郭伶伶，張 祎，劉二偉，韓立峰，王 濤

芒果葉為漆樹科植物芒果（Mangifera indica L.）的葉[1]，其性味酸、甘、涼、平，具有行氣疏滯、祛痧積的功能，主要用于治療熱滯腹痛、氣脹、小兒疳積、消渴[2]等癥。芒果葉中含有芒果苷、高芒果苷、異芒果苷、槲皮素、原兒茶酸等多種化學成分。主要成分芒果苷具有鎮(zhèn)咳、殺菌、抗病毒、抗腫瘤、降血糖、降血脂、提高腦細胞功能等多種功效[3-5]。

1 儀器與試劑

Agilent 1260液相色譜系統(tǒng)（UV檢測器，四元泵，在線脫氣機，自動進樣器，柱溫箱，可變波長檢測器）；BP121S電子天平（德國賽多利斯公司）；KQ-300B超聲清洗器（昆明市超聲儀器有限公司）。乙腈（色譜純，天津康科德科技有限公司）；其余試劑均為分析純，水為超純水。芒果苷對照品（中新藥業(yè)提供，純度>90%）；芒果葉藥材采自海南省?？谑?，由天津中醫(yī)藥大學李天祥副教授鑒定為芒果葉（Mangifera indica L.），樣品保存于天津中醫(yī)藥大學中醫(yī)藥研究院，2011年5月采摘的樣品批號為2011MG05，2012年 4、5、6月樣品批號為 2012MG04-06。

2 實驗方法

2.1 供試品溶液的制備 參照文獻[6-7]。稱取干燥芒果葉粉末（批號2011MG05）約0.2g，精密稱定，加入20 mL 60%甲醇，稱質(zhì)量，浸泡2 h，加熱回流2 h，放冷至室溫，稱質(zhì)量，用60%甲醇補足失質(zhì)量，搖勻，以0.45 μm微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液，即得芒果葉供試品溶液。

2.2 對照品溶液的制備 參照文獻[8-9]。精密稱取芒果苷對照品適量，用50%甲醇溶解，制成1 mL中含0.222 4 mg的對照品溶液。

2.3 色譜條件及系統(tǒng)適應性 參照文獻 [10-11]。Cosmosil ODS（5C18-MS-Ⅱ waters，4.6 mm×250 mm，5 μm）色譜柱，乙腈-1%冰醋酸溶液（15∶85）為流動相，流速1.0 mL/min，柱溫25℃，檢測波長254 nm；依上述色譜條件，分別精密吸取對照品溶液、樣品溶液各 10 μL，進樣。

2.4 線性范圍的考察 精密稱取干燥芒果苷對照品22.24 mg，置100 mL容量瓶中，加50%甲醇溶解并定容至刻度，即得芒果苷對照品溶液。精密吸取對照品溶液5 mL，置10 mL容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，分別制成含量為222.40、111.20、55.60、27.80、13.90、6.95 μg/mL 系列濃度的對照品溶液，精密吸取各濃度的芒果苷對照品溶液10 μL注入高效液相色譜儀測定，測定各峰面積。

2.5 精密度實驗 取同一對照品溶液，連續(xù)進樣6次，每次進樣10 μL，依法測定各峰面積，對精密度進行考察。

2.6 穩(wěn)定性實驗 取同一芒果葉供試品溶液，分別于0、2、6、12 h不同時間間隔點進樣分析，依法測定各峰面積，對方法的穩(wěn)定性進行考察。

2.7 重復性考察 取同一批芒果葉粉末（批號2011MG05）約 0.2g，精密稱定，按“2.1供試品溶液的制備”方法平行制備6份，依法測定各峰面積，計算出芒果苷的含量，考察其重復性。

2.8 加樣回收率實驗 精密稱定已知芒果苷含量的芒果葉樣品粉末（批號2011MG05）6份各0.2g，每份各加入20 mL 60%甲醇溶液及1.8 mL芒果苷對照品溶液，處理方法參照“2.1供試品溶液的制備”，依法測定各份樣品中芒果苷的含量。

2.9 供試品測定 分別取不同時期的芒果葉粉末約0.2g，精密稱定，按照“2.1供試品溶液的制備”方法平行制備3份，按“2.2色譜條件與系統(tǒng)適應性”色譜條件測定各供試品溶液的峰面積。

3 結(jié)果

3.1 線性考察 在254 nm波長處測定系列對照品溶液，以芒果苷含量（μg）為橫坐標，峰面積為縱坐標，繪制芒果苷對照品標準曲線并進行線性回歸，得芒果苷回歸方程：Y贊=4 986.2X-65.496，r2=0.999 9，芒果苷在0.069 5～2.224 0 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。見圖1。

圖1 芒果苷含量與峰面積線性關(guān)系考察

3.2 精密度考察 在254 nm波長處連續(xù)6次進樣，測定標準品溶液中芒果苷的含量，結(jié)果見表1，芒果苷的平均濃度為114.07 μg/mL，相對標準偏差（RSD）=0.11%，表明儀器的精密度良好。

表1 芒果苷的精密度實驗

3.3 穩(wěn)定性考察 在254 nm波長處分別在0、2、6、12 h測定供試品溶液中芒果苷的含量，結(jié)果見表2。供試品溶液在測定時間12 h內(nèi)芒果苷含量RSD=0.55%。表明供試品在測定時間12 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

表2 芒果苷的穩(wěn)定性實驗

3.4 重復性考察結(jié)果 在254 nm波長下測定6份芒果葉供試品溶液中芒果苷的含量，結(jié)果見表3，6份供試品溶液中芒果苷含量平均值為21.37 mg/g，RSD=1.68%，表明該方法重復性良好。

表3 芒果苷的重復性考察

3.5 加樣回收率考察結(jié)果 取6份加有芒果苷對照品溶液的供試品溶液，在254 nm波長處測定芒果苷回收率，結(jié)果見表4。芒果苷加標平均回收率為96.77%，RSD＝1.19%。回收率較高說明芒果苷在供試品溶液中不受其他物質(zhì)干擾，可準確測定其含量。

表4 芒果苷的加樣回收率實驗（n=6）

3.6 供試品測定結(jié)果 在254 nm波長處分別測定不同批次的供試品溶液中芒果苷的含量，見表5。

表5 不同月份芒果葉中芒果苷的含量（n=3）

4 討論

實驗結(jié)果表明，采用高效液相色譜法（HPLC）測定芒果葉提取物中芒果苷的含量，對照品和供試品溶液在254 nm波長下峰形一致，無雜峰干擾。經(jīng)線性關(guān)系分析，在0.069 5～2.224 0 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，表明在該濃度范圍內(nèi)測定芒果苷含量準確度較高。并且采用此方法精密度高、重現(xiàn)性好、加樣回收率高，為芒果葉藥材中芒果苷含量的測定提供一定的方法。

2011MG05和2012MG05兩批藥材測定結(jié)果表明，不同年份、相同月份采收的芒果葉中芒果苷含量相差很大。這可能與當?shù)氐臍夂?，比如降水量、光照時間、光照強度及溫度有關(guān)，具體情況有待進一步研究。2012MG04、2012MG05和2012MG06的供試品溶液測定結(jié)果表明，春季芒果苷含量隨芒果葉的生長有所增加，6月份芒果葉中芒果苷含量最高，此時期芒果已經(jīng)成熟，采摘芒果葉對果實基本無影響。這為藥材采收提供一定的參考。

[1]江蘇新醫(yī)學院.中藥大辭典（上冊）[S].上海：上海人民出版社，1977：1040.

[2]廣西壯族自治區(qū)衛(wèi)生廳.廣西中藥材標準[S].南寧：廣西科學技術(shù)出版社,1990:54.

[3]鄧家剛,鄭作文,曾春暉.芒果苷的藥效學實驗研究[J].中醫(yī)藥學刊，2002，20（6）：37.

[4]Nathalie W,Aliou B,Elhadj Sa觙dou B,et al.Ethnopharmacology of Mangifera indica L.Bark and Pharmacological Studies of its Main C-Glucosylxanthone,Mangiferin[J].International Journal of Biomedical and Pharmaceutical Sciences,2007,1(2):112-119.

[5]Prabhu S,Mallika J,Sabitha C S,et al.Cardioprotective effect of mangiferin on isoproterenol induced myocardial infarction in rats[J].Indian Journal of Experimental Biology,2006,44:209-215.

[6]黃海濱,李學堅,梁秋云.RP-HPLC法測定不同產(chǎn)地和不同月份的芒果葉中芒果苷的含量測定[J].中國中藥雜志,2003,28(9):839-841.

[7]鄧家剛,馮 旭,王 勤,等.芒果葉與芒果枝條中芒果苷的含量對比研究[J].廣西中醫(yī)藥，2006，29（2）：53－55.

[8]鄧家剛，馮 旭，王 勤，等.不同產(chǎn)地及不同品種芒果葉中芒果苷的含量對比研究[J].中成藥，2006，28（12）：1755－1756.

[9]馮 旭,王勝波,鄧家剛,等.高效液相色譜法同時測定芒果葉中芒果苷與高芒果苷的含量[J].中成藥,2008,30(10):1504-1506.

[10]劉華鋼，黃海濱，陳燕軍.HPLC法測定芒果止咳片中芒果甙的含量[J].中成藥，1997，19（10）：14.

[11]張元元，李 進，陳 濤，等.高效液相色譜法同時測定金銀花中綠原酸和木犀草苷的含量[J].天津中醫(yī)藥大學學報，2011，28（2）：107－109.