鄒玉鳳

（吉林省腫瘤醫(yī)院， 吉林 長春 130021）

淺談fish技術(shù)用于檢測乳腺癌HER2基因擴增的臨床研究

鄒玉鳳

（吉林省腫瘤醫(yī)院， 吉林 長春 130021）

目的 探討fish技術(shù)用于檢測乳腺癌HER2基因擴增的臨床應用價值。方法 本次醫(yī)學觀察選擇我院2010年1月至2012年1月之間收治的51例乳腺癌患者為觀察對象，所有患者均接受fish技術(shù)進行HER2基因擴增檢測，回顧分析患者的臨床檢測結(jié)果。結(jié)果 fish技術(shù)HER2基因有無擴增患者蛋白表達檢測結(jié)果對比統(tǒng)計學差異明顯（P＜0.05）。結(jié)論 由本次臨床研究結(jié)果可知，fish技術(shù)應用于乳腺癌HER2基因擴增的臨床檢測過程中，具有較高的應用價值。

fish技術(shù)；乳腺癌；HER2基因擴增

乳腺癌是臨床上較為常見的一種女性惡性腫瘤，且該疾病的發(fā)生率呈現(xiàn)出了逐漸上升的趨勢。HER2原癌基因是乳腺癌臨床研究的重點。醫(yī)學研究結(jié)果證實，乳腺浸潤性導管癌患者中，約有20%～30%存在HER2基因過表達現(xiàn)象。HER2基因擴增的發(fā)生會對乳腺癌患者的預后、病情發(fā)展和發(fā)生產(chǎn)生直接的影響，同時也是該疾病藥物治療方案制定的主要依據(jù)。隨著我國臨床醫(yī)學研究技術(shù)的不斷發(fā)展，熒光原位雜交法（fish）檢測技術(shù)逐漸被引入了乳腺癌HER2基因擴增的臨床檢查和治療過程中，并取得了較為滿意的效果。本次臨床研究對fish技術(shù)用于檢測乳腺癌HER2基因擴增的臨床價值進行了分析，現(xiàn)將本次臨床研究結(jié)果報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

本次醫(yī)學觀察選擇我院2010年1月至2012年1月之間收治的51例乳腺癌患者為觀察對象，患者年齡范圍在35～75歲，平均年齡為（56.6 ±12.4）歲，乳腺癌患者組織分級結(jié)果為：10例III級，36例II級，5例I級。其中，26例患者未發(fā)生腋淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，25例患者發(fā)生腋淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。所有患者乳腺癌組織均使用10% 的中性福爾馬林進行固定，并行石蠟包埋，4μm切片，HE染色檢查確診為乳腺癌，且符合世界衛(wèi)生組織制定的臨床診斷標準。

1.2 方法

1.2.1 實驗試劑

本次臨床研究選用福州邁新生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的免疫組化S-P試劑盒，以及北京金菩嘉生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的HER2-FISH-TM監(jiān)測試劑盒。

1.2.2 乳腺癌組織切片免疫組化S-P法HER2蛋白表達檢測

依據(jù)免疫組化S-P試劑盒的說明書，嚴格依據(jù)檢測程序進行HER2切片蛋白表達檢測。檢測結(jié)果評定標準為：光鏡檢查陽性信號，陽性反應度定位于細胞膜部位，并呈棕黃色顆粒。高倍顯微鏡檢查10個視野，若30%以上的腫瘤細胞有較為完整且較強的細胞膜染色，則確診為強陽性（+++）；若30%以上的腫瘤細胞有較為完整且較弱的細胞膜染色，則確診為陽性（++）；若30%以上不完整的腫瘤細胞發(fā)生染色，則確診為弱陽性（+）；若30%以下的腫瘤細胞發(fā)生染色或未見染色，則確診為陰性（—）。

1.2.3 HER2基因擴增fish法檢測

預處理程序為：將石蠟包埋和福爾馬林固定的乳腺癌組織進行4μm多塊切片，分別將其放置在利用氨基烷基硅烷處理過的載玻片中，以65℃左右的溫度過夜烘烤組織切片，在室溫條件下將其置于二甲苯中進行脫蠟處理，乙醇梯度復水，使用30%的W/V酸性亞硫酸鈉在50℃以下的溫度中對組織切片進行相應處理，37℃條件下消化200μg/mL蛋白酶K，在室溫條件下行0.1MHCl浸泡，乙醇梯度脫水，丙酮浸泡，玻片自然干燥后，通過加熱將其溫度提高到56℃。

FISH檢測技術(shù)：依據(jù)FISH檢測技術(shù)的基本程序嚴格進行操作。梯度乙醇脫水，組織玻片變性，自然風干玻片，在45℃～50℃的烤片機上，對變性好的探針雜交混合物進行預熱處理，并置于42℃的保溫箱中留置一夜，使用甲酰胺洗液進行洗片，玻片置于暗處進行自然干燥，DAPI復染，將玻片置于熒光顯微鏡下進行觀察。

檢測結(jié)果判斷標準：異常HER2基因擴增細胞，指的是每個間期細胞核中存在2及以上的綠色信號，以及超過2個的紅色信號；正常細胞，指的是單個間期細胞核中分別存在2個綠色信號和紅色信號。對30個細胞進行計數(shù)，并計算Ratio值，Ratio值為30個細胞核中紅信號之和與30個細胞核中綠信號之和的比值。若Ratio值＞2.2則結(jié)果為陽性，證實組織樣本發(fā)生了HER 2基因擴增；若Ratio值＜1.8則結(jié)果為陰性，證實組織樣本未發(fā)生HER2基因擴增；若Ratio值介于1.8～2.2，則需以FISH技術(shù)重新進行實驗，并對結(jié)果進行最終判斷，或是將計數(shù)細胞數(shù)量提高到100個。

1.3 統(tǒng)計學處理

使用SPSS17.0軟件對本次醫(yī)學研究數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學分析。使用（）表示計量資料，使用單因素方差分析法對數(shù)據(jù)進行比較分析，使用χ2檢驗方法對計數(shù)資料進行統(tǒng)計學分析，若P＜0.05，則表示數(shù)據(jù)之間差異具有明顯的統(tǒng)計學意義[1]。

2 結(jié) 果

乳腺癌HER2基因有無擴增fish技術(shù)蛋白表達檢測結(jié)果對比，具有明顯的統(tǒng)計學差異（P＜0.05）。如表1所示。

表1 乳腺癌HER2基因有無擴增的蛋白表達結(jié)果分析[n/%]

3 討 論

HER2基因?qū)儆谝环N人體的原位基因，主要定位在人染色體17q21之中[2]。HER2基因過表達的發(fā)生一方面會直接影響患者腫瘤的發(fā)生和發(fā)展，另一方面，也是腫瘤患者臨床預后效果的主要評估指標，同時是輔助化療和曲妥珠單抗治療的主要參考依據(jù)，具有較高的HER2基因擴增檢測準確性，F(xiàn)ISH檢測技術(shù)是現(xiàn)階段臨床上較為常用的一種HER2基因擴增臨床檢測方法[3]，然而，由于不同患者抗體存在較大的差異，抗原修復效果也會受到多重因素的影響，進而產(chǎn)生一定的差異，不同醫(yī)院之間臨床檢測結(jié)果存在較大的差異[4]。原癌基因Her2的過表達，會賦予腫瘤細胞多方面的生物學優(yōu)勢，HER2腫瘤蛋白屬于一種跨膜受體蛋白，為表皮生長因子受體系統(tǒng)中的一部分，能夠提高信號轉(zhuǎn)導通路中酪氨酸激酶的活性，因而會直接受到化療方案選擇、預后、遠處轉(zhuǎn)移、侵襲性、生存期等因素的影響[5]。

臨床醫(yī)學研究結(jié)果證實，HER2基因高表達不僅存在于乳腺癌患者中，肝、胃、肺、卵巢等腫瘤患者的HER2基因擴增發(fā)生率也較高，患者預后和腫瘤進展會直接受到HER2基因擴增的影響，且擴增程度越嚴重，患者預后越差，因而可以作為預后效果的一項評價指標[6]。

[1] 白艷峰.雙探針顯色和熒光原位雜交法檢測乳腺癌HER2基因狀態(tài)和17號染色體的分析[D].杭州:浙江大學,2010.

[2] 呂亞麗.FISH技術(shù)檢測乳腺癌HER2基因擴增的臨床應用[C].中華醫(yī)學會,2010:217-218.

[3] 李亞卓,李冰.熒光原位雜交檢測胃癌中HER2基因狀態(tài)[J].診斷病理學雜志,2009,16(3):171-173.

[4] 曾宣,趙大春.熒光原位雜交檢測乳腺癌HER2基因狀態(tài)[J].中華病理學雜志,2005,34(11):701-702.

[5] 王曉蘭.FISH在乳腺癌組織HER2/neu原癌基因檢測上的應用及其臨床意義的研究[J].中國醫(yī)科大學學報,2008,37(5):664-666.

[6] 呂亞麗,鐘梅.335例乳腺癌HER2基因擴增及17號染色體多體的臨床病理學分析[J].診斷病理學雜志,2008,15(3):169-173.

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1671-8194（2013）27-0090-02