蔡建平周湘鴻*

（1 河南省人民醫(yī)院肝膽外科，河南 鄭州 450014；2 河南省人民醫(yī)院心血管內(nèi)科，河南 鄭州 450014）

PTTG和p27Kipl在肝癌中的表達(dá)及其臨床意義

蔡建平1周湘鴻2*

（1 河南省人民醫(yī)院肝膽外科，河南 鄭州 450014；2 河南省人民醫(yī)院心血管內(nèi)科，河南 鄭州 450014）

目的 分析垂體腫瘤轉(zhuǎn)化基因（PTTG）和p27Kipl基因在原發(fā)性肝細(xì)胞性肝癌（HCC）中的表達(dá)及其臨床意義。方法 應(yīng)用免疫組化S-P法檢測48例HCC及癌旁肝癌組織中PTTG蛋白、p27Kipl蛋白的表達(dá)情況。結(jié)果 HCC、癌旁和正常肝組織的PTTG蛋白陽性表達(dá)率分別是70.8%（34/48）、91.7% （44/48），二者之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），且PTTG蛋白在癌旁中的表達(dá)明顯高于在HCC中的表達(dá)（P＜0.05）；HCC、癌旁組織的p27kip1蛋白陽性表達(dá)率分別是20.8%（10/48） 83.3%（ 40/48），二者之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。34例PTTG表達(dá)陽性組織中有10例見p27kip1表達(dá)陽性，而14例PTTG表達(dá)陰性組織中有9例見p27kip1陽性表達(dá)，二者比較差異有顯著性意義（P＜0.05）。結(jié)論 PTTG和p27Kipl異常表達(dá)與HCC的發(fā)展密切相關(guān)，在HCC的發(fā)展過程中起重要的作用。

肝腫瘤；垂體腫瘤轉(zhuǎn)化基因（PTTG）；p27Kipl基因；免疫組織化學(xué)

1 資料與方法

1.1 標(biāo)本來源

收集河南省人民醫(yī)院2006年12月至2013年6月手術(shù)患者經(jīng)病理學(xué)檢查證實(shí)為肝細(xì)胞癌標(biāo)本48例，所有標(biāo)本術(shù)前均未結(jié)受化療、放療，有完整病理學(xué)資料。男35例，女13例，年齡在28～80歲，平均62.5歲，18例有門脈癌栓，30例有完整包膜，18例包膜不完整或無包膜；小肝癌（≤5cm）28例，大肝癌（＞5cm）20例；術(shù)前肝內(nèi)轉(zhuǎn)移32例，無肝內(nèi)轉(zhuǎn)移16例。

1.2 主要試劑

兔抗人PTTG和鼠抗人p27kip1多克隆抗體，購自北京中杉金橋生物試劑有限公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

采用免疫組織化學(xué)鏈霉卵白素-生物素-辣根過氧化物酶復(fù)合物（streptavidin peroxidase conjugated method，SP）法檢測PTTG、P27kip1蛋白表達(dá)，以試劑盒中已知陽性切片為陽性對照，以PBS液（pH=7.4）代替一抗為陰性對照?？筆TTG抗體稀釋度為 1∶20，抗p27kip1抗體稀釋度為1∶50，操作按試劑盒說明書要求步驟進(jìn)行。

1.4 PTTG和P27kip1蛋白陽性表達(dá)的判定

用雙盲法對染色結(jié)果進(jìn)行評估，PTTG以腫瘤細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)棕色顆粒為陽性細(xì)胞，P27kip1以細(xì)胞核出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性細(xì)胞，分別在400倍、200倍光鏡下至少觀察5個(gè)視野，計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞中腫瘤陽性細(xì)胞＞10%定義為陽性表達(dá)，≤5%為陰性表達(dá)。

1.5 統(tǒng)計(jì)方法

計(jì)量數(shù)據(jù)表示為均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（ ±s）表示，采用χ2檢驗(yàn)及相關(guān)分析。數(shù)據(jù)用 SPSS 11.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行處理。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié) 果

2.1 PTTG蛋白在HCC 及癌旁肝組織中的表達(dá)

48例HCC癌組織PTTG蛋白陽性34例，陽性率70.8 %，癌旁組織中陽性44例，陽性率為91.7%，后者高于前者，差異有顯著性（P＜0.05）。癌組織中陽性細(xì)胞呈彌漫性、小巢狀或散在分布。在胞質(zhì)內(nèi)PTTG蛋白主要呈彌漫性全漿分布，有的呈包涵體狀，透明細(xì)胞性肝癌細(xì)胞中分布于胞膜下。

2.2 p27kip1蛋白在HCC 及癌旁肝組織中的表達(dá)

p27kip1蛋白陽性表達(dá)在20.8%（10/48）的肝癌組織內(nèi)見到，陽性表達(dá)顆粒主要位于細(xì)胞核，在同一組織標(biāo)本中p27kip1表達(dá)呈均一性，且隨著腫瘤惡性程度的增高，肝癌組織中p27kip1蛋白的表達(dá)明顯降低，而癌旁組織內(nèi)為83.3%（40/48），其表達(dá)顯著高于腫瘤組織（P＜0.05）。

2.3 PTTG蛋白及P27kip1蛋白表達(dá)與肝癌患者臨床病理學(xué)參數(shù)之間的關(guān)系

見表1。

2.4 PTTG蛋白及p27kip1蛋白表達(dá)在HCC中的相關(guān)性

表1 臨床病理學(xué)參數(shù)與PTTG蛋白及P27kip1蛋白表達(dá)間的關(guān)系

34例PTTG表達(dá)陽性組織中有10例見P27kip1表達(dá)陽性（29.4%），而14例PTTG表達(dá)陰性組織中有9例見P27kip1陽性表達(dá)（64.3%），二者比較差異有顯著性意義（P＜0.05）。 經(jīng)四格表pearson等級(jí)相關(guān)分析，肝癌組織中二者表達(dá)的列聯(lián)系數(shù)r=-0.308，說明二者有明顯負(fù)相關(guān)性（P＜0.05）。

3 討 論

1997年，Lin Pei等[1]利用差異顯示PCR、Northern Blot、DNA測序等分子生物學(xué)技術(shù)分離出垂體瘤轉(zhuǎn)化基因（PTTG），PTTG是一種強(qiáng)有力的腫瘤轉(zhuǎn)化基因，在多種腫瘤細(xì)胞及腫瘤組織中均有高表達(dá)?？赏ㄟ^多種機(jī)制參與腫瘤的形成與發(fā)展: 阻止姐妹染色體分離；誘導(dǎo)細(xì)胞轉(zhuǎn)化；促進(jìn)其他原癌基因及促瘤因子的表達(dá)；促進(jìn)b-FGF 參與的腫瘤血管生成等[2-6]。金中元等[6]利用免疫組織化學(xué)SP法和原位雜交技術(shù)檢測61例原發(fā)性肝細(xì)胞癌中PTTGG蛋白和mRNA的表達(dá)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，原發(fā)性肝細(xì)胞癌組織中陽性率為70.8%，明顯低于癌旁組織中陽性表達(dá)率91.7%，與原發(fā)性肝細(xì)胞癌的病理分級(jí)無關(guān)。另外 PTTG1 參與凋亡的調(diào)控并誘導(dǎo)染色體非整倍體形成等[6]。本實(shí)驗(yàn)中PTTG 蛋白在HCC中陽性表達(dá)率為72.0%，顯著高于正常對照組（P＜0.01）。與患者性別、年齡、腫塊直徑及是否伴門靜脈癌栓無關(guān)，與是否伴肝內(nèi)轉(zhuǎn)移有關(guān)。高頻率過度表達(dá)表明PTTG 蛋白在人肝組織癌變過程中可能起重要作用，這與金中元等研究結(jié)果相符[6]。

p27kip1是細(xì)胞周期負(fù)性調(diào)控因子，主要抑制Cy-clinE-CDK2和cyclind-CDK4等G1期激酶復(fù)合物，阻滯細(xì)胞于G1期，防止細(xì)胞過度增殖并與細(xì)胞凋亡有著密切的關(guān)系，是公認(rèn)的抑癌基因[7]。Wang等[8]研究發(fā)現(xiàn)p27kipl通過磷酸化Statl抑制Ras系統(tǒng)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)而抑制CDK，進(jìn)而抑制細(xì)胞從G1期到S期的轉(zhuǎn)變。p27kip1絲氨酸10的磷酸化還與細(xì)胞運(yùn)動(dòng)相關(guān)，Wang等[9]體外研究證明p27ser10的磷酸化在惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞的遷移中起重要作用。Katayose 等[10]報(bào)道，p27kip1的過度表達(dá)可以誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，認(rèn)為p27Kipl可能在HCC發(fā)生早期起負(fù)調(diào)控作用。我們的結(jié)果顯示，p27Kipl在肝癌組織中的陽性表達(dá)率為20.8%，而在癌旁組織中的陽性表達(dá)率為80%，二者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。與患者性別及年齡無關(guān)，而與腫塊直徑、門靜脈癌栓及是否伴肝內(nèi)轉(zhuǎn)移有關(guān)。可以說明，p27Kipl蛋白低表達(dá)，對肝癌細(xì)胞的負(fù)調(diào)控作用減弱，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞生長。

PTTG和p27Kipl在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、浸潤和轉(zhuǎn)移等有密切關(guān)系，并且在腫瘤的增值和凋亡機(jī)制中起著關(guān)鍵作用。在人類多種惡性腫瘤中均可以檢測到PTTG和p27Kipl蛋白的異常表達(dá)，PTTG和p27Kipl的異常表達(dá)可能共同促進(jìn)腫瘤的發(fā)生和進(jìn)展。但是PTTG和 p27Kipl在HCC組織中表達(dá)的研究相對較少。本研究的結(jié)果顯示：經(jīng)配對四格表Spearsman等級(jí)相關(guān)分析，肝癌組織中二者表達(dá)的列聯(lián)系數(shù)r=-0.308，說明PTTG和p27Kipl在肝癌中的表達(dá)有明顯負(fù)相關(guān)性（P＜0.05），推測二者可能共同參與肝癌的發(fā)生發(fā)展，聯(lián)合檢測PTTG和p27Kipl蛋白的表達(dá)對于預(yù)測HCC的惡性潛能、判斷預(yù)后和為肝癌的治療有望提供新的靶點(diǎn)，有一定的臨床價(jià)值和現(xiàn)實(shí)意義。

參考譯文

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[3] Genkai N,Homma J,Sano M,et al.Increased expression of pituitary tumor-transforming gene (PTTG)-1 is correlated with poor prognosis in glioma patients[J].Oncol Rep,2006,15(6): 1569-1574.

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Expression of PTTG and p27Kipl Protein in Hepatocellular Carcinoma and Its Significance

CAI Jian-ping1, Zhou Xiang-hong2
(1 Department of Hepatobiliary Surgery, Henan Provincial People’s Hospital, Zhengzhou 451000, China; 2 Department of Cardiology, Henan Provincial People’s Hospital, Zhengzhou 451000, China)

Objective To investihate the expression of PTTG and p27Kipl protein in primary hepatocellular carcinoma(HCC). Methods The expression of PTTG and Survivin in 48 cases with HCC and their neighboring noncancerous tissues were obtained. Immunohistochemistry was used to detect protein expressions of PTTG and P27kip1.Results The positive rate of PTTG in cancer tissues and their neighboring noncancerous tissues was 70.8%(34/48),91.7 %(44/48) respectively, with significant difference (P＜0.05). The expression of PTTG in cirrhosis tissue was higher than that in cancer tissue(P＜0.05). The positive rate of p27kip1 in cancer tissue and their neighboring noncancerous tissues was20.8%( 10/48),83.3%(40/48)respectively,with significant difference among them (P＜0.05). The expression of p27kip1 in their neighboring noncancerous tissues was higher than that in cancer tissue and normal tissue(P＜0.05). Conclusion The malexpression of PTTG and p27kip1 is closely associated with the development of HCC.

Liver neoplasms; PTTG; p27Kipl; Immunhistochemistry

R735.7

B

1671-8194（2013）29-0031-02

*通訊作者:E-mail: zhouxianghongsuc@163.com