李 艷，孫家祥

（德陽市人民醫(yī)院檢驗科，四川 德陽 618000）

血小板不僅在機(jī)體止血和凝血方面發(fā)揮重要作用，近年來研究表明，其相關(guān)參數(shù)的變化還和某些疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，對疾病診療及預(yù)后評估意義重大。血小板計數(shù)目前國內(nèi)廣泛采用乙二胺四乙酸二鉀(EDTA-K2)抗凝劑在血細(xì)胞分析儀上進(jìn)行自動計數(shù)檢測。EDTA-K2對血細(xì)胞計數(shù)影響較小，但有時可誘導(dǎo)血小板聚集粘附，引起EDTA依賴性假性血小板減少癥(PTCP)，致血小板計數(shù)發(fā)生嚴(yán)重誤差，而血細(xì)胞分析儀不能自動識別處理，往往給患者造成不必要的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)甚至嚴(yán)重后果。自Mant1975年首次發(fā)現(xiàn)EDTA-K2可致血小板假性減少以來[1]，國內(nèi)近幾年偶有報道。本文通過對我院發(fā)現(xiàn)的82例PTCP者進(jìn)行分析，以探討選擇科學(xué)的方法排除干擾，保證血小板計數(shù)的準(zhǔn)確性。

1 資料與方法

1.1 一般資料

1.1.1 PTCP組 2012年1～12月共檢測體檢和住院患者85 000個標(biāo)本，約32 000人，發(fā)現(xiàn)血小板聚集導(dǎo)致血小板假性減少并最終確認(rèn)為PTCP者82例。其中男性35例，女性47例，年齡15～76歲，平均(45.5±18.3)歲。

1.1.2 對照組 我院健康體檢者20例，排除心、肝、肺、腎、腦等重要臟器及免疫性疾病，血小板直方圖正常。年齡20～68歲，平均(42.5±16.2)歲。

1.2 儀器與材料 Sysmex-XE2100血細(xì)胞分析儀及配套試劑；Olympus雙目顯微鏡；抗凝劑為EDTA-K2、109 mmol/L枸櫞酸鈉；草酸胺血小板稀釋液[2]；瑞-姬染色液。

1.3 檢測與分析 參照國際自動CBC和DC復(fù)檢規(guī)則[3]與血小板直方圖，對血小板低于70×109/L可疑樣本推片，發(fā)現(xiàn)血小板聚集者，確定為假性血小板減少。排除采血因素及其他原因干擾，對確認(rèn)的82例PTCP用EDTA-K2、枸櫞酸鈉分別抗凝重新抽血送檢，EDTA-K2抗凝管在15 min、1 h及2 h，枸櫞酸鈉抗管凝在15 min以內(nèi)分別用血細(xì)胞分析儀檢測；并同時采末梢血加入草酸胺稀釋液顯微鏡人工計數(shù)。EDTA-K2、枸櫞酸鈉抗凝血每份標(biāo)本涂血片經(jīng)瑞-姬染色觀察血小板分布情況。對照組分別用枸櫞酸鈉、EDTA-K2抗凝抽血，在即刻(0 min)、5 min、15 min、30 min、60 min上機(jī)血小板計數(shù)。所有數(shù)據(jù)為兩次計數(shù)均值。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS11.0軟件包進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計。數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，組間比較采用配對t檢驗，以α=0.05為檢驗水準(zhǔn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 PTCP組EDTA-K2、枸櫞酸鈉抗凝及顯微鏡計數(shù)結(jié)果比較 EDTA-K2抗凝15 min血小板計數(shù)結(jié)果明顯低于枸櫞酸鈉抗凝和顯微鏡計數(shù)結(jié)果(EDTA-K2管與枸櫞酸鈉管比較：t=7.142，P＜0.01；EDTA-K2管與顯微鏡計數(shù)結(jié)果比較：t=7.190，P＜0.01)；1 h及以后結(jié)果更低。枸櫞酸鈉抗凝和顯微鏡計數(shù)結(jié)果比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(t=1.646，P=0.103)，見表1。

表1 PTCP患者EDTA-K2、枸櫞酸鈉抗凝及顯微鏡計數(shù)結(jié)果比較(×109/L，±s)

表1 PTCP患者EDTA-K2、枸櫞酸鈉抗凝及顯微鏡計數(shù)結(jié)果比較(×109/L，±s)

注：與EDTA-K2抗凝管比較，aP＜0.01。

時間(min)15 60 120 EDTA-K2 108±25 65±12 30±11枸櫞酸鈉146±29a顯微鏡計數(shù)145±28a

2.2 對照組血小板計數(shù)結(jié)果 20例健康體檢者EDTA-K2抗凝和枸櫞酸鈉抗凝血小板在15 min以內(nèi)計數(shù)結(jié)果差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，30 min及以后結(jié)果差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。EDTA-K2抗凝標(biāo)本0 min與60 min檢測結(jié)果比較差異無統(tǒng)計意義(t=0.857，P=0.402)，說明枸櫞酸鈉抗凝血血小板在15 min以后不穩(wěn)定逐漸降低，EDTA-K2抗凝標(biāo)本血小板穩(wěn)定，見表2。

表2 20例健康體檢者EDTA-K2、枸櫞酸鈉抗凝劑血小板計數(shù)結(jié)果比較(×109/L，±s)

表2 20例健康體檢者EDTA-K2、枸櫞酸鈉抗凝劑血小板計數(shù)結(jié)果比較(×109/L，±s)

時間(min)051 5 30 60 EDTA-K2 219±49 219±48 218±48 218±49 218±49枸櫞酸鈉218±53 217±53 215±50 195±46 172±35 t值0.68 1.27 1.637 7.447 8.764 P值0.505 0.219 0.118＜0.01＜0.01

2.3 血涂片鏡檢情況 PTCP組EDTA-K2抗凝標(biāo)本血涂片在鏡下可見大量血小聚集或衛(wèi)星現(xiàn)象，隨時間延長聚集加劇，部分成團(tuán)狀。對照組EDTA-K2抗凝標(biāo)本和15 min以內(nèi)枸櫞酸鈉抗凝標(biāo)本血小板散在均勻分布，30 min時枸櫞酸鈉抗凝標(biāo)本有微聚集表現(xiàn)，60 min時可見聚集明顯增加。

3 討論

EDTA致血小板計數(shù)假性減少的機(jī)制目前尚不清楚，其可能與血小板表面存在某種隱匿性抗原有關(guān)，在EDTA作為抗凝劑的前提下，出現(xiàn)免疫介導(dǎo)的血液中冷抗血小板自身抗體的產(chǎn)生[4]，導(dǎo)致血小板聚集。也有可能是某些患者血漿中本身就存在抗血小板抗體、抗心磷脂抗體、自身抗體等因素[5]，EDTA存在時加劇血小板聚集或衛(wèi)星現(xiàn)象的產(chǎn)生，致血細(xì)胞分析儀計數(shù)血小板時減低。宓慶梅等[6]報道PTCP的發(fā)生率為0.09%～0.21%，我們的統(tǒng)計約為0.26%，略有增高，有可能跟我們統(tǒng)計的病例主要來自住院患者有關(guān)。本資料只關(guān)注了血小板計數(shù)低于70×109/L的病例，對這些病例才特別進(jìn)行了血小板直方圖觀察和顯微鏡涂片檢查血小板有無聚集。而對于一些血小板數(shù)量較高即使因EDTA原因未降至70×109/L以下的病例就有可能漏檢，實際的發(fā)生率可能更高。

在實際工作中，由于血細(xì)胞分析國內(nèi)普遍使用EDTA-K2抗凝靜脈血上機(jī)檢測，如未對PTCP引起足夠重視，對血小板減低病例，如顯微鏡人工計數(shù)復(fù)查仍用原標(biāo)本稀釋，對PTCP患者會導(dǎo)致錯誤報告。即使發(fā)現(xiàn)有血小板聚集，如只考慮到采血因素重新抽血仍用EDTA-K2抗凝，對于住院患者尤其是普通病例標(biāo)本通過流通渠道送達(dá)實驗室時間往往較長，血小板聚集會隨時間延長加劇，即使多次復(fù)查也無實際意義，給臨床造成血小板減少的假象，這也是PTCP容易被忽略的原因。

對PTCP的處理方式及糾正措施目前有多種報道。馬春芳等[7]報道利用血液分析儀警示信息可有效篩查EDTA依賴性假性血小板減少癥。血液分析儀中非白細(xì)胞域異常散點圖對檢出PTCP敏感性為100%，特異性為95.9%，出現(xiàn)血小板聚集警示信息對檢出PTCP敏感性為92.6%，特異性為97.6%。但由于血細(xì)胞分析儀型號差異，檢測血小板原理各不相同，實際工作中可能提示信息的反應(yīng)也不一致。張偉紅等[8]研究表明抽血后放置1 h內(nèi)加入6.5 mg/ml丁胺卡那霉素，能抑制患者血小板膜表面CD62p、PAC-1和IgG的表達(dá)，有效解離EDTA抗凝劑依賴性血小板凝集，且不影響其他血細(xì)胞的計數(shù)，有助于解決EDTA所致的血小板計數(shù)的假性減少。也有文獻(xiàn)報道用肝素鈉抗凝對PTCP患者在抽血后15 min以內(nèi)進(jìn)行復(fù)查，也可獲得準(zhǔn)確結(jié)果[9]。

我們的實驗表明，雖然枸櫞酸鈉抗凝血血小板在15 min以后其穩(wěn)定性逐漸降低，但在15 min內(nèi)檢測結(jié)果是可靠的，只要掌握好時間可以消除血小板聚集的影響，該方法適用于住院病例的復(fù)查。對于門診患者，采用末梢血草酸胺稀釋液顯微鏡計數(shù)，雖然精密度不如血細(xì)胞分析儀，但對于異常結(jié)果的復(fù)檢仍不失為一種簡單有效的方法。

[1]鄺妙歡,陸霄云,鐘義富,等.假性血小板減少的相關(guān)因素[J].中山大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)科學(xué)版),2009,30(4)：121-124.

[2]葉應(yīng)嫵,王毓三,申子瑜.全國臨床檢驗操作規(guī)程[M].3版.南京：東南大學(xué)出版社,2006：136.

[3]Barnes PW,McFadden SL,Machin SJ,et a1.The International Consensus Group for Hematology Review：suggested criteria for action following automated CBCand WBC differential analysis[J].Lab Hematol,2005,11：83-90.

[4]顧 挺,蘇 娜.20例EDTA-K2致假性血小板減少動態(tài)分析[J].新疆醫(yī)科大學(xué)學(xué)報,2009,32(9)：1366-1367.

[5]王蘇平,周 金,吳 靜,等.EDTA抗凝血檢測血小板計數(shù)變化一例分析[J].現(xiàn)代檢驗醫(yī)學(xué)雜志,2008,23(2)：39.

[6]宓慶梅,施巍宇,郝婉瑩,等.EDTA依賴性假性血小板減少癥1例[J].中華檢驗醫(yī)學(xué)雜志,2004,27(10)：719.

[7]馬春芳,王劍超,陳雪靜.利用血液分析儀警示信息篩查EDTA依賴性假性血小板減少癥[J].臨床檢驗雜志,2010,28(3)：181-187.

[8]張偉紅,周小棉,巫小莉,等.抗凝劑依賴假性血小板減少癥凝集血小板解離及機(jī)理研究[J].現(xiàn)代醫(yī)院,2010,10(2)：24-27.

[9]馬雨東.血細(xì)胞分析儀測定血小板時抗凝劑等影響因素分析[J].檢驗醫(yī)學(xué)與臨床,2010,7(11)：1078-1080.