劉 蕊，袁 汀，王 美，張振秋

月礬中空栓是一種臨床用于治療婦科宮頸糜爛的中藥制劑，是普通栓劑的改良劑型。與普通栓劑相比，具有藥物更加穩(wěn)定、藥物一次性釋放、藥物速釋、達峰時間短、起效快、吸收利用率高、用藥方便等特點。月礬中空栓以苦參、蛇床子、兒茶、血竭、青黛等為主要成分，具有清熱解毒、活血止痛、化腐生肌、收斂止血的功效。宮頸糜爛的過程常常伴有炎癥或者不同程度的感染，本文研究了月礬中空栓和月宮普通栓對4 種婦科常見細菌的體外抑菌作用，并比較了2 種劑型的體外抑菌效力，為臨床用藥提供了實驗基礎(chǔ)和理論依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 YX-280AS 型手提式不銹鋼蒸汽消毒器(上海三申醫(yī)療器械有限公司);DNP9162 電熱恒溫培養(yǎng)箱(上海精宏實驗設(shè)備有限公司，太倉精宏儀器設(shè)備有限公司);SHP-450 生化培養(yǎng)箱(上海精宏實驗設(shè)備有限公司，太倉精宏儀器設(shè)備有限公司);SW-CJ-2FD 型潔凈工作臺(蘇凈集團蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司)。

1.2 試驗菌種 金黃色葡萄球菌(26003)、大腸埃希菌(44102)、銅綠假單胞菌(10104)、白色念珠菌(98001)均購自中國生物制品檢定所，經(jīng)活化、鑒定后取對數(shù)生長期菌液進行試驗。

1.3 培養(yǎng)基 除白色念珠菌使用真菌液體培養(yǎng)基和改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基外，其他3 種試驗菌均使用營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基和營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，各種培養(yǎng)基均按照中國藥典自制，經(jīng)121 ℃、0.1 mPa 滅菌30 min，備用。

1.4 藥物及試劑 月礬中空栓劑和月礬普通栓劑均為自制(批號:20120106、20120107)，所用試劑均為分析純。

2 方法和結(jié)果

2.1 供試品溶液的制備 取月礬中空栓和月礬普通栓各10 粒，分別精密稱定后計算平均粒重，50 ℃水浴使10 粒栓劑熔融，趁熱混勻，冷卻至室溫后精密稱重(6.25 g)，以滅菌水55 ℃水浴熔融，完全冷卻后過濾，取續(xù)濾液，定容至50 mL，流通蒸汽滅菌15 min 后，備用。

2.2 供試液濃度的篩選 分別取濃度為0.5、0.25、0.1、0.05 g/mL 的栓劑提取物進行預試驗，濃度為0.1、0.05 mg/L 時，藥物抑菌作用不明顯;濃度為0.5 mg/L 時，栓劑體積過大，無法提取定容，故確定供試液濃度為0.25 mg/L，既可保證產(chǎn)生適度抑菌作用，又便于實際操作。

2.3 菌液濃度的篩選 分別試用含菌數(shù)約為102、103、104、105CFU/mL 的菌懸液預試4 種供試液的抑菌作用，發(fā)現(xiàn)不同供試液對104CFU/L 的菌懸液均有明顯抑菌作用，并具有可比性，因此，將其作為菌液的試驗濃度。

2.4 最小抑菌濃度MIC(二倍稀釋法)的測定將2 種月礬栓劑供試液分別用液體培養(yǎng)基對倍稀釋，初始藥液濃度分別為0.25 g/mL，取12 ×75 mm具塞試管分4 組編號排列在試管架上，每組10 支，于每個試管中先加入無菌液體培養(yǎng)基2.0 mL，然后于第一管中加入滅菌的供試藥液2.0 mL，混勻后取出2.0 mL 加入第2 管中，依次稀釋，直到第8 管取出2.0 mL 棄去，每組前8 支稀釋管中分別加1 × 104CFU/mL 新鮮菌液0.1 mL。第9 管只加相應菌液作為陽性對照，以便觀察培養(yǎng)基是否適合菌種生長。第10 管中加入2.0 mL 供試藥液，混勻后取出2.0 mL 棄取，不加菌作為陰性對照，以便觀察供試藥液是否有污染。白色念珠菌組于28 ℃培養(yǎng)72 h，其他3 組于37 ℃培養(yǎng)48 h，然后將培養(yǎng)物1 mL 分別接種于營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基和改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基平板中，在陰性對照、陽性對照符合要求的前提下，分別觀察各平板，以菌數(shù)突然明顯下降的最低藥物濃度為MIC。結(jié)果月礬中空栓劑和月礬普通栓對4 種實驗菌均有抑菌作用，其中對白色念珠菌的抑菌作用最強，其他依次是大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌;中空栓劑與普通栓劑相比對銅綠假單胞菌的抑制效果無明顯差異，對金黃色葡萄球菌和大腸埃希菌的抑菌效力提高1 倍左右，對白色念珠菌的抑菌效力提高4 倍左右，結(jié)果見表1。

表1 月礬中空栓的最小抑菌濃度MIC(g/mL)

3 討論

根據(jù)月礬栓的功能主治范圍，本試驗選用婦科臨床常見的銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌和白色念珠菌4 種致病菌，試驗中所用菌株均應為相應菌種凍干粉接種于適宜培養(yǎng)基后的5 代以內(nèi)轉(zhuǎn)種菌，以保證其未變異，并具有足夠活力。稀釋至適宜濃度的菌液，應為每次試驗前新制，并保證配制后1h 內(nèi)使用完畢，以便將環(huán)境對菌液濃度的影響降至最低。

由于月礬栓劑提取物顏色較深，導致判斷試驗管中液體是否澄清有一定難度，因此，進一步將液體培養(yǎng)物接終于適宜培養(yǎng)基平板中，通過菌數(shù)變化，更加直觀和準確地評價樣品的抑菌效力。

本研究結(jié)果表明，月礬栓制成中空栓劑后，總體抑菌效力加強，這是因為普通栓劑僅由藥材原粉與基質(zhì)加熱混合制成，影響部分有效成分的溶出，進而影響藥物抑菌性能的發(fā)揮［1］。中空栓劑中，除性質(zhì)不穩(wěn)定及礦物質(zhì)類藥物之外，大部分藥材經(jīng)過提取，有效成分溶解于液體中，更易于發(fā)揮抑菌作用［2］。月礬栓劑型改進后對不同菌種抑菌作用的影響有所差別，這可能與方中各藥物主要抑菌成分的溶解性、穩(wěn)定性等原因有關(guān)，還有待于進一步研究探討。

［1］ 張美玲，魏蓮花，田洹，等.甘肅黃芩、苦參、金銀花對深部酵母樣真菌感染的體外抑菌試驗研究［J］.中華醫(yī)院感染學雜志，2009，9(2):149-150.

［2］ 周新蓓，張志國.30%苦參不同溶劑提取物對白色念珠菌體外抑制作用的研究［J］.中國現(xiàn)代藥物應用，2008，2(7):29-31.