何俊婷王曉博曹愛(ài)蘭* 翟 帆惠選柱王景峰

（1 陜西新藥技術(shù)開(kāi)發(fā)中心，陜西 西安 710075；2 陜西中藥研究所，陜西 西安 710075；3 陜西醫(yī)藥控股集團(tuán)山海丹制藥有限責(zé)任公司，陜西 西安 710075）

魚(yú)腥草穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)中揮發(fā)油變化情況的研究

何俊婷1王曉博1曹愛(ài)蘭2* 翟 帆1惠選柱3王景峰3

（1 陜西新藥技術(shù)開(kāi)發(fā)中心，陜西 西安 710075；2 陜西中藥研究所，陜西 西安 710075；3 陜西醫(yī)藥控股集團(tuán)山海丹制藥有限責(zé)任公司，陜西 西安 710075）

目的 研究魚(yú)腥草藥材中揮發(fā)油量和甲基正壬酮含量隨時(shí)間變化的規(guī)律，為確定魚(yú)腥草適宜的貯藏條件及期限提供科學(xué)依據(jù)。方法 采用加速和長(zhǎng)期穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)考察魚(yú)腥草的穩(wěn)定性，測(cè)定不同貯藏時(shí)期魚(yú)腥草中揮發(fā)油含量，并采用氣相色譜法測(cè)定魚(yú)腥草中甲基正壬酮的含量。結(jié)果 經(jīng)加速試驗(yàn)，魚(yú)腥草揮發(fā)油含量降幅低于3.85%，甲基正壬酮含量下降4.06%～4.76%。經(jīng)長(zhǎng)期穩(wěn)定性試驗(yàn)，甲基正壬酮含量下降3.25%～4.76%，揮發(fā)油下降1.20%～1.28%。結(jié)論 經(jīng)穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)，魚(yú)腥草中揮發(fā)油量和甲基正壬酮含量在考察期內(nèi)均略有降低，但未發(fā)生顯著變化。

魚(yú)腥草；穩(wěn)定性；揮發(fā)油；甲基正壬酮

魚(yú)腥草是三白草科植物蕺菜 Houttuynia cordata Thunb.的新鮮全草或干燥地上部分。具有清熱解毒，排膿消癰，利尿通淋功能[1]。揮發(fā)油是魚(yú)腥草的有效成分之一[2]，通過(guò)水蒸氣蒸餾得到的揮發(fā)油為藥效成分的制劑有魚(yú)腥草注射液、魚(yú)金注射液等，廣泛應(yīng)用于消炎抗菌。因揮發(fā)油成分的不穩(wěn)定性，藥材的采收、加工、貯藏對(duì)其含量影響較大。而藥材是藥品的源頭，原料藥質(zhì)量直接保證終產(chǎn)品的質(zhì)量，從而影響藥品的安全性。魚(yú)腥草藥材的揮發(fā)油成分的控制研究較少，注射液生產(chǎn)企業(yè)使用該原料時(shí)缺乏原料選擇及貯藏依據(jù)，給產(chǎn)品埋下了安全隱患。2006年，國(guó)家藥品不良反應(yīng)中心因魚(yú)腥草類(lèi)制劑的不良反應(yīng)問(wèn)題，暫停了7個(gè)魚(yú)腥草類(lèi)制劑的使用，并停止受理和審批其各類(lèi)制劑的注冊(cè)申請(qǐng)。為恢復(fù)該類(lèi)產(chǎn)品的生產(chǎn)[3]，保證魚(yú)腥草類(lèi)注射劑安全、可靠、穩(wěn)定、可控，企業(yè)做了大量的研究工作，首要任務(wù)就是控制原料的質(zhì)量。筆者通過(guò)氣相色譜法檢測(cè)甲基正壬酮含量[4]，將其作為指標(biāo)性成分，對(duì)魚(yú)腥草藥材加工及儲(chǔ)藏過(guò)程中揮發(fā)油的穩(wěn)定性進(jìn)行考察。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

電子分析天平（AG-135，德國(guó)梅特勒）；島津GC-17A氣相色譜儀；PEG毛細(xì)管柱（30m×0.25mm×0.25μm）；水分測(cè)定管，揮發(fā)油提取器，冷凝裝置，圓底燒瓶（西安玻璃儀器廠）；WD-A藥物穩(wěn)定性檢查儀（天津藥典標(biāo)準(zhǔn)儀器廠）。

1.2 試藥

干魚(yú)腥草（三白草科植物蕺菜Houttuynia cordata Thunb.干燥地上部分，陜西漢中城固縣）；甲基正壬酮（111640-201005，中國(guó)藥品生物制品檢定所）；乙酸乙酯（分析純，天津市富宇精細(xì)化工有限公司）

2 方法與結(jié)果

2.1 魚(yú)腥草藥材的采收與干燥

魚(yú)腥草2009年9月5日采自陜西漢中城固縣，晴天采收，用刀具割取地上部分植株或用手直接拔取地上部分。采收后的藥材除去雜質(zhì),抖凈泥沙，清洗。干燥條件為室溫條件下（溫度為25℃左右）自然干燥。

2.2 揮發(fā)油量測(cè)定

取干魚(yú)腥草約300g置圓底燒瓶中，加8倍藥材量的水，搖勻。連接揮發(fā)油測(cè)定裝置，回流提取6h，按規(guī)定[6]方法操作讀取揮發(fā)油量。

2.3 甲基正壬酮含量測(cè)定

2.3.1 樣品處理

精密稱(chēng)取干魚(yú)腥草25g，置圓底燒瓶中，加水250mL，連接揮發(fā)油測(cè)定器，自測(cè)定器上端加水使充滿(mǎn)刻度部分，再加乙酸乙酯約3mL，連接回流冷凝管。加熱回流2h，停止加熱，放置片刻，分取乙酸乙酯層，測(cè)定器再用乙酸乙酯洗滌3次，每次1mL，合并洗滌液，定量轉(zhuǎn)移至10mL量瓶中，并加乙酸乙酯稀釋至刻度，搖勻。

2.3.2 對(duì)照品溶液制備

精密稱(chēng)定甲基正壬酮對(duì)照品108.6mg，置于100mL容量瓶中，加乙酸乙酯定容至刻度，制成每1mL中含1.088mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

2.3.3 色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

以聚乙二醇（PEG）—20M為固定液，涂布濃度為10%；柱溫（120±5）℃；進(jìn)樣口溫度230℃；檢測(cè)器溫度230℃；分流比為5∶1；程序升溫：初始120℃，保持15min，以每分鐘5℃升至170℃，保持10min；進(jìn)樣量為4μL；理論板數(shù)按甲基正壬酮峰計(jì)算，應(yīng)不低于1000。

2.4 方法學(xué)考察

2.4.1 線性關(guān)系考察

精密吸取對(duì)照品溶液，配置成甲基正壬酮濃度分別為0.034，0.068，0.136，0.272，0.544，1.088mg/mL的對(duì)照品梯度溶液，進(jìn)樣，以色譜峰面積和濃度進(jìn)行分析。表明，甲基正壬酮在濃度為0.034～1.088mg/mL范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好，線性回歸方程為：Y=414.99X-32.12，r=0.9998。

2.4.2 精密度實(shí)驗(yàn)

精密吸取同一對(duì)照品溶液，按2.3.3色譜條件重復(fù)進(jìn)樣5次，通過(guò)峰面積計(jì)算，得到甲基正壬酮峰面積的RSD為0.94%，表明所用儀器精密度良好。

2.4.3 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

取供試品溶液一份，按2.3.3方法，分別于0，2，4，6，8，10，12，24h進(jìn)樣，測(cè)得峰面積計(jì)算RSD為1.38%，表明該樣品在24h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.4.4 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)測(cè)

精密取同一批樣品（批號(hào)100901）5份，按2.3.1方法制備供試品，按2.3.3測(cè)定，測(cè)定甲基正壬酮平均含量為105μg/g，RSD為1.86%。

2.4.5 加樣回收率實(shí)驗(yàn)

取已知甲基正壬酮含量的同一批供試品溶液（批號(hào)：100901）5份，分別加入對(duì)照品適量，混合均勻，測(cè)定其中甲基正壬酮峰面積，計(jì)算回收率，結(jié)果甲基正壬酮平均加樣回收率為97.82%，RSD為1.84%。

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取三個(gè)批號(hào)（100901、100902、100903）干魚(yú)腥草藥材對(duì)其進(jìn)行加速和長(zhǎng)期穩(wěn)定考察[5]。

2.5.1 加速穩(wěn)定性試驗(yàn)

將魚(yú)腥草藥材在40℃±2℃，相對(duì)濕度75%±5%條件下儲(chǔ)藏6個(gè)月，濕度調(diào)節(jié)選擇NaCl飽和溶液（15.5～60℃，RH75%±1%）。在試驗(yàn)期間第0、1、2、3、6個(gè)月末取樣檢測(cè)。

經(jīng)6個(gè)月加速試驗(yàn)后，魚(yú)腥草外觀無(wú)變化，揮發(fā)油含量有略微降低（表1），變化率低于3.85%。測(cè)定魚(yú)腥草中甲基正壬酮含量（表2），發(fā)現(xiàn)其隨著貯藏時(shí)間延長(zhǎng)，含量降低，降幅為4.42%～4.76%。

表1 加速穩(wěn)定性試驗(yàn)魚(yú)腥草中揮發(fā)油含量（%）

表2 加速穩(wěn)定性試驗(yàn)魚(yú)腥草中甲基正壬酮含量（μg/g）

2.5.2 長(zhǎng)期穩(wěn)定性研究

取三個(gè)批號(hào)（100901、100902、100903）的干魚(yú)腥草貯存在溫濕度控制為25℃±2℃，RH 60%±10%環(huán)境下，分別與0、3、6、9、12、18個(gè)月取樣測(cè)定。經(jīng)18個(gè)月長(zhǎng)期穩(wěn)定性試驗(yàn)，測(cè)定各階段魚(yú)腥草中甲基正壬酮含量（表3），結(jié)果顯示，三個(gè)批次樣品含量均有一定幅度的降低，最大降幅為4.76%。魚(yú)腥草的揮發(fā)油量有較小幅度的降低（表4），變化率低于1.28%。貯藏期限內(nèi)藥材外觀無(wú)蟲(chóng)蛀、無(wú)霉變。

4 討 論

本文針對(duì)魚(yú)腥草存儲(chǔ)期間揮發(fā)油的變化進(jìn)行考察。三個(gè)批次魚(yú)腥草藥材在40℃±2℃，相對(duì)濕度75%±5%條件下儲(chǔ)藏6個(gè)月，其揮發(fā)油和甲基正壬酮含量均發(fā)生降低，但未發(fā)生顯著變化，100901批甲基正壬酮降幅最大，為4.76%（＜5%），說(shuō)明魚(yú)腥草中的揮發(fā)油對(duì)超常環(huán)境條件相對(duì)較為穩(wěn)定。

表3 長(zhǎng)期穩(wěn)定性試驗(yàn)中甲基正壬酮含量（μg/g）

表4 長(zhǎng)期穩(wěn)定性試驗(yàn)揮發(fā)油含量（%）

長(zhǎng)期穩(wěn)定性試驗(yàn)，各檢驗(yàn)期內(nèi)揮發(fā)油量變化率為1.20%～1.28%，甲基正壬酮含量變化率3.25%～4.76%，二者均＜5%。對(duì)比各檢測(cè)月的氣相色譜圖，圖譜均相似度較高，圖譜未見(jiàn)隨月份變化發(fā)生明顯變化。說(shuō)明魚(yú)腥草在2年有效期內(nèi)常規(guī)條件下貯藏較為穩(wěn)定。

雖然魚(yú)腥草中揮發(fā)油量和甲基正壬酮在考察期內(nèi)未發(fā)生顯著變化，但因其含量均隨時(shí)間有所降低，如將魚(yú)腥草揮發(fā)油為主要藥效成分的制劑，為防止制劑因原料中有效成分含量的改變而不穩(wěn)定，建議將其儲(chǔ)存在陰涼、干燥處，貯藏期限不宜過(guò)長(zhǎng)，如經(jīng)長(zhǎng)期儲(chǔ)藏過(guò)的原料投料前須進(jìn)行檢驗(yàn)。

[1] 中國(guó)藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(一部)[M].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2010:208.

[2] 顧靜蓉,馮麗麗,羅建偉,等.魚(yú)腥草的藥理作用及臨床應(yīng)用新進(jìn)展[J].海峽藥學(xué),2006,8(4):121.

[3] 國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局就魚(yú)腥草注射液等7個(gè)注射液作出進(jìn)一步?jīng)Q定:分步驟分階段有條件的恢復(fù)使用[J].中國(guó)食品藥品監(jiān)管,2006(10):7.

[4] 彭家敏,李可鵬,晁若冰.魚(yú)腥草注射液中3種主要揮發(fā)性成分的測(cè)定[J].華西藥學(xué)雜志,2009,24(4):396-397.

[5] 國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局.中藥、天然藥物穩(wěn)定性研究技術(shù)指導(dǎo)原則[Z].國(guó)食藥監(jiān)注[2006]678號(hào).

[6] 中國(guó)藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典附錄ⅩD(一部)[M].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2010:附錄63.

R932

B

1671-8194（2013）26-0062-02

陜西省科技統(tǒng)籌創(chuàng)新工程計(jì)劃項(xiàng)目(編號(hào)：2011KTCG03-03)

*通訊作者：