許興超 劉春希 許 靜 張曉薇 盧憲齊 楊志孝 張敬軍

(1.泰山醫(yī)學院，山東 泰安 271000;2.棗莊市中醫(yī)醫(yī)院，山東 棗莊 277100;3.萊蕪市中醫(yī)醫(yī)院，山東萊蕪 271100)

近年來，由于社交的需要和生活壓力的增大，酗酒和酒精中毒已經(jīng)成為我國的公共衛(wèi)生問題，因飲酒引起的頭痛、頭暈、惡心、嘔吐、記憶力減退、注意力不集中，導致意外事故發(fā)生率增加，嚴重的甚至導致急性死亡的發(fā)生。在我國應用中草藥解酒具有悠久的歷史，但是利用大棗為主料、以枳椇子［1］、茯苓［2］、馬齒莧［3］、葛根［4］、蜂蜜［5］為輔料配制一種天然的解酒口服液，國內(nèi)外未見研究報道。泰山大棗是泰山三大特產(chǎn)之一，其醫(yī)療價值和保健功效居群果之冠，醫(yī)學界稱之為天然維生素丸。泰山大棗在1982年被列為國家保健棗。大棗含有黃酮類、多糖類、皂苷類、多種維生素和礦物質(zhì)等活性物質(zhì)，具有解酒毒、護肝、抗脂質(zhì)過氧化等多方面功效［6］。而且枳椇子、茯苓、馬齒莧、葛根、蜂蜜均具有較好的解酒護肝作用。本項研究各成分用材均為泰山當?shù)剡x材，且經(jīng)藥學專家鑒定，無毒副作用，是一種純天然綠色保健品，具有巨大的開發(fā)前景。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 昆明小鼠，體重量(302)g，雌雄各半，購于濟南動物研究所。

1.2 材料與試劑 泰山大棗，采自泰山山麓。枳椇子、茯苓、馬齒莧、葛根購于泰安永春堂藥店。蜂蜜，購于泰安天外村養(yǎng)蜂基地。主要試劑:試劑Ⅰ(由一份NAD溶液和5份pH=9的甘氨酸-NaOH緩沖液組成);乙醇、丁酮(均為色譜純，上海試劑一廠)。兩瓶白酒(泰山特曲38度，泰山酒業(yè)集團股份有限公司)。

1.3 儀器與設(shè)備 賽多利斯BSA822電子天平，賽多利斯科學儀器(北京)有限公司;FW100高速萬能粉碎機，天津泰斯特儀器有限公司;超聲波提取設(shè)備，濟寧市奧波超聲電氣有限公司;DHG-9240型電熱恒溫鼓風干燥箱，上海一恒科技有限公司;電腦程控壓力蒸汽滅菌鍋，長春市百奧生物儀器有限公司;紫外分光光度儀，TU-1901 HP-5890 SeriesⅡ氣相色譜儀，安捷倫公司(Agilent);FID檢測器，福州眾科自動化科技有限公司。

1.4 方法

1.4.1 泰山大棗解酒口服液制備 根據(jù)原料藥性的不同，大棗采用浸提的方法;枳椇子、茯苓、馬齒莧、葛根(查閱大量文獻，以上各種輔料較其他解酒原料均具有較好的解酒效果)采用超聲提取法;蜂蜜可直接采用。大棗提取液的制備［7］:稱取大棗250 g，大棗果實(85℃烘干、粉碎)，2倍重量蒸餾水冷浸提12 h，過濾，1次提取濾液，濾渣用再蒸餾水95℃熱提取1 h，過濾，2次提取濾液，合并兩次提取濾液，各濃縮配制成 0.1 g/ml、0.2 g/ml、0.3 g/ml大棗提取液。枳椇子、茯苓、馬齒莧、葛根混合液的制備［8］:取枳椇子、茯苓、馬齒莧、葛根藥材各250 g，于40℃干燥粉碎，2倍重量蒸餾水采用超聲提取法，控制溫度65℃提取二次，合并濾液，濃縮配制成0.1 g/ml、0.2 g/ml、0.3 g/ml四藥材混合液。蜂蜜可分3 ml、6 ml、9 ml三個水平。見表 1。

表1 泰山大棗解酒口服液配方及濃度

1.4.2 小鼠醉酒試驗驗證泰山大棗解酒口服液成分最佳配比 將大棗提取液、四藥材混合液和蜂蜜利用正交法［9］L9(34)，三因素、三水平梯度得9種復方藥液。取昆明小鼠90只雌雄各半，隨機分為9組，實驗序號為1～9，進行小鼠醉酒試驗。將配好的9種復方藥物按小鼠體重0.1 ml/10g［10］按組別給小鼠灌胃，30 min后再按0.1 ml/10g給小鼠灌胃白酒。通過小鼠醉酒試驗計數(shù)每組醉酒數(shù)量、出現(xiàn)醉酒狀態(tài)的平均醉酒時間、平均醒酒時間等指標來驗證各組分最佳配比以達到最佳解酒效果。

1.4.3 復方藥液在酒前服用和酒后服用實驗 確定好配方最佳用口服液量后，進行給口服液及酒先后實驗。取60只小鼠雌雄各半，隨機分為6組，分別為空白清水組、先水后酒組、先口服液后酒組、口服液酒合用組、先酒后水組、先酒后口服液組，兩次飲用時間間隔為30min。ADH在波長340 nm處有一強吸收峰［11］，通過測定340nm波長處ADH的吸光度，可得知解酒效果。

第二次灌胃30 min后處死小鼠，摘眼球取血0.5 ml［12］，置于 1 ml離心管中 4000 r/s 離心 8 min。取50 μl血清入比色皿，同時加入1 ml試劑Ⅰ以及20 μl乙醇，對照比色皿中加入 50 μl蒸餾水，1 ml試劑Ⅰ以及20 μl乙醇。340 nm波長下，每只樣品5分鐘內(nèi)每一分鐘讀取吸光度，求平均吸光度，得6組吸光度的數(shù)據(jù)，繪制折線圖，比較得最佳用法［13］。

1.4.4 研究給酒前梯度時間給解酒口服液對解酒效果的影響 確定酒前服用解酒口服液為最佳解酒用法后，給酒前梯度時間給復方藥液，利用頂空氣相色譜法［14］測定血液中乙醇含量的指標來確定最佳用藥時間。

實驗取30只小鼠，隨機分為3組。小鼠灌胃解酒口服液0.1 ml/10 g后分別15 min、30 min、45 min后灌胃白酒0.1 ml/10 g，然后30 min小鼠摘眼球取血，加入適量肝素為待測血液。各取乙醇、丁酮100 μl，置于100 ml容量瓶中，新沸蒸餾水稀釋至刻度，得供試品溶液及內(nèi)標溶液。取0.1 ml空白小鼠全血，分別加入0.4、0.8、1.2、1.6、2.0 ml乙醇標準溶液，均加入內(nèi)標溶液1.0 ml，分別滴加重蒸餾水至頂空瓶刻度，以乙醇與內(nèi)標峰面積之比Y與濃度X進行線性回歸計算，得回歸方程:Y=0.1232X+3.1268×10-3，r=0.9994，線性范圍為1.58～15.79 mg/ml。取0.1 ml經(jīng)肝素處理的待測小鼠全血至頂部具塞的頂空管中，精密加入內(nèi)標溶液1.0 ml，滴加重蒸餾水至頂空瓶刻度，于80℃水浴中加熱20 min。用微量注射器抽取100 ul頂端空氣進樣測定［15］。代入回歸方程求得每組10只小鼠血液中乙醇含量，對照3組實驗小鼠血液中乙醇含量，確定酒前飲用解酒口服液最佳時間。

2 結(jié)果

2.1 分別將0.1、0.2、0.3 g/ml的大棗提取液、四藥材混合液及蜂蜜按正交試驗L9(34)配得9種復方藥液。然后進行小鼠醉酒試驗，計數(shù)每組醉酒數(shù)量、出現(xiàn)醉酒狀態(tài)平均醉酒時間、平均醒酒時間，通過正交試驗得出均值和極差［16］。從極差分析可以看出，試驗所設(shè)三個因素對醉酒小鼠解酒的影響順序是:1＞3＞2，即大棗提取液占主要解酒作用。從均值看，以大棗提取液:四藥材混合液:蜂蜜為100 ml(0.2 g/ml)、100 ml(0.2 g/ml)、9 ml組合最佳，見表1。

表2 三種組分的正交試驗L9(34)及9種復方藥液

2.2 進行小鼠醉酒翻正試驗，計數(shù)每組醉酒動物數(shù)、出現(xiàn)醉酒狀態(tài)平均時間、平均醒酒時間等指標也可進一步證明以大棗提取液:四藥材混合液:蜂蜜為100ml(0.2g/ml)、100ml(0.2g/ml)、9ml配成的解酒口服液使小鼠醉酒時間延長，醒酒時間縮短。試驗證明可達最佳解酒效果的組合為大棗提取液:四藥材混合液:蜂蜜為100ml(0.2g/ml):100ml(0.2g/ml):9ml，見表 2。

表3 小鼠醉酒試驗指標

2.3 乙醇代謝過程:乙醇+NDA+NADH+H++乙醛，測得ADH(乙醇脫氫酶)吸光度，即可反映ADH活性，ADH活性越高，乙醇代謝越快，解酒效果越好。將分好的6組小鼠分別設(shè)空白清水組、先水后酒組、先口服液后酒組、口服液酒合用組、先酒后水組、先酒后口服液組?？捎^察出先口服液后酒組，測得小鼠血液中ADH吸光度最高，在0.824左右，即ADH活性最高，乙醇代謝最快，解酒效果最佳，見圖1。

圖1 給口服液、酒先后對血液中ADH活性的影響

2.4 酒前15 min、30 min、45 min按小鼠體重0.1 ml/10g灌胃大棗解酒口服液，然后灌胃白酒0.1 ml/10g，30 min后取血。通過頂空氣相色譜法測血液中乙醇的含量，三組試驗小鼠血液中乙醇分別在0.354 mg/ml、0.548 mg/ml、0.723 mg/ml左右。所以可知酒前30 min灌胃大棗解酒口服液的血液中乙醇含量最低，解酒效果最佳，見圖2。

圖2 酒前梯度時間灌胃大棗解酒口服液血液中乙醇指標的變化

3 討論

酒文化是一種特殊的文化形式，在傳統(tǒng)的中國文化中有其獨特的地位。但若過量飲酒，酒精及其代謝產(chǎn)物對人體造成一定的傷害，引起多種疾病及不良的社會行為。隨著生活水平的提高，人們也越來越關(guān)注自身的健康，所以解酒產(chǎn)品備受關(guān)注。我國中草藥解酒藥物利用已有很長的歷史，積累了豐富的經(jīng)驗，為此項試驗研究提供了豐富依據(jù)。本項試驗先通過正交試驗和小鼠醉酒試驗確定各組分最佳配比;然后進行酒前、酒后灌口服液，測定ADH活性，確定最佳用法;最后進行梯度時間試驗，確定最佳用口服液時間。

本課題通過小鼠醉酒試驗，得每組醉酒數(shù)量、出現(xiàn)醉酒狀態(tài)平均醉酒時間、平均醒酒時間，通過正交試驗得出均值和極差。研究顯示大棗提取液、四藥材混合液、蜂蜜為100 ml(0.2g/ml)、100 ml(0.2g/ml)、9 ml組合配方，可延長小鼠出現(xiàn)醉酒狀態(tài)時間，縮短醒酒時間，為最佳配方。因為酒精在人體中代謝過程為乙醇經(jīng)乙醇脫氫酶脫氫為乙醛，然后乙醛脫氫經(jīng)乙醛脫氫酶脫氫為乙酸。所以將酒前服用、酒后服用口服液以及空白組、對照組小鼠，用紫外分光法測得血液中ADH(乙醇脫氫酶)的活性，即可反映得知乙醇在血液中的代謝情況。研究表明，先口服液后酒組，ADH吸光度最高，可知乙醇代謝最快，此用法可增強肝組織中ADH的活性，提示乙醇可在體內(nèi)快速代謝而發(fā)揮一定的高效解酒作用。實驗用頂空氣相色譜法測酒前梯度時間灌胃大棗解酒口服液小鼠血液中乙醇含量。得知酒前30min飲用泰山大棗解酒口服液后飲酒，可加速血液中乙醇的分解，降低血液中乙醇的含量，可快速有效的解酒，研究中未見明顯不良反應。

研究結(jié)果表明酒前30 min服用該解酒口服液可達到最佳解酒效果。而且產(chǎn)品以泰山大棗為主料，泰山大棗享有“王母棗”、“昆侖棗”、“仙人棗”等美名，更容易讓使用者接受和宣傳。因此以泰山大棗為主料，以枳椇子、茯苓、馬齒莧、葛根、蜂蜜等藥食同源物質(zhì)為輔料配制一種天然的解酒口服液，具有較好的解酒效果，無毒副作用，有較好的市場和發(fā)展前景。

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