王 玉 鄭 欣 唐寶珠

多糖類藥物提取及分離分析

王 玉 鄭 欣 唐寶珠

目的對多糖類藥物的提取與分離方法和效果進(jìn)行分析探討，為今后的藥物分析工作提供可靠的參考依據(jù)。方法提取方法有溶劑提取法、酸提取法、堿提取法、超臨界流體萃取法；分離方法包括超濾法、沉淀法、柱層析法以及色譜法。結(jié)果通過上述提取分離方法能夠獲得多糖成分。結(jié)論近幾年多糖類藥物的藥理作用已經(jīng)受到了高度的重視，使得多糖類藥物的提取與分離技術(shù)也得到了良好的發(fā)展。

多糖類藥物；提取方法；分離純化；研究

多糖為自然界中普遍存在的一種含量豐富的聚合物，近幾年由于中醫(yī)藥領(lǐng)域的發(fā)展與壯大，使人們對多糖的藥理作用引起了高度重視，使得多糖類藥物的提取與分離技術(shù)也得到了很大的發(fā)展。目前對于多糖類藥物的提取和分離工藝的研究已成為一個(gè)熱點(diǎn)項(xiàng)目。本文便對多糖的提取、分離純化方法展開了綜述，詳見下文。

1 多糖類藥物提取分離提純方法

見圖1。

圖1 多糖類藥物提取分離提純方法

2 結(jié)果

不同步驟對多糖類藥物提取分離后得到的溶液濃度，如表1。

表1 多糖類藥物提取分離結(jié)果(%)

2.1 多糖類提取方法

2.1.1 溶劑提取法溶劑提取法為目前常用的一種提取方法，其利用多糖成分在乙醇溶液中不溶解的性質(zhì)，在所得的提取液中加入乙醇、甲醇或丙酮，從而使多糖成分得以沉淀，來實(shí)現(xiàn)初步純化的效果。本組研究結(jié)果為得到濃度為20.08%溶液。在采取溶劑提取法進(jìn)行分離時(shí)，一般需要遵循相似相容原則，多糖成分屬于極性相對較大的化合物，因此可采取水、醇等強(qiáng)極性的溶劑[1]。

2.1.2 酸提取法盡管現(xiàn)在中藥研究領(lǐng)域強(qiáng)調(diào)避免在酸性條件下進(jìn)行有效成分的提取，否則會引起糖苷鍵發(fā)生斷裂。

2.1.3 堿提取法研究證實(shí)，有一部分多糖成分在堿溶液中具有較高的提取率，特別是一些含有糖醛酸基團(tuán)的多糖，經(jīng)堿溶液提取時(shí)可加入適量的氮?dú)饣蚺饸浠c、硼氫化鉀，對多糖發(fā)生降解進(jìn)行避免。曾有學(xué)者采取堿液對山茱萸多糖進(jìn)行提取，操作步驟為堿提取、鹽酸中和、減壓濃縮、醇沉淀、洗滌、真空干燥，最終得到了褐色的山茱萸多糖[2]。

2.1.4 超臨界流體萃取法目前超臨界流體萃取技術(shù)為一種新型的提取分離技術(shù)，在氣體超過限定的溫度、壓力后便會進(jìn)入到臨界狀態(tài)，此時(shí)的流體被稱為超臨界流體，目前應(yīng)用較多的是二氧化碳。

2.2 多糖雜質(zhì)的去除

2.2.1 蛋白質(zhì)的去除研究證實(shí)，在采取醇沉淀或其它溶劑進(jìn)行多糖提取時(shí)會含有較多雜質(zhì)，其中以蛋白質(zhì)最為常見，因此需要采取有效的措施展開雜質(zhì)去除操作，現(xiàn)階段常用于去除蛋白質(zhì)的方法有Sevage法（如表2）。還有酶法除蛋白：取龍眼、荔枝粗多糖，按1%比例加入木瓜蛋白酶，防腐保溫48h，按照多糖體積的20%加入氯仿，再加入氯仿體積20%的正丁醇，劇烈震蕩，除去水層與溶劑層交界處的軟質(zhì)彈性變性蛋白[3]。本組蛋白質(zhì)去除后得到溶液濃度為53.24%。

表2 蛋白質(zhì)的去除

2.2.2 色素的去除在提取過程中由于氧化作用因此會有色素生成，進(jìn)而對多糖的色譜分析及性質(zhì)鑒定產(chǎn)生一定程度的影響。

2.3 多糖的分離與純化方法

2.3.1 超濾法超濾方法對多糖成分進(jìn)行分離純化時(shí)，一般采取中空纖維濾膜對多糖中去除蛋白質(zhì)后的小分子雜質(zhì)進(jìn)行濾過。本組研究得到溶液濃度為86.84%。

2.3.2 沉淀法目前常用的沉淀法以季銨鹽沉淀法和分解沉淀法最為常用。

2.3.3 柱層析法現(xiàn)階段常用的柱層析法包括凝膠柱層析法、離子交換柱層析法。凝膠柱層析法常用的凝膠為葡聚糖凝膠、瓊脂糖凝膠，洗脫劑多為不同濃度的鹽酸溶液及緩沖溶液。研究證實(shí)，該技術(shù)不適合對粘多糖進(jìn)行分離。

2.3.4 色譜法目前色譜法為比較常用的一種多糖分離方法，主要有離子交換色譜法和凝膠色譜法。曾有學(xué)者采取DEAE纖維素離子交換色譜法對板藍(lán)根的多糖成分進(jìn)行分離，并采取Sephadex G75凝膠色譜柱進(jìn)行純化，所用的洗脫流動(dòng)相為磷酸緩沖溶液，最后共得到四種板藍(lán)根多糖[4]。

3 討論

目前水提醇沉為提取多糖成分最為常用的手段，該方法的工藝簡單、成本低，且安全，適合工業(yè)化生產(chǎn)。然近幾年有研究證實(shí)，一些多糖物質(zhì)適合在稀酸的條件下進(jìn)行提取，譬如說采取乙酸或鹽酸溶液提取含有葡萄糖醛酸等酸性基團(tuán)的多糖，能夠促進(jìn)多糖沉淀的析出，提高提取率[5]。有學(xué)者采取濃度為5%的鹽酸和水提取茜草中多糖成分，結(jié)果發(fā)現(xiàn)鹽酸組組成黏度較水組低，這是由于H＋對酸性雜質(zhì)的溶出進(jìn)行了有效抑制，提高了提取物純度。采取堿液提取多糖在提高提取率的同時(shí)也可有效縮短提取時(shí)間，而提取液中會含有較多的雜質(zhì)，黏度相對較大，過濾時(shí)存在一定的困難。超臨界流體萃取技術(shù)具有氣液兩重性的特點(diǎn)，不但具有較高的滲透能力，而且還具有同液體相近的溶解能力和密度。曾有學(xué)者采取超臨界流體萃取技術(shù)對雪靈芝中多糖成分進(jìn)行提取，結(jié)果發(fā)現(xiàn)多糖提取率發(fā)生了明顯提高[6]。該技術(shù)具有高效、清潔等獨(dú)特優(yōu)勢，溶解能力強(qiáng)，萃取效率較高，選擇性良好，耗能較低，安全無污染，為一種值得推廣的分離提取技術(shù)。

曾有研究指出，首先采取蛋白酶對蛋白質(zhì)進(jìn)行水解，而后再采取Sevage法進(jìn)行蛋白質(zhì)的去除效果更佳，一直受到高度重視[3]。目前常用的脫色方法有吸附法、氧化法、離子交換法等。吸附法中包括DE-AE纖維素、硅藻土、活性炭等，氧化法則以過氧化氫最為常用[7]。

曾有學(xué)者采取超濾法對芥子蛋白進(jìn)行純化；還有學(xué)者經(jīng)超濾法成功對海洋真菌多糖提取液中的小分子雜質(zhì)進(jìn)行去除。季銨鹽以及氫氧化物均屬于乳化劑，可與酸性糖產(chǎn)生不溶性的沉淀，在酸性多糖的分離中比較常用。曾有學(xué)者在提取得到鐵皮石斛多糖后采取熱溶法將沉淀濾除，所得到的濾液經(jīng)CTAB絡(luò)合精制最終得到多糖精制品[8]。離子交換柱層析法中常用的交換介質(zhì)為DEAE-葡萄糖凝膠、DEAE-纖維素、DEAE-瓊脂糖凝膠等。研究證實(shí)，該分離方法適合對各種酸性、中性多糖及粘多糖進(jìn)行分離。常用的洗脫劑為不同濃度的堿溶液、硼砂溶液以及鹽溶液等。

綜上所述，中藥多糖成分的提取與分離方法相對較多，且更多的方法正在逐漸更新，在今后的實(shí)驗(yàn)研究中應(yīng)依據(jù)多糖的性質(zhì)選取適當(dāng)?shù)奶崛∨c分離方法，從而達(dá)到最佳的提取和分離效果。

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Extraction and Separation of Polysac Charides

Wang Yu Zheng Xin Tang Baozhu

ObjectiveThe polysaccharides extraction and separation method and effect analysis, analytical work to provide a reliable reference basis for future drug.MethodsThe extraction with solvent extraction, acid extraction, alkali extraction by supercritical fluid extraction, separation methods include; ultrafiltration method, precipitation method, column chromatography and chromatography.ResultsThe method could polysaccharide obtained by the extraction and separation.ConclusionPharmacological effects in recent years polysaccharide drugs has got more and more attention, the technology of extraction and separation of polysaccharides has also been a good development.

Polysaccharides; Extraction; Separation and purification; Research

R284.2

A

1673-5846(2013)06-0036-03

廣東省深圳市人民醫(yī)院藥學(xué)部，廣東深圳 518020

王玉（1975.1-），女，籍貫：山東即墨，主管藥師。