鄧毛子，包永芬，梁瑩，寧志豐

（1.湖北科技學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)微生物學(xué)教研室，湖北咸寧 437100；2.湖北科技學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病原學(xué)實(shí)驗(yàn)室，湖北咸寧 437100；3.湖北科技學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)示范中心，湖北咸寧 437100）

油茶籽油為野山茶果提煉而成的食用油，別名山茶油、茶油。它主要含有油酸、亞油酸等不飽和脂肪酸，其脂肪酸含量、比例與橄欖油極為相似，素有“東方橄欖油”的稱號，甚至有些營養(yǎng)成分的指標(biāo)還要高于橄欖油[1]。除了作為食用油使用的這一用途外，其還在醫(yī)藥、化妝品、化工等行業(yè)具有廣闊的市場前景[1-10]。在生物學(xué)、醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中，顯微鏡是一種最基本的教學(xué)儀器，在觀察細(xì)菌、原蟲等微小的生物標(biāo)本時(shí)，需要用到油鏡，通常使用香柏油作為其觀察媒介，由于香柏油的價(jià)格較高，不易購買，且在使用的過程中因清洗劑的揮發(fā)而對環(huán)境造成污染，對使用者，尤其是對長期使用者的健康會造成不利影響，因此人們對現(xiàn)有的油鏡組成和使用進(jìn)行改進(jìn)，武連生、孫明山、趙春娥、唐開紅、魏納新等在油鏡觀察介質(zhì)及清洗劑方面做出了一定的改進(jìn)[11-15]。茶油在物理性狀方面與香柏油較為相近，其價(jià)格相對較低，且易于購買，因此對目前市場上常見的茶油進(jìn)行了折光率的測定，并就標(biāo)本在茶油介質(zhì)中的鏡下觀察效果及其清洗劑等方面與香柏油進(jìn)行了對比研究，以期找到另一種更為經(jīng)濟(jì)安全的能有效替代香柏油的油鏡觀察介質(zhì)，進(jìn)一步拓展茶油的實(shí)際用途。

1 材料與方法

1.1 材料

擦鏡紙；95%酒精；介質(zhì)油A：香柏油；介質(zhì)油B：金龍魚茶油；介質(zhì)油C：金浩茶油；介質(zhì)油D：高氏茶油；標(biāo)本片；潔凈載玻片；竹簽；二甲苯；清洗劑A：立白洗潔精；清洗劑B：雕牌全效加濃洗潔精；清洗劑C：白貓洗潔精；清洗劑D：威猛先生廚房重油污凈；清洗劑E：綠傘油煙凈。

1.2 主要設(shè)備及儀器

2W/2WAJ阿貝折光儀：上海明茲精密儀器有限公司；奧林巴斯顯微成像系統(tǒng)（XPTW-50）；Eppendorf單道可調(diào)量程移液器。

1.3 檢測方法

1.3.1 介質(zhì)油A及幾種茶油的折光率測定

按2W/2WAJ阿貝折光儀使用說明書進(jìn)行。

1.3.2 幾種樣本在分別用介質(zhì)油A、介質(zhì)油B作為觀察介質(zhì)的油鏡下的觀察效果對比觀察

按奧林巴斯顯微成像系統(tǒng)（XPTW-50）使用說明書進(jìn)行。

1.3.3 介質(zhì)油A、幾種茶油室溫下凝固干結(jié)時(shí)間測定

將介質(zhì)油A以及不同品牌茶油各取1滴（50 μL）分別滴于不同的潔凈載玻片上，置于25℃室溫下，每天以竹簽劃動(dòng)及擦鏡紙擦拭的方式檢測其是否變稠凝固，并記錄其凝固干結(jié)時(shí)間。

1.3.4 不同清洗劑對凝固干結(jié)茶油的清洗效果觀察

1.3.4.1 不同品牌茶油玻片凝固干結(jié)物的制取

取不同品牌茶油各取1滴（50 μL）分別滴于不同的潔凈載玻片上，置于25℃室溫下使其自然凝結(jié)。

1.3.4.2 不同清洗劑對凝固干結(jié)茶油的清洗效果觀察

向不同品牌的茶油在玻片上形成的凝固干結(jié)物中分別加入 50 μL 的二甲苯、清洗劑 A（原液，1 ∶2，1 ∶4，1∶8，1∶16倍蒸餾水稀釋液）、清洗劑 B（原液，1∶2，1 ∶4，1∶8，1∶16倍蒸餾水稀釋液）、清洗劑 C（原液，1∶2，1 ∶4，1∶8，1∶16倍蒸餾水稀釋液）、清洗劑 D（原液，1∶2，1∶4，1∶8，1∶16倍蒸餾水稀釋液）、清洗劑 E（原液，1∶2，1∶4，1∶8，1∶16倍蒸餾水稀釋液），觀察實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象，并每隔10 s用擦鏡紙擦拭，觀察其清洗效果。

2 結(jié)果

2.1 介質(zhì)油A及幾種茶油的折光率測定結(jié)果

介質(zhì)油A及幾種茶油的折光率測定結(jié)果，結(jié)果見表1。

2.2 幾種樣本在分別用介質(zhì)油A、介質(zhì)油B作為觀察介質(zhì)的油鏡下的觀察效果對比觀察

幾種樣本在分別用介質(zhì)油A、介質(zhì)油B作為觀察介質(zhì)的油鏡下的觀察效果對比觀察，結(jié)果見圖1～圖4。

表1 介質(zhì)油A及幾種茶油的折光率Table 1 The refractive index of median oil A and several kinds of camellia oil

2.3 介質(zhì)油A、幾種常見茶油室溫下凝固干結(jié)時(shí)間測定結(jié)果

圖1 大腸桿菌革蘭染色標(biāo)本片鏡下觀（1×1 000）Fig.1 The observation results of Escherichia.coli gram stain specimen under oil immersion lens

圖2 金黃色葡萄球菌革蘭染色標(biāo)本片鏡下觀（1×1 000）Fig.2 The observation results of Staphylococcus aureus gram stain specimen under oil immersion lens

圖3 鉤體鍍銀染色標(biāo)本片鏡下觀（1×1 000）Fig.3 The observation results of Leptospira silvered stain specimen under oil immersion lens

介質(zhì)油A在室溫下第2天液體變稠，擦拭時(shí)黏度大，易將擦鏡紙黏附在玻片上，用擦鏡紙不能完全清除，第3天完全凝固干結(jié)。3種品牌茶油保持易清除的液體狀態(tài)的時(shí)間均超過10 d，介質(zhì)油B和介質(zhì)油D為12d，介質(zhì)油C為11d；介質(zhì)油B和介質(zhì)油D自第13天起，明顯變稠，用擦鏡紙擦拭時(shí)黏度大，易將擦鏡紙黏附在玻片上，用擦鏡紙不能有效從玻片上清除，介質(zhì)油C自第12天起明顯變稠，用擦鏡紙擦拭時(shí)黏度大，易將擦鏡紙黏附在玻片上，用擦鏡紙不能有效從玻片上清除。上述三種品牌茶油均于第28天完全凝固干結(jié)。

圖4 青霉標(biāo)本片鏡下觀（1×1 000）Fig.4 The observation results of Blue mould specimen under oil immersion lens

2.4 不同清洗劑對凝固干結(jié)茶油的清洗效果觀察結(jié)果

二甲苯作用10 s后，即能將凝固干結(jié)物完全溶解，用擦鏡紙能有效將其自玻片上清除。用清洗劑A（原液，1∶2，1∶4，1∶8，1∶16倍蒸餾水稀釋液）、清洗劑 B（原液，1 ∶2，1 ∶4，1 ∶8，1 ∶16 倍蒸餾水稀釋液）、清洗劑 C（原液，1∶2，1∶4，1∶8，1∶16倍蒸餾水稀釋液）這三種清洗劑作用10 s后，干結(jié)物表面均出現(xiàn)白色乳化物，但用擦鏡紙不能有效將其自玻片上完全清除，仍有干結(jié)物存留（稀釋度越大，殘留越多），用擦鏡紙擦拭時(shí)玻片上黏度較大，延長作用時(shí)間至1 min，仍不能完全清除。用清洗劑 D（原液，1∶2，1 ∶4，1 ∶8，1 ∶16 倍蒸餾水稀釋液）、清洗劑 E（原液，1 ∶2，1∶4，1∶8，1 ∶16倍蒸餾水稀釋液）清洗10 s后，其原液能使茶油干結(jié)物乳化，可有效將玻片上的干結(jié)物完全清除，用擦鏡紙擦拭，與未變稠的茶油一樣，無明顯黏度；其1∶2，1∶4稀釋液需作用至30 s后才能有效將玻片上的干結(jié)物完全清除，用擦鏡紙擦拭，與未變稠的茶油一樣，無明顯黏度；其1∶8，1∶16稀釋液，延長作用時(shí)間至1 min，仍有少許干結(jié)物殘留，不能完全清除。

3 結(jié)論與討論

茶油作為一種營養(yǎng)豐富的植物油，在中國很早就用作食用，有著豐富的營養(yǎng)價(jià)值。與介質(zhì)油A同為油脂類，其物理學(xué)性狀較為相似，魏納新等發(fā)現(xiàn)常用色拉油可以作為介質(zhì)油A的替代品[15]，與常用色拉油相似的茶油理應(yīng)可以有效代替介質(zhì)油A作為油鏡觀察媒介。本研究的結(jié)果表明，幾種不同品牌的茶油的折光率（介質(zhì)油B、介質(zhì)油D為1.467 0，介質(zhì)油C為1.466 5）與介質(zhì)油A（1.510 0）近似，標(biāo)本片在介質(zhì)油B介質(zhì)下的鏡下觀察效果見圖1～圖4，其視野亮度較之介質(zhì)油A下的視野亮度稍暗，但不影響標(biāo)本片的有效觀察，其物像的分辨率與介質(zhì)油A相當(dāng)，對標(biāo)本片中常見色彩的展現(xiàn)效果與介質(zhì)油A無明顯差別（見圖1～圖4），因此其可有效代替介質(zhì)油A作為油鏡觀察介質(zhì)。同時(shí)常規(guī)的油鏡清洗劑為二甲苯，有的實(shí)驗(yàn)室也使用酒精乙醚混合液（3∶2）作為清洗劑，二甲苯具有揮發(fā)性，易污染空氣，尤其是大量學(xué)生同時(shí)進(jìn)行油鏡操作時(shí)，對實(shí)驗(yàn)室的污染更加嚴(yán)重，其被吸入后不僅對人的神經(jīng)系統(tǒng)有損傷，還會對造血系統(tǒng)造成損害，此外乙醚和酒精的揮發(fā)也會影響神經(jīng)系統(tǒng)。使用茶油作為油鏡觀察介質(zhì)，從本研究可以看出，與介質(zhì)油A比較，其在室溫下保持較易清除的液體狀態(tài)的時(shí)間較介質(zhì)油A更長，即使使用二甲苯進(jìn)行清洗，也可減少二甲苯使用頻次，同時(shí)它也可用不易揮發(fā)的油污凈等日用油污清洗劑進(jìn)行有效清洗，從而更為安全，但由于油污凈等清洗劑與二甲苯比較起來，不易揮發(fā)，因此在使用其作為油鏡清洗劑時(shí)，需用擦鏡紙多次擦拭鏡頭，減少清洗劑的少量殘留，以免殘留的清洗劑影響觀察效果。此外介質(zhì)油A價(jià)格較貴（目前一般約為0.3元/mL～0.4元/mL），而常見食用茶油目前市場價(jià)格一般約為0.05元/mL～0.1元/mL，因此茶油成本更為低廉，且較介質(zhì)油A更易購置。

綜上所述，食用茶油價(jià)格低廉、易于購買，其折光率及標(biāo)本片的鏡下觀察效果與介質(zhì)油A無明顯差別，且可用多種危害性較小且易于購置和保存的清洗劑進(jìn)行清洗，對實(shí)驗(yàn)室環(huán)境污染較少，可有效替代介質(zhì)油A作為油鏡的觀察介質(zhì)。本研究進(jìn)一步拓展了茶油的實(shí)際用途。

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