王漢平 楊志靈 魏桂芳 陜西省漢中市中醫(yī)醫(yī)院（漢中723000）

舒膽片收載于原衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)《中藥成方制劑》第二十冊(cè)，具有清熱化濕，利膽排石，行氣止痛的功能，用于肝膽濕熱，黃疸脅痛，發(fā)熱口苦，尿赤便燥等癥及膽囊炎、膽道感染、膽石癥見上述證候的患者，具有顯著的臨床應(yīng)用效果［1］。原標(biāo)準(zhǔn)制定于上世紀(jì)九十年代，由于歷史條件所限，僅對(duì)部分藥材制定了薄層鑒別項(xiàng)目，未制定定量控制項(xiàng)目，使得本產(chǎn)品的質(zhì)量控制處于較低水平。厚樸是本品處方中的主藥之一，其主要成分為厚樸酚及和厚樸酚等，但試驗(yàn)表明藥材的含量測(cè)定方法不適合成品的檢驗(yàn)［2］。為保證舒膽片的質(zhì)量穩(wěn)定，本實(shí)驗(yàn)建立了HPLC法測(cè)定舒膽片中厚樸酚及和厚樸酚含量的方法［3］。

1 儀器與試藥 儀器：美國waters 515高效液相色譜儀，waters 2487雙波長紫外檢測(cè)器，戴安ASI－100自動(dòng)進(jìn)樣器，浙大智達(dá)色譜處理工作站；賽多利斯BP－211D十萬分之一電子天平；KQ－250DB超聲處理儀。試劑：甲醇、乙腈為色譜純，磷酸為分析純，水為娃哈哈596mL瓶裝純凈水；對(duì)照品厚樸酚（批號(hào)：110729－200411）及和厚樸酚（批號(hào)：110730－201011）購自中國藥品生物制品檢定所；舒膽片由陜西漢王藥業(yè)有限公司生產(chǎn)。

2 方法與結(jié)果 2.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取厚樸酚對(duì)照品及和厚樸酚對(duì)照品適量，加甲醇制成每1mL 含厚樸酚20μg及和厚樸酚10μg的溶液，即得。

2.2 供試品溶液的制備 取舒膽片50片，除去包衣，精密稱定重量，求得平均片重。研成細(xì)粉，取約2g，精密稱定，置50mL具塞錐形瓶中，精密加甲醇50mL，稱定重量，在30℃下超聲處理60min，放冷，再精密稱定，用甲醇補(bǔ)足減失的重量。濾過，精密吸取續(xù)濾液5mL，置25mL的量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，微孔濾膜（0.45μm）過濾，即得。

2.3 色譜條件 色譜柱：Thermo－BDS HYPERSILC18120A5μm，柱（4.6mm×250mm ）；流動(dòng)相：甲醇－乙腈－水－磷酸（50∶19.31∶0.3）；柱溫：30℃；流速：1.0 mL／min；檢測(cè)波長294nm；理論塔板數(shù)按厚樸酚峰計(jì)算應(yīng)不低于3000。

由于本實(shí)驗(yàn)采用厚樸酚及和厚樸酚兩個(gè)成分的混合對(duì)照，先用加樣法進(jìn)行預(yù)試驗(yàn)，確定第一個(gè)峰（保留時(shí)間11.2min）為和厚樸酚，第二個(gè)峰（保留時(shí)間14.5min）為厚樸酚。然后進(jìn)行下列試驗(yàn)。

2.4 線性關(guān)系考察 分別精密吸取對(duì)照品溶液2、4、6、8、10μl進(jìn)樣，以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，厚樸酚峰面積為縱坐標(biāo)作圖，得厚樸酚峰面積的線性回歸方程y＝124000x＋20.8，r＝0.9992。厚樸酚在0.04～0.2μg的進(jìn)樣范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。再以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，和厚樸酚峰面積為縱坐標(biāo)作圖，得和厚樸酚峰面積的線性回歸方程y＝46750x＋17.2，r＝0.999 0。和厚樸酚在0.02～0.1μg的進(jìn)樣范圍內(nèi)同樣具有良好的線性關(guān)系。故可以用外標(biāo)法對(duì)厚樸酚及和厚樸酚兩個(gè)成分進(jìn)行計(jì)算。

2.5 精密度試驗(yàn) 精密吸取對(duì)照品溶液10μl，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定厚樸酚峰面積，求得RSD 值為1.15%；再測(cè)定和厚樸酚峰面積，求得RSD 值為1.24%，均小于1.5%，符合藥典要求。色譜圖見圖1。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn) 取樣品溶液10μl，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定厚樸酚及和厚樸酚的峰面積，求得厚樸酚峰面積RSD 值為1.27%，和厚樸酚峰面積RSD 值為1.39%。均在1.5%以內(nèi)，重復(fù)性符合要求。

2.7 樣品測(cè)定 精密吸取樣品溶液10μl，連續(xù)進(jìn)樣3次，用外標(biāo)法計(jì)算，測(cè)定厚樸酚及和厚樸酚含量，分別計(jì)算厚樸酚及和厚樸酚的平均含量、平均含量的RSD 值，再計(jì)算厚樸酚及和厚樸酚的總含量。5批樣品的測(cè)定結(jié)果見表1，色譜圖見圖2。

2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn) 分別在第一次樣品進(jìn)樣后間隔2、4、6、8、10h時(shí)，精密吸取樣品溶液10μl，進(jìn)樣測(cè)定，統(tǒng)計(jì)并計(jì)算各次進(jìn)樣所測(cè)定的厚樸酚峰面積的RSD 值，再統(tǒng)計(jì)并計(jì)算各次進(jìn)樣所測(cè)定的和厚樸酚峰面積的RSD 值，結(jié)果得到：厚樸酚峰面積的RSD＝1.36%，和厚樸酚峰面積RSD 值為1.49%。表明所測(cè)兩成分均較穩(wěn)定，可在一個(gè)班次內(nèi)（按8h工作時(shí)間）檢驗(yàn)。

2.9 回收率試驗(yàn) 精密稱取已測(cè)知含量的舒膽片樣品細(xì)粉適量，加入定量的厚樸酚對(duì)照品及和厚樸酚對(duì)照品，按2.2項(xiàng)下操作，得到回收率試驗(yàn)樣品，測(cè)定其中厚樸酚及和厚樸酚的含量，分別計(jì)算厚樸酚及和厚樸酚的回收率，求得平均回收率為97.9%，RSD＝1.4%（n＝6），結(jié)果見表2。

表1 舒膽片中厚樸酚及和厚相酚含量測(cè)定試驗(yàn)結(jié)果

表2 厚樸酚及和厚相酚回收率試驗(yàn)結(jié)果

圖1 厚樸酚及和厚樸酚HPLC圖譜

圖2 舒膽片HPLC圖譜

討 論 由于厚樸酚及和厚樸酚的理化性質(zhì)相似［4］，本實(shí)驗(yàn)采用了同一色譜條件，同一樣品處理方法，一次同時(shí)測(cè)定兩個(gè)組份，簡(jiǎn)化了測(cè)定過程。使用混合對(duì)照品溶液時(shí)，一定要確認(rèn)前后兩個(gè)峰各是哪個(gè)成分，一般和厚樸酚在前，厚樸酚在后，但條件變化時(shí)最好再次加樣確認(rèn)或另配一單成分對(duì)照品溶液進(jìn)行確認(rèn)。經(jīng)不同品牌的C18色譜柱對(duì)多批樣品進(jìn)行反復(fù)測(cè)試，證明本法的重現(xiàn)性較好，故可用于舒膽片的含量測(cè)定。試驗(yàn)所測(cè)5批樣品的厚樸酚及和厚樸酚含量在每片1.2～1.4mg之間。但由于厚樸藥材中厚樸酚及和厚樸酚含量差異較大，首先應(yīng)對(duì)處方中的原料進(jìn)行嚴(yán)格控制。鑒于本實(shí)驗(yàn)所測(cè)樣品批次有限（只有5批），且5批產(chǎn)品為同一時(shí)期生產(chǎn)，樣品的代表性不強(qiáng)，產(chǎn)品含量限度需做進(jìn)一步研究。含量限度可暫定為：每片含厚樸以厚樸酚及和厚樸酚的總量計(jì)，不得小于1.0mg。

［1］ 崔愛珍.自擬舒肝通腑湯加減治療慢性膽囊炎40例［J］.陜西中醫(yī)，2009，30（1）：29.

［2］ 國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典［S］.一部.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010，235.

［3］ 王寶琹.中成藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研究［M］.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，1994，23－31.

［4］ 南京中醫(yī)藥大學(xué).中藥大辭典［M］.上海：上?？萍汲霭嫔?，1986，1628－1630.