李孔龍 段志勝 徐 勉 柯亭羽*

（昆明醫(yī)科大學第二附屬醫(yī)院老年內分泌科，云南 昆明 650101）

臍血干細胞治療1型糖尿病3例

李孔龍 段志勝 徐 勉 柯亭羽*

（昆明醫(yī)科大學第二附屬醫(yī)院老年內分泌科，云南 昆明 650101）

研究證實，干細胞具有趨向分化作用，可分化為胰島β細胞，在治療T1DM中是一種安全、有效的治療手段。目的 臍血間充質干細胞治療T1DM，觀察其療效和安全性。方法 3例T1DM患者，年齡分別16歲、20歲、28歲。體質量指數分別是22.3、21.5、21.6。在患者及家屬知情同意的情況下于我院介入室行為介入術，臍血間充質干細胞靜脈注入胰背動脈。術后隨訪其臨床癥狀及各項指標的變化，進行綜合分析。結果 3例患者胰島素需要量較前下降30%～50%，胰島功能較前明顯改善，糖化血紅蛋白從9.85%～13.26%下降到6.7%～7.8%，糖尿病酮癥隨訪期間未發(fā)生。結論 臍血間充質干細胞作為干細胞的一種是治療T1DM的新途徑，在臨床應用中顯示出其特有的效應。

T1DM；臍血間充質干細胞；療效

1型糖尿病是一種T細胞介導的自身免疫性疾病，與遺傳和環(huán)境有關，導致胰腺β細胞破壞，體內胰島素分泌絕對缺乏，需要胰島素替代維持生命。隨著病程的進展，可以出現各個系統(tǒng)的慢性并發(fā)癥，胰島素雖然可以很好的控制血糖，但僅能減少并發(fā)癥發(fā)生率的35%～90%。臍血干細胞作為一種新型的治療糖尿病的方法，由于來源豐富，免疫原性相對較低，發(fā)生移植物抗宿主病及感染的概率小，并且可避免倫理問題，在臨床應用越來越廣泛。研究顯示，臍血干細胞具備很強的增殖能力和分化潛能，在一定條件下可分化成胰島β細胞進而起到治療糖尿病的作用[1,2]；最重要是臍血間充質干細胞具有免疫調節(jié)作用，可以抑制反應性T細胞的增殖，減少T淋巴細胞對胰島β細胞的損害，提高調節(jié)性T細胞的數量，從而誘導機體的免疫耐受，這可能是間充質干細胞治療1型糖尿病的主要機制[3,4]。另外，干細胞治療后血糖波動小，使體內氧化應激反應的幅度減小，減少了胰島β細胞的損害，并能調節(jié)胰島微環(huán)境血供，從而在一定程度上起到保護胰島β細胞的功能。在此，我們應用人臍帶間充質肝細胞治療1型糖尿病3例，取得良好效果。

1 對象與方法

1.1 基本資料

見表1～3。

1.2 方法

試劑及儀器：羅氏POCHE血糖儀，試紙；德國羅氏cobasC-肽檢測試劑盒；日本奧林巴斯5400，HbA1c檢測試劑盒；諾和諾德公司胰島素。

臍帶血干細胞：臍帶血干細胞來自健康分娩孕婦的臍帶血，由深圳市北科細胞工程研究所進行分離，提取，培養(yǎng)制成細胞懸液，每份干細胞含量為（4～6）×108個，細胞營養(yǎng)因子2mL，由深圳市北科細胞工程研究所提供。

患者3例，一般情況可，生命體征平穩(wěn)，無并發(fā)癥。在患者及家屬知情同意的情況下行臍血間充質干細胞移植治療2次（間隔1周），在局麻下行動脈造影經導管干細胞胰腺灌注術，術中順利，術后予常規(guī)抗感染治療，股動脈穿刺點予彈力紗布包扎止血，臥床24h，觀察病情，術后無感染,出血，血栓并發(fā)癥，一般情況可，自訴無明顯不適，生命體征平穩(wěn)，心肺腹無異常，雙下肢不水腫，檢測血糖，出院后隨訪。

治療過程：①造影：常規(guī)消毒鋪巾，經Seldinger’s技術穿刺股動脈，分別置5F-YASHINO管于腹腔干，胃，十二指腸動脈注入對比劑行DSA。②造影顯示：肝動脈未見明顯異常，胃，十二指腸動脈未見明顯異常。③治療：將導管端置于胃，十二指腸動脈，胰背動脈內，注入1U干細胞；和2mL細胞營養(yǎng)因子，使干細胞發(fā)揮最大作用?；颊咝g中及術后無特殊不適，患者造影見圖1～3。

圖1 患者1造影

圖2 患者2造影

圖3 患者3造影

1.3 療效評價的主要指標與安全性觀察

表1 患者1的基本資料

表2 患者2的基本資料

表3 患者3的基本資料

表4 患者1治療結果

表5 患者2治療結果

表6 患者3治療結果

①觀察移植前后胰島素注射劑量，FPG、2HPG、HbA1c、FC-P、2h C-P、FINS、2hINS、酮癥發(fā)生率等。②記錄治療過程中及治療后的不良反應。

2 結 果

3例患者在手術前后無特殊不適，無感染等并發(fā)癥。術后患者均自測血糖，電話隨訪，2～3周后胰島素用量開始減少，術后3個月來院復查，靜脈抽血查血糖，胰島及C-肽試驗等。顯示患者血糖較前下降，控制平穩(wěn)，低血糖明顯減少或為發(fā)生，胰島素劑量較前減少30%～50%，空腹及餐后C肽較移植前升高約5～8倍；HbA1c 6.7%～7.8%，進一步提示近3個月平均血糖水平尚可；隨訪3個月均未出現酮癥等急性并發(fā)癥。具體見表4～6。

3 討 論

大量研究顯示臍血間充質干細胞在趨向分化作用下可以分化成胰島β細胞，臨床上臍血干細胞移植治療糖尿病逐年增多，療效突出：Trivedi HL等用脂肪組織來源的間充質干細胞結合骨髓移植，治療病史0.6～10年，年齡14～28歲的5例T1DM患者，靜脈輸注這些細胞后，沒有出現嚴重的不良反應，胰島素的需要量降低約30%～50%，血液C-肽水平升高明顯[5]。也有將脂肪組織來源的間充質肝細胞移植到19例1型糖尿病患者體內，胰島素的用量下降40%左右，HbA1c也顯著降低，胰島素和C-太分泌較前升高，隨訪1年，沒有出現感染，免疫相關不良反應。Haller MJ[6]等將臍血干細胞經外周靜脈輸入15例T1DM的患者中，移植后患者胰島素分泌衰退的速度減慢，沒有發(fā)生急性或慢性并發(fā)癥，免疫功能有所改善。

本資料3例T1DM患者在行臍血干細胞移植術后，2～3周后自我監(jiān)測指端血糖較手術前有所下降，胰島素用量開始減少，3個月后抽靜脈血空腹血糖（FPG），餐后2h血糖（2hPG）均較前下降，復查的胰島（INS），C-肽（C-P）較前升高，升高約5～8倍，HbA1c%均下降，隨訪的3月中低血糖發(fā)生1次，酮癥未發(fā)生。顯示，臍血干細胞治療1型糖尿病有顯著的療效，胰島素的用量，隨訪3個月后下降約30%～50%，患者雖然沒有停止用胰島素，原因可能患者未按要求繼續(xù)行移植術，歸巢到胰腺的細胞數不足，療程未到有關。本臨床資料不足之處在于，收集的樣本少，患者依從性差，導致隨訪時間短，對于臍血干細胞的長期療效及是否有不良反應有待進一步研究。

臍血干細胞作為治療1型糖尿病的一種新技術，降低血糖，改善臨床癥狀及并發(fā)癥是有效的，已經在臨床中大量開展，并取得可喜的成績，但是，目前仍從在不少問題待解決，首先面臨的一個問題是臍血間充質干細胞培養(yǎng)成功率低，體外培養(yǎng)易分化；在臨床上，臍血干細胞移植一般是通過靜脈注射途徑，細胞進入受體體內后通過歸巢到達胰腺中的微環(huán)境中，自我更新，增值分化成胰島素樣細胞團，分泌胰島素，達到降糖的作用。但是經過全身血液循環(huán)到達胰腺，這樣是否影響到胰腺定居分化的細胞數量有待定論。也有報道證明同時移植兩份及以上的臍血干細胞可以彌補單份臍血細胞的不足，此外。雖然體外培養(yǎng)出的臍血間充質干細胞可以表達與胰腺細胞發(fā)育有關的胰島相關的分子，如胰島素基因啟動子結合蛋白（Isl-l），巢蛋白（Nestin）等，但臍血干細胞不表達胰島素的轉錄因子，究竟是間充質肝細胞中哪一種單核細胞表達這些胰腺相關分子尚不明確，需進一步證實。既然證明臍血干細胞具有多向分化和增殖的能力，在不同誘導環(huán)境下可分化不同的組織細胞，還可跨胚層分化，如心肌細胞，神經細胞等。那么，移植體內后是否分化成腫瘤細胞，需要長期及大量的研究證實，諸如此類長期并發(fā)癥等方面尚不知[7]。

[1] Ende N,Chen R,Reddi AS.Effect of human umbilical cord blood cells on glycemia and insulitis in type 1 diabetic mice[J]. Biochem Biophys Res Commun,2004,325:665-669.

[2] Sun NZ,Ji HS.In vitro differentiation of human placentaderived adherent cells into insulin-producing cells[J].J Int Med Res,2009,37(2): 400-406.

[3] Aggarwal S,Pittenger MF.Human mesenchymal stem cells modulate allogeneic immune cell responses[J].Blood,2005,105(4):1815-1822.

[4] Wagner W,Wein F,Seckinger A,et al.Comparative characteristics of mesenchymal stem cells from human bone marrow,adipose tissue,and umbilical cord biood[J].Exp Hematol,2005,33(11):1402.

[5] Trivedi HL,Vanikar AV,Thakker U,et al.Human adipose tissuederived mesenchymal stem cells combined with hematopoietic stem cell transplantation synthesize insulin[J].Transplant Proc,2008,40(4): 1135-1139.

[6] Haller MJ,Viener HL,Wasserfall C,et al.Autologous umbilical cord blood infusion for type 1 diabetes[J].Exp Hematol,2008,36(6):710-715.

[7] Erices A,Conget P,Minguell JJ.Mesenchymal progenitor cells in human umbilical cord blood[J].Br J Haematal,2000,109(1):235-242.

Umbilical Cord Blood Stem Cell in the Treatment of Type 1 Diabetes -3 cases with Report

LI Kong-long, DUAN Zhi-sheng, XU Mian, KE Ting-yu*
(Department of Elderly Endocrinology, Second Affiliated Hospital of Kunming Medical University, Kunming 650101, China)

Umbilical cord blood stem cells in certain conditions can be differentiated into islet β cells in the treatment of type 1 diabetes is a safe, effectivetherapy. Objective Umbilical cord blood mesenchymal stem cell therapy T1DM, observe the efficacy and safety. Methods Two T1DM patients, age 16 and 20 years old respectively, and body mass index were in the patient and family under the condition of informed consent in our room behavior intervention in art, umbilical cord blood mesenchymal stem cells injected intravenously dorsal pancreatic artery. Transplant patients were followed up the clinical symptoms and the change of the index, and make comprehensive analysis. Results Two patients required to insulin from islet function is improved significantly, glycated hemoglobin from to, diabetic ketoacidosis fewer happened. Conclusion Umbilical cord blood mesenchymal stem cells as a new way of treatment is T1DM, in clinical application shows its unique effect.

T1DM; Umbilical cord blood mesenchymal stem cells; Curative effect

R587.1

B

1671-8194（2013）26-0001-03

2012年國家自然科學基金項目（31260223）；2012年云南省科技廳-昆明醫(yī)科大學聯(lián)合專項基金項目（2012FB044）

*通訊作者：E-mail： ketingyu@hotmail.com