(shí)驗(yàn)的最優(yōu)濃度2×10－6mol/L有差別，說明不同的細(xì)胞以及不同的培養(yǎng)體系中apelin-13的最優(yōu)濃度存在差異，這可能與apelin影響心肌分化的機(jī)制有關(guān)。首先apelin作為趨化因子，可招募和增強(qiáng)心臟中胚層祖細(xì)胞聚集，Scott等[7]研究表明，過多或過少的apelin表達(dá)都會擾亂內(nèi)源性趨化因子梯度，進(jìn)而導(dǎo)致心臟祖細(xì)胞遷移失敗。其次，apelin/APJ可能是以自分泌的形式參與心肌形成的[3-4]。Ashley等[10]發(fā)現(xiàn)小鼠胚胎心肌中有apelin/APJ mRNA和蛋白表達(dá)，且其表達(dá)貫穿心臟發(fā)育的全過程，而在成體小鼠心肌中只有APJ的表達(dá)，提示不同來源的間充質(zhì)干細(xì)胞可能自分泌不同量的apelin參與心肌形成。D'Aniello等[11]的研究提示apelin/APJ信號通路作為Cripto/Smad2下游的效應(yīng)因子，通過激活細(xì)胞外調(diào)控激酶(ERK)調(diào)控心肌細(xì)胞特異分化。但是目前apelin影響心肌細(xì)胞分化的具體機(jī)制仍未闡明。

為探討較高濃度的apelin-13對hUC-MSCs是否有毒性作用，本研究采用10×10－6mol/L apelin-13處理細(xì)胞24h，并用MTT法檢測細(xì)胞在570nm處的A值，結(jié)果表明該濃度的apelin-13對細(xì)胞無毒性作用，為此后用2×10－6mol/L的apelin-13聯(lián)合5-Aza誘導(dǎo)hUC-MSCs向心肌細(xì)胞分化提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

綜上所述，10×10－6mol/L apelin-13對hUCMSCs無明顯毒性作用，一定濃度的apelin-13蛋白可促進(jìn)5-Aza誘導(dǎo)華通膠間充質(zhì)干細(xì)胞向心肌細(xì)胞的分化，濃度為2×10－6mol/L時促進(jìn)作用最明顯。

再生醫(yī)學(xué)可從根本上改善缺血性心臟病的預(yù)后，而心臟再生醫(yī)學(xué)不僅需要尋求誘導(dǎo)干細(xì)胞向心肌細(xì)胞定向分化的關(guān)鍵因子，還需要選擇具有臨床應(yīng)用前景的種子細(xì)胞。hUC-MSCs是一種明顯較骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞更原始、增殖分化潛能更強(qiáng)、介于成體與胚胎干細(xì)胞之間的原始干細(xì)胞，且其能分泌表達(dá)APJ及apelin mRNA。因此，進(jìn)一步研究apelin對hUC-MSCs向心肌細(xì)胞分化的影響及其機(jī)制，具有重要臨床意義。

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Influence of apelin-13 on 5-azacytidine inducing differentiation of umbilical cord mesenchymal stem cells to cardiomyocytes

XU Xiao-hong1, WANG Li2, ZHANG Ning-kun2, ZHENG Nan2, GAO Liao-ru2, ZHU Zhi-ming2*
1Affiliated Clinical Faculty of Navy General Hospital, Anhui Medical University, Beijing 100048, China
2Department of Cardiology, Navy General Hospital, Beijing 100048, China
*

, E-mail: xujilong18@126.com
This work was supported by the National Natural Science Foundation of China (81170094)

ObjectiveTo explore the influence of apelin-13 on 5-azacytidine (5-Aza) inducing differentiation of human umbilical cord mesenchymal stem cells (hUC-MSCs) to cardiomyocytes. MethodshUC-MSCs were cultivated by tissue adherent method, and subcultured after digested with trypsin. The second passage cells (P2) were cultured for 14 days with different concentrations of apelin-13 (0, 1×10–6mol/L, 2×10–6and 10×10–6mol/L apelin-13, called as group A, B, C and D respectively), and the concentration of 5-Aza was 10×10–6mol/L in each group. Immune markers on the surface of hUC-MSCs were detected by flow cytometry, the absorbance (Avalue) of cultured cells at 570nm was detected by MTT method, the mRNA expression levels of troponin T (cTnT) and GATA-4 were determined by RT-PCR, and the expression of cTnT (myocardial cell surface marker) was observed by immunohistochemistry.ResultsHUC-MSCs expressed CD44, CD90, CD105, CD73 and HLA-ABC, but did not express CD34, CD45 or HLA-DR. TheAvalue at 570nm of hUC-MSCs treated with 10×10–6mol/L apelin-13 was 0.875±0.325 and similar to that of hUC-MSCs treated with 0 mol/L apelin-13 (0.841±0.290,P＞0.05). The expression levels of cTnT mRNA and GATA-4 mRNA in groups B, C and D were 2.09±1.35, 5.24±1.30 and 1.17±0.63 and 2.68±1.18, 4.82±0.14 and 2.14±0.27times those in group A. The expression levels of cTnT and GATA-4 mRNA in group C were significantly higher than those in groups B and D (P＜0.05). Immunohistochemical staining showed cTnT protein was positively expressed in group C after induction for 14 days.ConclusionsThere is no toxic effects of apelin-13 at concentration of 10×10–6mol/L on hUC-MSCs. Certain concentrations of apelin-13 could promote the 5-Aza inducing differentiation of hUC-MSCs to cardiomyocytes, especially at 2×10–6mol/L.

umbilical cord; mesenchymal stem cells; myocardium; cell differentiation; apelin-13; 5-azacytidine

R542.22

A

0577-7402(2013)10-0796-05

10.11855/j.issn.0577-7402.2013.10.003

2013-05-17；

2013-06-24)

(責(zé)任編輯：張小利)

國家自然科學(xué)基金(81170094)

徐小紅，碩士研究生。主要從事干細(xì)胞的基礎(chǔ)與臨床研究

100048 北京 安徽醫(yī)科大學(xué)解放軍海軍臨床學(xué)院(徐小紅)；100048 北京 海軍總醫(yī)院心臟中心(王力、張寧坤、鄭楠、高連如、朱智明)

朱智明，E-mail：xujilong@126.com