陳 瞳，崔凌凌，王希波，李長貴

(青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院，山東青島266003)

高尿酸血癥是以嘌呤代謝紊亂為主的機(jī)體代謝性疾病，是導(dǎo)致痛風(fēng)、痛風(fēng)性腎病及尿酸結(jié)石的生化基礎(chǔ)，且與人體多種代謝性疾病密切相關(guān)［1，2］，如糖尿病、血脂異常、肥胖等。研究［3～5］表明，高尿酸血癥與某些腎臟、心血管疾病的發(fā)生發(fā)展亦存在聯(lián)系。隨著我國社會(huì)生活水平的逐漸提高，加之部分地區(qū)高嘌呤攝入的飲食習(xí)慣，致使高尿酸血癥的發(fā)病率正在逐年升高［6～8］。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)對(duì)于開展高尿酸血癥發(fā)病機(jī)制的研究、在高尿酸血癥基礎(chǔ)上引發(fā)痛風(fēng)及其他相關(guān)疾病的病理研究和治療高尿酸血癥新藥的研發(fā)具有重大意義?，F(xiàn)今國內(nèi)對(duì)于高尿酸血癥動(dòng)物模型的建立仍存在爭議:大鼠為動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中最常見的動(dòng)物，但大鼠體內(nèi)存在尿酸酶，長期尿酸刺激會(huì)激活尿酸酶活性［9］，無法將尿酸維持在較高水平。利用抑制尿酸排泄的藥物或者尿酸酶抑制劑的藥物制備動(dòng)物模型，與臨床上原發(fā)高尿酸血癥的發(fā)病病因不符，且乙胺丁醇、煙酸等尿酸排泄抑制劑對(duì)腎損害嚴(yán)重［10］，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物存活率低。酵母粉可引起機(jī)體嘌呤代謝紊亂，配合腺嘌呤灌胃可以快速升高血尿酸。而腺嘌呤對(duì)機(jī)體腎臟有很強(qiáng)毒性，尿酸升高的同時(shí)伴有腎功能損害［11］，亦不符合人體高尿酸血癥形成原理。2012年10月11日～2013年1月6日，我們用不同劑量腺嘌呤建立慢性持續(xù)性高尿酸血癥大鼠模型并觀察了其腎臟損傷情況?，F(xiàn)介紹如下。

1 材料與方法

1．1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 雄性 Wistar大鼠50只，體質(zhì)量(200±20)g，購自山東魯抗醫(yī)藥股份有限公司，飼于青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心SPF級(jí)動(dòng)物飼養(yǎng)房，實(shí)驗(yàn)開始前普通飼料飼養(yǎng)1周，實(shí)驗(yàn)中大鼠自由飲食。

1．2 材料與設(shè)備 氧嗪酸鉀，羧甲基纖維素鈉，尿酸測定試劑盒，肌酐及尿素氮測定試劑盒，腺嘌呤，甲醛溶液，酵母粉飼料，全自動(dòng)生化分析儀。

1．3 大鼠灌胃液的制備 將腺嘌呤用蒸餾水溶解成4 g/L的懸濁液。將羧甲基纖維素鈉粉劑用生理鹽水，配成8 g/L的乳狀溶液，再加入氧嗪酸鉀配成終濃度為25 g/L的乳懸液。

1．4 大鼠模型建立方法 大鼠普通飼料飼養(yǎng)1周，適應(yīng)環(huán)境后，隨機(jī)分為持續(xù)高嘌呤組20只、間隔高嘌呤組20只、正常對(duì)照組10只。按參考文獻(xiàn)［12］的造模方法，持續(xù)高嘌呤組以質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%的酵母粉飼料飼養(yǎng)，給予腺嘌呤100 mg/kg每天灌胃;間隔高嘌呤組同樣以質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%的酵母粉飼料飼養(yǎng)，給予腺嘌呤100 mg/kg隔天灌胃;對(duì)照組普通飼料喂養(yǎng)，并以同體積蒸餾水灌胃。于實(shí)驗(yàn)第6周調(diào)整灌胃方法:持續(xù)高嘌呤組給予腺嘌呤50 mg/kg每天灌胃;間隔高嘌呤組給予腺嘌呤50 mg/kg隔天灌胃;同時(shí)，持續(xù)高嘌呤組與間隔高嘌呤組給予100 mg/(kg·d)氧嗪酸鉀，分2次(每天上午8時(shí)與下午4時(shí))腹部皮下注射，并繼續(xù)飼以質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%的酵母粉飼料。

1．5 各組大鼠血尿酸、肌酐、尿素氮檢測 于模型建立過程中的第 0、2、4、6、8、10、12 周早晨，大鼠禁食14 h后腹腔注射水合氯醛麻醉，內(nèi)眥靜脈采血1．5～2．0 mL，室溫靜置凝血，3 500 r/min 離心4 min，取300μL血清，用全自動(dòng)生化分析儀測定尿酸、肌酐、尿素氮。

1．6 各組大鼠腎臟病理檢查 于模型建立過程中的第12周后，大鼠腹腔注射水合氯醛麻醉，摘取各組大鼠腎臟，4%多聚甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋后制成3μm厚切片，HE染色，光鏡(×400)下觀察。

1．7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用 SPSS17．0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料用ˉx±s表示，采用單因素方差分析作統(tǒng)計(jì)推斷，多組間比較方差齊用LSD后續(xù)處理、方差不齊用Tamhane處理。P≤0．05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2．1 各組大鼠一般情況比較 隨造模時(shí)間的延長，腺嘌呤組大鼠飲水量逐漸增加，同時(shí)體質(zhì)量下降(見表1)，尿量逐漸增多，體毛干枯、豎立，活動(dòng)減少。

表1 各組大鼠體質(zhì)量比較(g，ˉx±s)

2．2 各組大鼠血尿酸水平比較 結(jié)果見表2。

2．3 各組大鼠血肌酐、尿素氮水平比較 結(jié)果見表3、4。

2．4 各組大鼠腎臟組織病理變化 肉眼觀察，正常對(duì)照組大鼠腎臟表面光滑無腫脹，呈紅褐色，質(zhì)軟有光澤，切面皮、髓質(zhì)界線清晰;持續(xù)高嘌呤組大鼠腎臟明顯增大，兩腎灰白，表面呈顆粒狀，皮、髓質(zhì)交界不清;間隔高嘌呤組大鼠腎臟略大，表面散在白色斑點(diǎn)，切面皮質(zhì)變薄，髓質(zhì)可見放射狀白線，皮、髓質(zhì)交界尚清。HE染色顯示，正常對(duì)照組腎小囊腔內(nèi)未見異物沉積，腎曲小管、集合管亦未見異常改變;兩模型組腎小球萎縮、數(shù)量減少，腎小管擴(kuò)張，腎小管及間質(zhì)部位大量尿酸鹽結(jié)晶沉積，間質(zhì)內(nèi)有炎性細(xì)胞浸潤，間隔高嘌呤組腎組織改變略輕，尿酸鹽沉積較少。

3 討論

表2 各組大鼠血尿酸比較［c/(μmol·L)，ˉx ±s］

表3 各組大鼠血肌酐水平比較［c/(μmol·L)，ˉx ±s］

表4 各組大鼠血尿素氮水平比較［c/(μmol·L)，ˉx±s］

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)是研究高尿酸血癥發(fā)病機(jī)制及治療方法的重要途徑。建立高尿酸血癥動(dòng)物模型的主要方法有以下幾種［13］:①單用腺嘌呤灌胃。②腺嘌呤灌胃加酵母飼料飼養(yǎng)。③腺嘌呤加乙胺丁醇、煙酸等抑制尿酸排泄藥物。④尿酸酶抑制劑氧嗪酸鉀灌胃或皮下注射。本實(shí)驗(yàn)綜合幾種常用造模方法，在酵母飼料的喂養(yǎng)環(huán)境下使用不同劑量腺嘌呤配伍氧嗪酸鉀制作高尿酸血癥大鼠模型，觀察其血尿酸水平變化及腎組織損害情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，大劑量持續(xù)給予大鼠腺嘌呤灌胃，2周后即可升高血尿酸水平并保持在較高水平，但大鼠一般情況較差，體質(zhì)量明顯下降，且出現(xiàn)腎功能的改變;而間隔給予大鼠低劑量腺嘌呤灌胃，在升高尿酸的同時(shí)，大鼠腎功能改變小，腎組織損害出現(xiàn)晚、程度輕，大鼠體質(zhì)量等一般情況無明顯變化。人體主要靠腎臟來排泄尿酸，高劑量腺嘌呤構(gòu)建高尿酸大鼠模型與臨床常見的原發(fā)性高尿酸血癥不符，較低劑量腺嘌呤配伍氧嗪酸鉀能使尿酸升高且對(duì)腎功能改變輕，與臨床原發(fā)高尿酸血癥更相似。間隔高嘌呤組出現(xiàn)大鼠腎臟病理改變是長期血尿酸水平升高所致還是腺嘌呤對(duì)腎的毒性作用，需要后續(xù)實(shí)驗(yàn)來驗(yàn)證。

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