張俊農(nóng) 賀 鶴 董 微

妊娠期高血壓疾病是產(chǎn)科最常見的合并癥，也是導(dǎo)致孕產(chǎn)婦和圍生兒患病率及死亡率增加的常見原因之一。其確切病因和發(fā)病機(jī)制的研究一直是婦產(chǎn)科領(lǐng)域的重要研究課題。目前比較公認(rèn)的發(fā)病機(jī)制是內(nèi)皮細(xì)胞激活和損傷學(xué)說。現(xiàn)今醫(yī)學(xué)對其治療以解痙降壓、適時(shí)終止妊娠為主，缺乏有效的早期治療手段。探索妊娠期高血壓疾病早期治療的途徑成為國內(nèi)外學(xué)者關(guān)注的熱點(diǎn)。有研究表明，靜脈注射脂氧素（lipoxins，LX）A4會(huì)使有高血壓疾病的小鼠全身和局部血壓下降，而對正常大鼠血壓并無影響，這對于子前期的治療具有重要意義[1]。本研究旨在研究LXA4對子前期大鼠的治療效果。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 選擇3～4個(gè)月齡的SPF級雌性SD大鼠30只，另選擇3～4個(gè)月齡的SPF級雄性SD大鼠15只，按雄雌比1∶2的比例進(jìn)行雌雄合籠，以發(fā)現(xiàn)雌性大鼠陰栓當(dāng)日記為孕第1天，隨機(jī)將妊娠大鼠分為正常組、內(nèi)毒素組和LX組（內(nèi)毒素+LXA4），每組10只。

1.2 研究方法

1.2.1 模型制備 測孕前及妊娠第8天上午9：00～12：00基礎(chǔ)血壓、大鼠體質(zhì)量及24 h尿蛋白，妊娠第14天給內(nèi)毒素組和LX組大鼠尾靜脈注入內(nèi)毒素1.0 μg/kg，輸入速度為2 mL/h，繼續(xù)測量孕鼠妊娠第15、18天血壓及24 h尿蛋白，自第15天逐漸升高，且第15、18天24 h尿蛋白明顯增加，表現(xiàn)為高血壓、蛋白尿及炎癥反應(yīng)的激活，與子前期表現(xiàn)一致，表明建模成功。妊娠第14天，LX組尾靜脈注入LXA4注射液0.7 mg/kg，正常組和內(nèi)毒素組大鼠尾靜脈注射等量的生理鹽水。

1.2.2 測量指標(biāo) 于妊娠第20天手術(shù)取出子鼠，測量新生鼠體質(zhì)量。同時(shí)從大鼠腹主動(dòng)脈采血5 mL,置入含抗凝劑的試管中，室溫下2 000 r/min離心5 min，取上清液，-20℃保存待用。采用硝酸還原酶法測定NO濃度，試劑購自南京建成生物有限公司。應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本大鼠LX水平。酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA）試劑盒購自美國R&D公司。方法：在酶標(biāo)板加樣50 μL，加稀釋液40 μL及待測樣品10 μL，經(jīng)溫育洗滌后，每孔依次加入顯色劑A50 μL，B50 μL，37 ℃避光顯色15 min，加終止液50 μL終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色），450 nm波長依序測量各孔的光密度（OD）值。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 12.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料以± s表示，2組比較用t檢驗(yàn)，多組間比較采用方差分析及LSD-t檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 孕鼠孕前與孕第8天指標(biāo)比較 3組于孕前及受孕第8天時(shí)平均動(dòng)脈壓、大鼠體質(zhì)量、24 h尿蛋白及基礎(chǔ)脂氧素水平比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），見表1。正常組、內(nèi)毒素組和LX組孕第8天體質(zhì)量高于孕前（t分別為2.75、2.91、2.63，P<0.05），3組孕第8天的脂氧素水平均高于孕前（t分別為3.84、7.84、9.13，P<0.05）。

Table 1 Comparison of index before pregnancy and 8 days afer conception表1 孕前與孕第8天各指標(biāo)比較(n=10± s)

Table 1 Comparison of index before pregnancy and 8 days afer conception表1 孕前與孕第8天各指標(biāo)比較(n=10± s)

均P>0.05，1 mm Hg=0.133 kPa

組別正常組內(nèi)毒素組LX組F孕前平均動(dòng)脈壓(mm Hg)128.34±10.11 129.28±10.09 128.68±11.03 2.89體質(zhì)量(g)269.02±17.31 270.45±16.54 270.38±16.40 3.00 24 h尿蛋白(mg)0.014±0.001 0.013±0.003 0.015±0.002 2.95脂氧素(ng/L)33.27±1.88 34.25±1.96 33.59±1.78 2.77組別正常組內(nèi)毒素組LX組F孕第8天平均動(dòng)脈壓(mm Hg)129.29±9.98 127.57±10.12 128.34±10.09 3.11體質(zhì)量(g)275.12±18.12 277.36±17.92 275.56±19.24 2.93 24 h尿蛋白(mg)0.013±0.000 0.014±0.001 0.013±0.000 2.88脂氧素(ng/L)40.88±1.97 41.22±2.01 41.99±2.30 2.56

2.2 各組孕第8天、第15天與孕第18天指標(biāo)比較 內(nèi)毒素組孕第15天平均動(dòng)脈壓及24 h尿蛋白與孕第8天時(shí)比較明顯升高（t分別為3.2，36.69，P<0.05）；LX組于孕第15天時(shí)平均動(dòng)脈壓及24 h尿蛋白較第8天有所升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t分別為3.4，46.17，P<0.05）。孕第18天時(shí)，LX組平均動(dòng)脈壓和24 h尿蛋白較孕第15天時(shí)均有下降（t分別為3.5，37.43，P<0.05），也低于內(nèi)毒素組（P<0.05），且內(nèi)毒素組脂氧素水平較正常組及LX組水平下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表2。

Table 2 Comparison of pregnant index of 15 days and 18 days after conception表2 孕第15天及孕第18天各指標(biāo)比較 (n=10±s)

Table 2 Comparison of pregnant index of 15 days and 18 days after conception表2 孕第15天及孕第18天各指標(biāo)比較 (n=10±s)

＊＊P<0.01，a與正常組比較P<0.05，b與內(nèi)毒素組比較P<0.05，表3同

組別正常組內(nèi)毒素組LX組F孕第18天平均動(dòng)脈壓(mm Hg)129.24±9.98 139.29±10.13a 128.12±10.24b 347.88＊＊24 h尿蛋白(mg)0.012±0.002 0.091±0.007a 0.017±0.003b 221.38＊＊脂氧素(ng/L)50.92±3.11 41.98±3.36a 53.35±3.18b 259.28＊＊組別正常組內(nèi)毒素組LX組F孕第15天平均動(dòng)脈壓(mm Hg)125.23±8.24 135.68±9.97a 135.98±7.49 111.90＊＊24 h尿蛋白(mg)0.011±0.001 0.085±0.006a 0.086±0.005 189.05＊＊

2.3 3組間子鼠體質(zhì)量和孕鼠NO水平比較 孕第20天時(shí)，LX組NO濃度較內(nèi)毒素組升高（P<0.05），與正常組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。正常組與LX組子鼠體質(zhì)量均高于內(nèi)毒素組(P<0.05)，LX組與正常組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見表3。

3 討論

3.1 脂氧素的生物學(xué)作用 LX是20世紀(jì)80年代被發(fā)現(xiàn)的二十烷類中一類花生四烯酸代謝產(chǎn)物，能有效調(diào)節(jié)細(xì)胞炎性氧化損傷[2]。阿司匹林誘生的脂氧素，通過與細(xì)胞表面高親和力的脂氧素受體結(jié)合發(fā)揮生物效應(yīng)，其廣泛分布于骨髓源性細(xì)胞。已有的研究表明，利用人工合成的脂氧素穩(wěn)定的同系物如15-環(huán)己基-LXA4等已成功地治療了動(dòng)物實(shí)驗(yàn)性關(guān)節(jié)炎、腎小球腎炎、急性肺損傷等免疫炎性疾病[3]。脂氧素通過抑制其細(xì)胞因子表達(dá)來抑制促炎細(xì)胞活性。還能抑制血管內(nèi)皮生長因子引起的新生血管形成[1，4]。研究表明，脂氧素調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)的機(jī)制不同于白細(xì)胞介素(IL)-10、地塞米松等免疫抑制劑，并不影響機(jī)體正常的免疫反應(yīng)[5]。作為一種新的免疫調(diào)節(jié)劑，其應(yīng)用前景十分廣闊。

Table 3 Comparison of body weights of newborn rats and NO levels of pregnant rats between three groups表3 3組孕第20天子鼠體質(zhì)量及孕鼠NO水平比較(n=10± s)

Table 3 Comparison of body weights of newborn rats and NO levels of pregnant rats between three groups表3 3組孕第20天子鼠體質(zhì)量及孕鼠NO水平比較(n=10± s)

組別正常組內(nèi)毒素組LX組F子鼠體質(zhì)量（mg）3.69±0.39 2.44±0.39a 3.64±0.31b 336.12＊＊NO（μmol/g）14.57±3.53 9.75±6.40a 12.64±4.51b 229.90＊＊

3.3 前景 脂氧素病生理作用受何種機(jī)制調(diào)控，其對妊娠期高血壓疾病治療的影響等，還需要進(jìn)一步深入研究。開發(fā)穩(wěn)定且可以通過胎盤屏障的脂氧素同系物，研制具有臨床應(yīng)用價(jià)值，安全可靠的新型抗炎、免疫調(diào)節(jié)的多效藥物，可以為攻克妊娠期高血壓疾病這一頑疾開辟嶄新的道路。

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