張翠，阮征，*，李玲，歐陽崇學(xué)，余迎利，周艷

（1.南昌大學(xué)食品科學(xué)與技術(shù)國家重點實驗室，江西 南昌 330047；2.南昌大學(xué)生命科學(xué)與食品工程學(xué)院，江西 南昌 330031）

哺乳動物處于斷奶時期的腸道易受到各種因素有誘導(dǎo)氧化應(yīng)激的攻擊，影響哺乳動物的生長[1]。在斷奶時期，哺乳動物腸道營養(yǎng)供給不足，限制腸上皮細胞抗氧化能力[2]，由于此時腸道黏膜免疫球蛋白含量低、酶系不完善，造成大量的自由基累積；外源食物在腸道的攝入、代謝及吸收過程中，在腸道、肝臟等代謝部位可產(chǎn)生活性氧及自由基，導(dǎo)致抗氧化體系失衡，引起脂質(zhì)過氧化、攻擊膜蛋白、DNA 等生物大分子[3]，造成損傷腸黏膜，阻礙營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收，影響哺乳動物正常生長。在處于斷奶期哺乳動物膳食中添加具有富含抗氧化活性成分的食物，對減少腸道自由基的產(chǎn)生，提高體內(nèi)抗氧化酶的活性，維持斷奶期大鼠腸道抗氧化體系的平衡具有重要意義[4]。

葡萄富含多種良好抗氧化活性化合物，研究表明葡萄提取物中富含白藜蘆醇、原花青素、色苷等多種化合物，在體外具有較強的羥自由基、超氧陰離子自由基清除能力[5]。文獻已表明葡萄中的白藜蘆醇、原花青素、花色素苷等多酚類化合物能改變體內(nèi)與抗氧化相關(guān)各種酶的活性、清除機體內(nèi)自由基，降低脂質(zhì)過氧化、緩解腸道炎癥及腫瘤等作用[6-7]。葡萄在體外和體內(nèi)均具有自由基清除和抗氧化能力。

近年來，葡萄中的多酚、原花青素以及黃酮類物質(zhì)活性的研究多集中于在病理狀態(tài)[8-9]，較少涉及對斷奶期哺乳動物腸道氧化應(yīng)激的影響。因此，以富含多酚、黃酮類化合物的葡萄為膳食添加，研究斷奶大鼠腸道抗氧化狀態(tài)是十分必要的。本實驗擬揭示葡萄對斷奶大鼠的腸道自由基清除和抗氧化的影響，采用斷奶SD 大鼠作為實驗對象，考察葡萄為膳食添加對斷奶大鼠體重、臟器指數(shù)以及血漿、肝臟和空腸中與自由基清除相關(guān)酶活性的變化，評估葡萄對斷奶大鼠腸道自由基清除和抗氧化能力的影響。

1 材料與方法

1.1 試劑

兩周齡斷奶SD 大鼠：上海西普樂－必凱實驗動物有限公司；巨峰葡萄：南昌天虹商場；SOD、CAT、MDA、iNOS 試劑盒：南京建成生物試劑公司。

1.2 儀器與設(shè)備

SC-3614 臺式離心機：科大創(chuàng)新股份有限公司中佳分公司；722E 可見分光光度計：上海光譜儀器有限公司。

1.3 動物飼養(yǎng)與樣品

適應(yīng)性飼養(yǎng)3 d 后，根據(jù)體重隨機分為對照組與葡萄組，各16 只。試驗期間，小鼠自由攝食、飲水。葡萄組組小鼠每天灌胃4.0 g/kg 葡萄汁，對照組用相同劑量的蒸餾水灌胃，實驗持續(xù)28 d。

于第14天和第28 天，空腹采血，離心取上清，-20 ℃保存；稱量體重和腸道重量，取空腸、肝臟，儲藏于-80 ℃冰箱。

1.4 腸道指數(shù)

小腸指數(shù)為小腸長度（cm）與體重（g）的比值。

1.5 試劑盒測定MDA 含量以及SOD、CAT 和iNOS活性

試劑盒測定血漿中MDA 含量和SOD、CAT 的活性，測定腎臟和空腸勻漿MDA 含量和SOD、CAT、iNOS 的活性。

1.6 數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計分析

實驗數(shù)據(jù)用SPSS13.0 統(tǒng)計軟件進行單因素方差分析和DUNCAN 式多重比較，數(shù)據(jù)以平均數(shù)±標準差表示，統(tǒng)計顯著性水平為P＜0.05。

2 結(jié)果與分析

2.1 葡萄對斷奶大鼠體重和臟器指數(shù)的測定結(jié)果

葡萄對斷奶大鼠體重和臟器指數(shù)的測定結(jié)果見表1。

表1 葡萄對斷奶大鼠體重增長率和小腸指數(shù)的影響Table 1 Effect of grape on weight rate and intestinal index of the weaning rats

在28 d 時，葡萄組斷奶大鼠體重增長率與對照組的相比顯著增加（P＜0.05）。但葡萄汁不能顯著影響斷奶大鼠腸道指數(shù)。

2.2 葡萄對幼鼠血清SOD、CAT 和MDA 活性的影響

葡萄對幼鼠血清SOD、CAT 和MDA 活性的影響見表2。

表2 葡萄對斷奶大鼠血漿中抗氧化指標的影響Table 2 Effect of grape juice on SOD，CAT and MDA in plasma of the weaning rats

實驗結(jié)果表明，14 d 時，與對照組相比，葡萄組斷奶大鼠血漿中的SOD 活性和MDA 含量分別升高了12.4%和175.3%，顯著差異（P＜0.05），CAT 活性升高了1.5%，差異不顯著（P＞0.05）。28d 時，與對照組相比，葡萄組斷奶大鼠血漿中MDA 下降38.2 %（P＜0.05），SOD 和CAT 分別升高了5.59 %和27.0 %（P＞0.05）。因此，葡萄可使斷奶大鼠血漿中的SOD 活性顯著升高，MDA 顯著降低（P＞0.05），可是CAT 有升高趨勢，葡萄可影響斷奶大鼠血漿中抗氧化酶的活性以及脂質(zhì)過氧化程度。

2.3 葡萄對肝臟、空腸CAT、SOD、MDA 和iNOS 的作用

攝取葡萄汁的二周后，評估斷奶大鼠肝臟和空腸中的抗氧化狀況。與對照住相比，斷奶大鼠攝取葡萄汁14 d 后，肝臟中的iNOS 降低了48.4%，沒有達到顯著性差異（P＞0.05）；腸道中空腸中iNOS 活性顯著降低了5.66 倍（P＜0.05），肝臟中的降低了48.4%（P＞0.05）。與對照組相比，肝臟和空腸中的SOD 活性分別升高了3.0%和1.8%，CAT 活力分別提高了13.5%和29.6%、MDA 降低了1.4%和3.5%，但均未達到顯著性差異（P＞0.05）。因此，葡萄對斷奶大鼠肝臟、空腸中自由基清除和抗氧化能力有一定的影響。

表3 葡萄對斷奶大鼠肝臟空腸CAT、SOD、MDA 和iNOS 的影響Table 3 Effect of grape on CAT，SOD，MDA and iNOS in liver and jejunum of the weaning rats in the 14 day

3 討論

腸道指數(shù)是腸道健康狀況的重要指標，一定程度上反應(yīng)腸道的損傷程度[10]。體重是衡量哺乳動物生長發(fā)育的重要指標。實驗結(jié)果揭示：在斷奶大鼠中，葡萄汁對腸道的損傷無顯著影響；但可提高其體重增長率[11]。

MDA 是由活性氧引發(fā)的多不飽和脂肪酸鏈式反應(yīng)中主要的代謝產(chǎn)物產(chǎn)物，生物醫(yī)學(xué)認為MDA 是衡量自由基水平以及脂質(zhì)過氧化程度的重要生化指標，血漿中MDA 含量的高低間接反映細胞受到自由基侵傷的嚴重程度[12]。結(jié)果表明：葡萄組斷奶大鼠血漿中的MDA 含量由14 d 高于對照組的175.3%，在28 d 時顯著降低了38.2%，但對照組28 d 血漿中MDA 的含量為14 d 時的3.93 倍；表明在大鼠斷奶期，隨著日齡的增加，血漿中的脂質(zhì)過氧化加劇，而膳食中添加葡萄可減緩斷奶時期大鼠血漿的脂質(zhì)過氧化[13]。SOD 的活性反應(yīng)了自由基清除的能力，可直接清除超氧陰離子自由基，阻斷自由基鏈式反應(yīng)，避免組織損傷[14]。CAT是一種廣泛存在與動物中的氧化還原酶，可快速催化細H2O2分解，避免過多H2O2對細胞造成損傷[15]。與對照組相比，在14 d，葡萄組斷奶大鼠血漿中的SOD 顯著增加，而CAT 升高了1.5%；在28 d 時，SOD 和CAT分別升高了5.9%和27.0%；馬中春等研究發(fā)現(xiàn)葡萄籽多酚可提高大鼠血清中SOD 和CAT 的活性[16]。因此，葡萄為膳食添加可增強血漿中抗氧化酶活性和降低脂質(zhì)過氧化程度，提高其血漿抗氧化能力。

由于腸道-肝臟屏障在抑制毒素和病原體轉(zhuǎn)移的過程中發(fā)揮重要作用[17]。因此，在考察葡萄對腸道抗氧化狀態(tài)的同時應(yīng)考察其對肝臟的抗氧化狀態(tài)的影響。結(jié)果表明，葡萄對空腸和肝臟的抗氧化均有影響與對照組相比葡萄汁僅使空腸MDA 含量水平降低了3.5%，但肝臟中的MDA 降低了1.4%，結(jié)果表明葡萄對斷奶大鼠腸道和肝臟的脂質(zhì)過氧化狀態(tài)影響不大。Raquel Mateos 等研究表明葡萄中多酚保護血漿和肝臟避免氧化損傷[18]以及多酚對結(jié)腸癌患者中結(jié)腸中MDA 含量有降低作用。因此，葡萄可降低斷奶大鼠肝臟和空腸中脂質(zhì)過氧化水平?？漳c和肝臟中的SOD 和CAT活性均有所升高，葡萄在一定程度上影響肝臟和空腸中的自由基清除能力。研究表明，在腸上皮細胞內(nèi)，iNOS 催化生成的過量NO，促進炎癥發(fā)生和加劇機體損傷[19]。在本實驗中，斷奶大鼠攝入葡萄汁顯著降低了空腸中iNOS 活性顯著降低，肝臟中iNOS 的活性降低了48.4%，但差異不顯著。因此在空腸和肝臟中，iNO合成一氧化氮（NO）能力下降，降低炎癥和氧化的發(fā)生率。Marion Man-Ying Chan[20]等研究亦證實葡萄中的多酚、白藜蘆醇、槲皮黃酮等對iNOS 具有抑制作用，減少血管壁和DNA 損傷。

因此，以葡萄為膳食添加能增強斷奶SD 大鼠血漿、腸道和肝臟對自由基的清除，提高腸道抗氧化能力。以葡萄為膳食添加劑評估大鼠在斷奶時期血漿、肝臟和腸道抗氧化酶系活性變化狀況及腸道抗氧化能力的改變，為進一步研究斷奶期哺乳動物中抗氧化狀況提供參考。

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