楊 平，李潤(rùn)國(guó)，孟憲軍*

(1.沈陽(yáng)師范大學(xué)糧食學(xué)院，遼寧 沈陽(yáng) 110034；2.沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)食品學(xué)院，遼寧 沈陽(yáng) 110161)

刺五加苷是從刺五加中提取的天然活性成分之一，是由糖或糖衍生物的半縮醛羥基與另一非糖物質(zhì)中的羥基以縮醛鍵(苷鍵)脫水縮合而成的環(huán)狀縮醛衍生物，從刺五加葉中分離出以齊墩果酸為配基或在齊墩果烷型配基上連有單糖鏈或雙糖鏈的13種三萜皂苷[1]，多以刺五加苷B和E作為其提取物標(biāo)準(zhǔn)[2]。有研究報(bào)道，刺五加苷具有提高血漿地高辛水平[3]，對(duì)抗睡眠剝奪能引起動(dòng)物學(xué)習(xí)記憶能力的降低[4]、延緩衰老[5]、減肥[6]等多種生物學(xué)作用，對(duì)人體肝、腎功能無負(fù)面影響[7]，在全球范圍內(nèi)廣泛應(yīng)用。目前未見有刺五加苷的系統(tǒng)毒性研究報(bào)道，為促進(jìn)刺五加苷資源的合理開發(fā)利用，本研究對(duì)刺五加苷進(jìn)行了急性毒性實(shí)驗(yàn)、遺傳毒性實(shí)驗(yàn)、30d喂養(yǎng)實(shí)驗(yàn)的研究。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

刺五加苷(HPLC測(cè)定刺五加苷B+E≥0.8%)購(gòu)于湖南九匯現(xiàn)代中藥有限公司，為棕色粉末，灌胃時(shí)用蒸餾水配制各劑量的濃度，充分混勻后作為受試樣品。

注射用環(huán)磷酰胺、順鉑 通化茂祥制藥有限公司；小牛血清 上海銳聰科技發(fā)展有限公司；無水乙醇(分析純)、冰醋酸(分析純) 重慶川東化工有限公司；二甲基亞砜(DMSO)、伊紅、Giemsa 北京西美杰科技有限公司；阿的平、2-氨基芴、NaN3、甲基甲烷磺酸酯(均為分析純) 美國(guó)Sigma公司。

1.2 動(dòng)物與菌株

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物由中國(guó)科學(xué)院上海實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，SD大鼠和昆明種小鼠(SCXK(滬)2007-0005)，SD大鼠體質(zhì)量為200～300g，昆明種小鼠體質(zhì)量為18～22g，實(shí)驗(yàn)前均在實(shí)驗(yàn)室預(yù)飼養(yǎng)1周，自由進(jìn)食普通標(biāo)準(zhǔn)飼料和蒸餾水，實(shí)驗(yàn)室溫度(24±2)℃，相對(duì)濕度(50±20)%，自然光照。菌株TA97、TA98、TA100、TA102由遼寧省疾病預(yù)防控制中心提供，生物學(xué)性狀經(jīng)鑒定合格。

1.3 儀器與設(shè)備

CX21FS1生物顯微鏡 日本Olympus公司；Bp-3100s分析天平 薩多利斯公司；CL8000全自動(dòng)生化儀 日本島津公司；CD3700 血液分析儀 美國(guó)Cell-DYN公司；Mikro-22臺(tái)式離心機(jī) 德國(guó)Hettich公司；HM340E切片機(jī)、HMP110脫水機(jī)、AP280包埋機(jī)、HMS70染色機(jī) 德國(guó)蔡司公司；GNP-9270型隔水式恒溫培養(yǎng)箱 上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司。

1.4 方法

1.4.1 急性毒性實(shí)驗(yàn)[8]

預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明昆明種小鼠的接受劑量超過25000mg/kg，因此本實(shí)驗(yàn)選取20只昆明種小鼠，雌雄各10只，同性別小鼠之間體質(zhì)量之差不超過3g，按30000mg/kg劑量一次性灌胃，給藥后雌雄小鼠分籠正常飼養(yǎng)，每天觀察小鼠的一般狀態(tài)、中毒癥狀和死亡情況等，觀察期為2周。

1.4.2 骨髓細(xì)胞微核實(shí)驗(yàn)[9]

將昆明種小鼠隨機(jī)分為5組，分別為刺五加苷3個(gè)劑量組(10000、5000、2500mg/kg)、蒸餾水陰性對(duì)照組、環(huán)磷酰胺(40mg/kg)陽(yáng)性對(duì)照組，每組10只，雌雄各半。采用30h兩次灌胃法，按0.4mL/20g灌胃(以體質(zhì)量計(jì))。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，頸椎脫臼處死該組小鼠，取其胸骨骨髓用小牛血清稀釋后進(jìn)行涂片、固定、Giemsa染色，每只小鼠計(jì)數(shù)5000個(gè)嗜多染紅細(xì)胞。

1.4.3 精子畸形實(shí)驗(yàn)[10]

將昆明種小鼠隨機(jī)分為5組，每組5只，分別作為樣品高、中、低3個(gè)劑量組(10000、5000、2500mg/(kg·d))及蒸餾水陰性對(duì)照組和環(huán)磷酰胺(40mg/kg)陽(yáng)性對(duì)照組。實(shí)驗(yàn)中各組小鼠每日1次，連續(xù)5d灌胃，于首次給樣35d后，頸椎脫臼處死動(dòng)物，取二側(cè)副睪放入生理鹽水中，剪碎，4層過濾，取濾液涂片，固定，2%伊紅染色制片。每鼠鏡檢觀察5000個(gè)精子的畸形數(shù)，計(jì)算精子畸形率。

1.4.4 Ames實(shí)驗(yàn)[11]

Ames實(shí)驗(yàn)設(shè)5000、2500、1250、625、312.5μg/皿5個(gè)刺五加苷劑量組。另設(shè)自然回變對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組，用Ames實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)菌株TA97、TA98、TA100和TA102。在有和沒有肝S9混合液的條件下，分別對(duì)上述5個(gè)刺五加苷劑量做平板摻入法Ames實(shí)驗(yàn)。各菌株每劑量做3個(gè)平行皿，每皿加菌樣0.1mL。培養(yǎng)48h，記錄各皿中回變菌落數(shù)量，陽(yáng)性對(duì)照用DMSO作溶劑。

1.4.5 30d喂養(yǎng)實(shí)驗(yàn)[12]

將SD大鼠隨機(jī)分為陰性對(duì)照組和3個(gè)劑量組，每組10只，雌雄各半，3個(gè)劑量組分別為1.5、3、6g/(kg·d)刺五加苷灌胃。按樣品人體推薦劑量為12g/(60kg·d)，相當(dāng)于人體推薦劑量的25、50、100倍。灌胃容量為20mL/kg，每天受試物一次灌胃，對(duì)照組灌胃等量蒸餾水，連續(xù)30d。大鼠自由進(jìn)食、水，每天觀察并記錄動(dòng)物的一般表現(xiàn)，每周稱量一次動(dòng)物體質(zhì)量，連續(xù)喂養(yǎng)30d。禁食12h后，逐只稱大鼠體質(zhì)量，乙醚麻醉后，腹主動(dòng)脈取血進(jìn)行血清學(xué)、生化學(xué)檢查，大體解剖肉眼觀察有無明顯病變，取腦、胸腺、心、肝、脾、腎等臟器進(jìn)行稱質(zhì)量，計(jì)算臟體比，進(jìn)行組織病理學(xué)檢查。

1.5 數(shù)據(jù)處理

對(duì)骨髓細(xì)胞微核實(shí)驗(yàn)和精子畸形實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行卡方檢驗(yàn)，對(duì)大鼠30d喂養(yǎng)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 急性毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果

表1 刺五加苷經(jīng)口急性毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果Table 1 Acute toxicity test of eleutheroside in mice

由表1可見，大、小鼠經(jīng)空腹灌胃后，觀察14d，實(shí)驗(yàn)期間各組小鼠活動(dòng)正常，毛色正常，未見任何中毒癥狀和死亡。到期處死動(dòng)物，解剖后肉眼觀察各臟器情況，未見異常。雌、雄小鼠急性經(jīng)口MTD均大于30g/kg，其劑量相當(dāng)于人體推薦的750倍。結(jié)果表明，刺五加苷屬實(shí)際無毒級(jí)。

2.2 骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核實(shí)驗(yàn)結(jié)果

表2 刺五加苷對(duì)小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核發(fā)生率的影響(±s，n＝5)Table 2 Effect of eleutheroside on marrow micronucleus rate in mice(±s，n＝5)

表2 刺五加苷對(duì)小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核發(fā)生率的影響(±s，n＝5)Table 2 Effect of eleutheroside on marrow micronucleus rate in mice(±s，n＝5)

注：*.與陰性對(duì)照組相比，有顯著性差異(P＜0.05)；**.與陰性對(duì)照組相比，有極顯著性差異(P ＜0.01)。

細(xì)胞數(shù) 微核率/‰ 微核率P值 嗜多染紅細(xì)胞/正染紅細(xì)胞(PCE/NCE)陰性對(duì)照組 雌性500061.33±0.520.92±0.04雄性500051.01±0.041.04±0.08陽(yáng)性對(duì)照組 雌性5000145** 29.07±1.42*＜0.010.94±0.09雄性5000143** 28.71±1.74*＜0.011.07±0.12刺五加苷低劑量組組別 性別 受檢細(xì)胞數(shù)微核雌性500061.33±0.52＞0.051.01±0.09雄性500040.80±0.19＞0.050.95±0.04刺五加苷中劑量組雌性500051.40±0.55＞0.050.91±0.05雄性500061.33±0.52＞0.050.93±0.05刺五加苷高劑量組雌性500051.40±0.55＞0.051.06±0.07雄性500040.80±0.28＞0.050.89±0.06

由表2可知，微核實(shí)驗(yàn)中各刺五加苷實(shí)驗(yàn)劑量條件下，嗜多染紅細(xì)胞(PCE)微核率、PCE/NCE與陰性對(duì)照組的差異均無顯著性，而陽(yáng)性對(duì)照組顯示強(qiáng)烈的致突變作用。因此，刺五加苷在各實(shí)驗(yàn)劑量條件下對(duì)小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核發(fā)生率都沒有顯著影響，顯微鏡觀察見圖1。

圖 1 刺五加苷對(duì)小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核影響的顯微鏡觀察(×1000)Fig.1 Effect of eleutheroside on mouse marrow micronucleus (×1000)

2.3 精子畸形實(shí)驗(yàn)結(jié)果

表3 刺五加苷對(duì)小鼠精子畸形發(fā)生率的影響(±s，n＝5)Table 3 Effect of eleutheroside on sperm abnormality rate in mice (±s，n＝5)

表3 刺五加苷對(duì)小鼠精子畸形發(fā)生率的影響(±s，n＝5)Table 3 Effect of eleutheroside on sperm abnormality rate in mice (±s，n＝5)

注：**.與陰性對(duì)照組相比，有極顯著性差異(P＜0.01)；﹟﹟.與陽(yáng)性對(duì)照組相比，有極顯著性差異(P＜0.01)。

畸形率/‰P無鉤 香蕉形 胖頭 無定形尾折疊雙頭 雙尾陰性對(duì)照組50002105400057 11.4±1.7﹟﹟陽(yáng)性對(duì)照組5000735181562424246 49.2±4.6**＜0.01刺五加苷低劑量組 50000114901052 10.4±1.4﹟﹟ ＞0.05刺五加苷中劑量組 50000015200053 10.6±1.9﹟﹟ ＞0.05刺五加苷高劑量組 50000005800058 11.6±2.3﹟﹟ ＞0.05組別 受檢精子數(shù)畸形類型數(shù) 畸變精子數(shù)

由表3 可知，陰性對(duì)照組小鼠的精子畸形率為11.4‰，陽(yáng)性對(duì)照組的精子畸形率為49.2‰，兩組精子畸形發(fā)生率差異具有顯著性；而3個(gè)劑量刺五加苷組精子畸形率分別為10.4‰、10.6‰、11.6‰，與陰性對(duì)照組比都沒有顯著性差異，但顯著低于陽(yáng)性對(duì)照組。因此，刺五加苷在本實(shí)驗(yàn)劑量條件下不會(huì)誘發(fā)精子畸變，顯微鏡觀察結(jié)果見圖2。

圖 2 刺五加苷對(duì)小鼠精子畸形的影響 (×400)Fig.2 Effect of eleutheroside on sperm abnormality (×400)

2.4 Ames實(shí)驗(yàn)結(jié)果

表4 刺五加苷Ames結(jié)果(±s)Table 4 Ames test of eleutheroside(±s)

表4 刺五加苷Ames結(jié)果(±s)Table 4 Ames test of eleutheroside(±s)

注：**.與溶劑對(duì)照組相比，有顯著性差異(P＜0.01)。

S9(－)S9(+)S9(－)S9(+)S9(－)S9(+)S9(－)S9(+)溶劑對(duì)照組176±9178±1249±546±4179±11194±40249±11235±15自然回變組179±6173±1146±648±6175±8197±6268±10258±6 5000μg185±7180±1445±349±5193±14182±9262±12267±6 2500μg183±9183±948±846±3185±8180±6282±9284±12 1250μg168±15167±644±145±6186±12179±11293±36294±34 625μg175±12177±2242±546±3179±10182±10301±53276±32 312.5μg168±10154±1246±345±6181±13186±12307±30278±15組別陽(yáng)性對(duì)照組2593±294** 1646±164** 1815±237** 3464±351** 2345±97** 2597±267** 2137±84** 2459±258**(阿的平(10μg/皿))(2-氨基芴(10μg/皿))(NaN3(1μg/皿))(2-氨基芴(10μg/皿))(甲基甲烷磺酸酯(1μL/皿))(2-氨基芴(10μg/皿))(甲基甲烷磺酸酯(1μL/皿))(順鉑(25μg/皿))

由表4可知，自然回變組、溶劑對(duì)照組菌落數(shù)均在正常范圍，每劑量實(shí)驗(yàn)組的菌株回變菌落數(shù)均未超過自然回變菌落數(shù)的2倍，亦無劑量-反應(yīng)關(guān)系；陽(yáng)性對(duì)照組超過自然回變菌落數(shù)的2倍以上；在有無S9條件下，各劑量刺五加苷組對(duì)4個(gè)菌株誘發(fā)的回變菌落數(shù)均未超過對(duì)照組2倍。Ames實(shí)驗(yàn)為陰性結(jié)果，刺五加苷對(duì)鼠傷寒沙門氏菌無直接和間接致突變作用。

2.5 30d喂養(yǎng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.5.1 刺五加苷對(duì)大鼠體質(zhì)量的影響

表5 刺五加苷對(duì)大鼠體質(zhì)量的影響(±s，n＝5)Table 5 Effect of eleutheroside on body mass of rats (±s，n＝5) g

表5 刺五加苷對(duì)大鼠體質(zhì)量的影響(±s，n＝5)Table 5 Effect of eleutheroside on body mass of rats (±s，n＝5) g

組別 性別 初始質(zhì)量 第7天 第14天 第21天 第28天 第30天陰性對(duì)照組 雌性201.5±9.12 216.8±8.2 235.5±7.6 252.5±4.8 277.3±5.4 283.5±8.4雄性209.5±7.79 224.8±20.9 242.8±15.6 270.5±12.7 296.6±18.5 310.4±12.4刺五加苷低劑量組雌性206.5±12.2 223.3±16.1 242.1±20.3 262.9±20.7 285.5±18.3 289.3±20.3雄性216.5±12..2 243.3±22.4 262.1±23.5 262.9±19.4 285.5±17.6 290.3±20.3刺五加苷中劑量組雌性206.5±14.1 223.3±24.0 242.1±22.5 262.9±20.5 285.5±16.7 296.3±21.2雄性209.2±19.1 226.2±27.4 248.1±22.2 265.0±14.8 289.0±21.4 301.0±21.7刺五加苷高劑量組雌性208.6±22.3 217.1±22.3 237.7±24.5 255.0±21.6 279.4±20.9 289.3±20.3雄性210.2±21.7 236.2±22.4 258.1±22.3 275.0±20.6 299.0±22.4 305.0±23.0

由表5可知，不同劑量刺五加苷組喂食大鼠30d后，大鼠毛發(fā)正常，無異常行為，無死亡。各劑量刺五加苷組大鼠體質(zhì)量和體質(zhì)量的變化率與陰性對(duì)照組比較都無顯著差異。

2.5.2 刺五加苷對(duì)大鼠臟器系數(shù)的影響

表6 刺五加苷對(duì)大鼠臟器質(zhì)量的影響(±s，n＝5)Table 6 Effect of eleutheroside on organ index of rats (±s，n＝5) g/100g

表6 刺五加苷對(duì)大鼠臟器質(zhì)量的影響(±s，n＝5)Table 6 Effect of eleutheroside on organ index of rats (±s，n＝5) g/100g

組別 性別 腦 胸腺 心 肝 脾 腎陰性對(duì)照組雌性0.48±0.03 0.07±0.01 0.27±0.04 2.67±0.19 0.17±0.02 0.58±0.06雄性0.49±0.04 0.08±0.02 0.26±0.01 2.78±0.18 0.23±0.03 0.57±0.03刺五加苷低劑量組雌性0.57±0.08 0.11±0.03 0.35±0.041 2.89±0.19 0.26±0.01 0.57±0.07雄性0.67±0.05 0.10±0.01 0.32±0.02 2.57±0.20 0.27±0.02 0.76±0.04刺五加苷中劑量組雌性0.73±0.04 0.11±0.01 0.28±0.02 2.72±0.17 0.27±0.01 0.65±0.04雄性0.52±0.09 0.09±0.01 0.32±0.03 2.44±0.09 0.28±0.02 0.71±0.09刺五加苷高劑量組雌性0.47±0.02 0.07±0.01 0.29±0.02 2.73±0.19 0.21±0.02 0.66±0.02雄性0.49±0.04 0.06±0.02 0.25±0.01 2.79±0.14 0.22±0.01 0.62±0.05

由表6可知，刺五加苷喂食大鼠30d后，各劑量組雌、雄大鼠肝、腎、脾、睪丸和卵巢器官質(zhì)量/體質(zhì)量系數(shù)與陰性對(duì)照組比較均無顯著差異。對(duì)大鼠的肝、腎、脾、睪丸和卵巢進(jìn)行解剖發(fā)現(xiàn)，上述器官外觀顏色、大小均正常，未見明顯萎縮、水腫、滲出、增生等病變，未見有明顯中毒性病理改變。

2.5.3 對(duì)大鼠血常規(guī)指標(biāo)的影響

表7 刺五加苷對(duì)大鼠血常規(guī)指標(biāo)的影響(±s)Table 7 Effect of eleutheroside on blood cells in rats (±s)

表7 刺五加苷對(duì)大鼠血常規(guī)指標(biāo)的影響(±s)Table 7 Effect of eleutheroside on blood cells in rats (±s)

血小板數(shù)目/(109個(gè)/L)陰性對(duì)照組5.38±1.24 7.31±0.29 152.00±6.89 43.43±1.29 58.07±1.13 899.63±77.59刺五加苷低劑量組 6.33±0.68 7.04±0.47 148.38±3.66 42.31±2.14 58.43±1.49 913.50±37.89刺五加苷中劑量組 6.17±0.92 6.74±0.84 147.71±3.99 41.87±2.40 58.23±1.45 921.43±56.74刺五加苷高劑量組 5.99±1.05 7.23±0.56 147.89±3.30 41.72±1.61 58.17±1.33 901.22±57.17組別 白細(xì)胞數(shù)/(109個(gè)/L)紅細(xì)胞數(shù)/(1012個(gè)/L)血紅蛋白質(zhì)量濃度/(g/L)平均紅細(xì)胞體積/(10－7L)紅細(xì)胞壓積/%

由表7可知，各實(shí)驗(yàn)組血常規(guī)指標(biāo)檢驗(yàn)結(jié)果與陰性對(duì)照組相比均無顯著差異。表明刺五加苷對(duì)大鼠血液生化指標(biāo)無明顯影響。

2.5.4 對(duì)大鼠血清生化指標(biāo)的影響

表8 刺五加苷對(duì)大鼠血清生化指標(biāo)的影響(±s)Table 8 Effect of eleutheroside on biochemical properties of rat serum (±s) nmol/L

表8 刺五加苷對(duì)大鼠血清生化指標(biāo)的影響(±s)Table 8 Effect of eleutheroside on biochemical properties of rat serum (±s) nmol/L

組別 谷丙轉(zhuǎn)氨酶 谷草轉(zhuǎn)氨酶 總蛋白 白蛋白 球蛋白 血肌酐 血尿酸陰性對(duì)照組35.86±2.67 112.00±11.36 69.30±3.06 37.42±1.94 33.89±3.99 62.00±4.34 169.50±15.78刺五加苷低劑量組 35.50±3.78 113.00±11.31 70.85±6.41 35.96±1.02 32.33±2.81 59.25±5.57 161.13±12.77刺五加苷中劑量組 36.17±3.37 136.50±4.43 68.50±3.18 35.93±1.32 31.50±3.25 53.25±9.27 159.00±27.11刺五加苷高劑量組 37.80±1.64 123.00±6.25 66.82±2.88 41.10±9.56 31.56±1.78 55.30±9.66 157.50±20.63

由表8可知，雌、雄大鼠的對(duì)照組空白和各劑量組血液生化指標(biāo)，谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、總蛋白、白蛋白、球蛋白、血肌酐、血尿酸與陰性對(duì)照組相比無明顯異常改變。結(jié)果表明，刺五加苷對(duì)大鼠血液生化指標(biāo)無明顯影響。

3 討 論

刺五加是五加科刺五加屬的落葉灌木，作為第3代果品，化學(xué)成分多樣，營(yíng)養(yǎng)成分豐富。刺五加苷B和E可以被大鼠腸道菌群代謝[13]，在免疫調(diào)節(jié)、抗疲勞、中樞神經(jīng)系統(tǒng)及心血管方面的生物活性較為顯著，具有增強(qiáng)血管性癡呆大鼠的學(xué)習(xí)、記憶能力[14]，增強(qiáng)免疫功能和促誘生干擾素的能力[15]，對(duì)癌細(xì)胞有一定的抑制作用[16]。隨著對(duì)刺五加應(yīng)用的不斷擴(kuò)展，較大量攝入刺五加苷的安全性受到研究者的關(guān)注。本研究依照《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》[17]的規(guī)定，刺五加苷的急性毒性結(jié)果須滿足動(dòng)物未現(xiàn)死亡劑量≥10g/kg(即涵蓋人體推薦量的100倍)，才能進(jìn)行第2階段毒理學(xué)研究。本實(shí)驗(yàn)中刺五加苷第1階段急性毒性實(shí)驗(yàn)小鼠雌、雄兩性MTD均大于20g/kg，其劑量相當(dāng)于人體用量1.67g/kg，人體推薦用量1000倍，屬實(shí)際無毒級(jí)，因而可以進(jìn)入第2階段毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)。刺五加苷第2階段毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)主要進(jìn)行了遺傳毒性實(shí)驗(yàn)和30d喂養(yǎng)實(shí)驗(yàn)。遺傳毒性實(shí)驗(yàn)進(jìn)行小鼠骨髓細(xì)胞微核實(shí)驗(yàn)、小鼠精子畸形實(shí)驗(yàn)和Ames實(shí)驗(yàn)，從三方面探討了刺五加苷的遺傳毒性，其3項(xiàng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果均為陰性，表明刺五加苷在實(shí)驗(yàn)條件下對(duì)小鼠無遺傳毒性。30d喂養(yǎng)實(shí)驗(yàn)通過高中低劑量刺五加苷每天灌胃，觀察其對(duì)大鼠引起有害效應(yīng)的劑量、毒作用性質(zhì)和靶器官，估計(jì)亞慢性攝入的危害性，并可初步估計(jì)其最大無作用劑量。結(jié)果表明，刺五加苷對(duì)雌、雄大鼠的體質(zhì)量、臟體比、血常規(guī)、血清生化指標(biāo)均無明顯影響，腦、胸腺、心、肝、脾、腎均未見明顯病理組織學(xué)改變，其最大無作用劑量為6g/kg，相當(dāng)于人體推薦劑量的100倍。從毒理學(xué)角度看，刺五加苷在實(shí)驗(yàn)劑量范圍內(nèi)無急性毒性，無遺傳毒性，長(zhǎng)期食用對(duì)人無害，可以作為保健食品進(jìn)行相關(guān)功能研究。

[1] 涂正偉, 周渭渭, 單淇, 等. 刺五加的研究進(jìn)展[J]. 藥物評(píng)價(jià)研究, 2011, 34(3)： 213-216.

[2] DONOVAN J L, DEVANE C L, CHAVIN K D, et al. Siberian ginseng (Eleutheroccus senticosus) effects on CYP2D6 and CYP3A4 activity in normal volunteers[J]. Drug Metab Dispos, 2003, 31(5)： 519-522.

[3] GAFFNEY B, HUGEL H, RICH P. The effects of Eleutherococcus senticosus and Panax ginseng on steroidal hormone indices of stress and lymphocyte subset numbers in endurance athletes[J]. Life Sci, 2001, 70： 431-442.

[4] 張茹, 李廷利, 劉曉巖, 等. 刺五加對(duì)睡眠剝奪大鼠學(xué)習(xí)記憶及海馬LTP的影響[J]. 中藥藥理與臨床, 2011(1)： 63-66.

[5] 孟憲軍, 楊平, 張麗. 刺五加苷對(duì)D-半乳糖致衰老模型大鼠免疫功能的實(shí)驗(yàn)研究[J]. 中國(guó)老年學(xué)雜志, 2010(2)： 216-218.

[6] PODDAR K, KOLGE S, BEZMAN L, et al. Invited reviews： nutraceutical supplements for weight loss： a systematic review[J]. Nutr Clin Pract, 2011, 26(8)： 539-552.

[7] KUO J, YANG H C, CHENG I S, et al. Supplementation of eleutherococcus senticosus (CIWUJIA) on anti-fatigue function in human[C]//The 18th International Congress of Nutrition in South Africa. 2005, 11： 19-23.

[8] 中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部. GB 15193.3—2003 急性毒性實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)[S]. 北京： 人民衛(wèi)生出版社, 2003.

[9] 中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部. GB 15193.5—2003骨髓細(xì)胞微核實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)[S]. 北京： 人民衛(wèi)生出版社, 2003.

[10] 中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部. GB 15193.4—2003 小鼠精子畸形實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)[S]. 北京： 人民衛(wèi)生出版社, 2003.

[11] 中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部. GB 15193.4—2003 鼠傷寒沙門氏菌哺乳動(dòng)物微粒體酶實(shí)驗(yàn)[S]. 北京： 中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社, 2003.

[12] 中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部. GB15193.13—2003食品安全性毒理學(xué)評(píng)價(jià)程序30天和90天喂養(yǎng)實(shí)驗(yàn)[S]. 北京： 中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社, 2003.

[13] 劉樹民, 楊補(bǔ)科, 盧芳, 等. 刺五加苷B、苷E在體外大鼠腸道菌群中的代謝[J]. 中國(guó)藥師, 2011, 14(8)： 1075-1081.

[14] 曲紹春, 于曉風(fēng), 梁?jiǎn)⒚? 等. 刺五加葉皂苷對(duì)實(shí)驗(yàn)性血管性癡呆大鼠學(xué)習(xí)、記憶及病理?yè)p傷的保護(hù)作用[J]. 吉林大學(xué)學(xué)報(bào)： 醫(yī)學(xué)版, 2011, 37(3)： 465-469.

[15] DASGUPTA A, MEREDITH A. Effect of Brazilian, Indian, Siberian, Asian, and North American ginseng on serum digoxin measurement by immunoassays and binding of digoxin-like immunoreactive components of ginseng with fab fragment of antidigoxin antibody (digibind) reyes[J]. Am J Clin Pathol, 2005, 124(8)： 229-236.

[16] MCCULLOCH M, BROFFMAN M, van der LAAN M, et al. Lung cancer survival with herbal medicine and vitamins in a whole-systems approach： ten-year follow-up data analyzed with marginal structural models and propensity score methods[J]. Colford Integr Cancer Ther, 2011, 10(9)： 260-279.

[17] 中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部. 保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范[M]. 北京： 人民衛(wèi)生出版社, 2003.