吳又明丁彥青李納王金生郭周慶冷雷黃東

1.南方醫(yī)科大學(xué)附屬小欖醫(yī)院病理科，廣東 中山 528415；

2.南方醫(yī)科大學(xué)附屬南方醫(yī)院病理科，廣東 廣州 510515

結(jié)直腸鋸齒狀腺瘤、傳統(tǒng)腺瘤及結(jié)直腸癌中端粒酶、p53及Ki-67的表達(dá)比較

吳又明1丁彥青2李納1王金生1郭周慶1冷雷1黃東1

1.南方醫(yī)科大學(xué)附屬小欖醫(yī)院病理科，廣東 中山 528415；

2.南方醫(yī)科大學(xué)附屬南方醫(yī)院病理科，廣東 廣州 510515

背景與目的：結(jié)直腸鋸齒狀腺瘤(serrated adenoma，SA)是2000年被WHO正式命名為獨(dú)立的一種疾病，與傳統(tǒng)腺瘤(traditional adenoma，TA)和結(jié)直腸癌(colorectal carcinoma，CRC)比較有其獨(dú)特的性質(zhì)。本研究通過對(duì)鋸齒狀腺瘤、傳統(tǒng)腺瘤和結(jié)直腸癌組織中端粒酶、p53及Ki-67的免疫組化表達(dá)比較，探討鋸齒狀腺瘤與普通腺瘤的惡性潛能異同及與大腸腺癌的關(guān)系。方法：運(yùn)用免疫組化MaxVision法對(duì)37例鋸齒狀腺瘤、36例傳統(tǒng)腺瘤，34例結(jié)直腸癌組織標(biāo)本進(jìn)行端粒酶、p53及Ki-67檢測(cè)。結(jié)果：端粒酶在鋸齒狀腺瘤、傳統(tǒng)腺瘤和結(jié)直腸癌組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，結(jié)直腸癌組陽性率高于鋸齒狀腺瘤組(P＜0.05)，鋸齒狀腺瘤組高于傳統(tǒng)腺瘤組(P＜0.01)；Ki-67在鋸齒狀腺瘤與傳統(tǒng)腺瘤兩組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，結(jié)直腸癌組的陽性率則明顯高于鋸齒狀腺瘤和傳統(tǒng)腺瘤組(P＜0.01)；結(jié)直腸癌組p53陽性率高于傳統(tǒng)腺瘤組(P＜0.01)，傳統(tǒng)腺瘤組高于鋸齒狀腺瘤組(P＜0.01)。結(jié)論：端粒酶、p53及Ki-67檢測(cè)顯示：鋸齒狀腺瘤是一種具有較強(qiáng)活性的腺瘤，端粒酶的激活可能在其癌變過程中起一定作用。

鋸齒狀腺瘤；傳統(tǒng)腺瘤；端粒酶；P53；Ki-67

大腸癌在我國(guó)人群中是最常見的惡性腫瘤之一，在過去的20多年，大多數(shù)國(guó)家或地區(qū)大腸癌發(fā)病呈上升趨勢(shì)，并以發(fā)病率低的發(fā)展中國(guó)家上升更為明顯。結(jié)直腸鋸齒狀腺瘤(serrated adenoma，SA)是2000年被WHO［1］正式命名為獨(dú)立的一種疾病，與傳統(tǒng)腺瘤比較有其獨(dú)特的性質(zhì)，鋸齒狀腺瘤作為結(jié)直腸鋸齒狀上皮源性腫瘤，因其與微衛(wèi)星不穩(wěn)定(microsatellite instability，MSI)散發(fā)性大腸癌關(guān)系密切［2-4］，近些年來受到相關(guān)專業(yè)的重視。本文運(yùn)用免疫組織化學(xué)方法，檢測(cè)結(jié)直腸鋸齒狀病變、傳統(tǒng)腺瘤及結(jié)直腸腺癌中端粒酶、p53及Ki-67的表達(dá)，探討鋸齒狀腺瘤與普通腺瘤的惡性潛能異同及與大腸腺癌的關(guān)系。

1 材料和方法

1.1 材料

選自2007年11月—2012年11月南方醫(yī)科大學(xué)附屬小欖醫(yī)院病理科活檢標(biāo)本，由有經(jīng)驗(yàn)的病理診斷醫(yī)師進(jìn)行篩選，篩選出鋸齒狀腺瘤37例，再隨機(jī)抽樣挑選傳統(tǒng)腺瘤36例、腺癌34例作為樣本。

1.2 方法

運(yùn)用免疫組化方法對(duì)各組病例分別進(jìn)行p53、Ki-67及端粒酶檢測(cè)，一抗及二抗采用福州邁新生物技術(shù)公司產(chǎn)品，方法采用MaxVision方法。所有計(jì)數(shù)均主要計(jì)算陽性率高的區(qū)域，計(jì)數(shù)細(xì)胞數(shù)≥100個(gè)，p53及Ki-67的陽性表達(dá)細(xì)胞為細(xì)胞核內(nèi)有棕黃色顆粒，將p53結(jié)果分為低、中、高表達(dá)3組，低表達(dá)組是陰性或陽性細(xì)胞數(shù)＜25%，中表達(dá)組是陽性細(xì)胞數(shù)在25%～50%，高表達(dá)組是陽性細(xì)胞數(shù)＞50%；Ki-67按陽性細(xì)胞比例分3組：低表達(dá)組為陽性細(xì)胞數(shù)＜40%，中表達(dá)組陽性細(xì)胞數(shù)在40%～60%，高表達(dá)組是陽性細(xì)胞數(shù)＞60%；端粒酶陽性為在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)黃色顆粒，也分為低、中、高表達(dá)3組，低表達(dá)組是陰性或陽性細(xì)胞數(shù)＜25%，中表達(dá)組是陽性細(xì)胞數(shù)在25%～50%，高表達(dá)組是陽性細(xì)胞數(shù)＞50%。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

對(duì)數(shù)據(jù)資料運(yùn)用SPSS 17.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，采用Fisher確切概率法，對(duì)于有顯著差異的進(jìn)一步進(jìn)行兩兩比較。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

鋸齒狀腺瘤p53表達(dá)陽性區(qū)主要在隱窩處上皮，表面上皮較少陽性(圖1A、B)；傳統(tǒng)腺瘤的p53表達(dá)陽性區(qū)主要在表面上皮(特別是有上皮內(nèi)瘤變區(qū)域)，其他區(qū)域較少見(圖1C)；結(jié)直腸腺癌則在所有癌細(xì)胞均具有高表達(dá)(圖1D)，但在印戒細(xì)胞癌及類癌中低表達(dá)(各1例)。傳統(tǒng)腺瘤與鋸齒狀腺瘤的p53表達(dá)(低、中、高3組分別比較，即兩組等級(jí)資料比較)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，傳統(tǒng)腺瘤與腺癌的p53表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，鋸齒狀腺瘤與腺癌的p53表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01，表1)。

圖 1 MaxVision法檢測(cè)p53的表達(dá)Fig. 1 p53 expression detected by MaxVision method

表 1 鋸齒狀腺瘤、傳統(tǒng)腺瘤及結(jié)直腸腺癌中p53表達(dá)Tab. 1 p53 expression in colorectal serrated adenoma, traditional adenoma and colorectal cancer

Ki-67的表達(dá)結(jié)果見表2。鋸齒狀腺瘤的表達(dá)主要在隱窩處上皮，表面上皮較少表達(dá)(圖2A)；傳統(tǒng)腺瘤主要在表面上皮(特別是有上皮內(nèi)瘤變區(qū)域)，其他區(qū)域表達(dá)較弱(圖2B)；腺癌細(xì)胞則在所有區(qū)域均呈高表達(dá)(圖2C)，但在印戒細(xì)胞癌及類癌中低表達(dá)(各1例)。傳統(tǒng)腺瘤與鋸齒狀腺瘤的Ki-67表達(dá)(低、中、高3組分別比較，即兩組等級(jí)資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.142)，鋸齒狀腺瘤與腺癌的Ki-67表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，傳統(tǒng)腺瘤與腺癌的Ki-67表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。

圖 2 MaxVision法檢測(cè)Ki-67的表達(dá)Fig. 2 Ki-67 expression detected by MaxVision method

表 2 鋸齒狀腺瘤、傳統(tǒng)腺瘤及結(jié)直腸腺癌中Ki-67表達(dá)Tab. 2 Ki-67 expression in colorectal serrated adenoma, traditional adenoma and colorectal cancer

端粒酶的表達(dá)結(jié)果見表3。鋸齒狀腺瘤主要表達(dá)在有鋸齒狀改變的細(xì)胞膜上及部分細(xì)胞質(zhì)中(圖3A)，傳統(tǒng)腺瘤則表達(dá)在近表面的上皮層(特別是有上皮內(nèi)瘤變區(qū)域，圖3B)，腺癌細(xì)胞則在所有區(qū)域均具存在高表達(dá)(圖3C)，但在印戒細(xì)胞癌及類癌中表達(dá)稍弱(各1例)。傳統(tǒng)腺瘤與鋸齒狀腺瘤的端粒酶表達(dá)(低、中、高3組分別比較，即兩組等級(jí)資料比較)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，傳統(tǒng)腺瘤與腺癌的端粒酶表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，鋸齒狀腺瘤與腺癌的端粒酶表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

表 3 鋸齒狀腺瘤、傳統(tǒng)腺瘤及結(jié)直腸腺癌中端粒酶的表達(dá)Tab. 3 Telomerase expression in colorectal serrated adenoma, traditional adenoma and colorectal cancer

圖 3 MaxVision法檢測(cè)端粒酶的表達(dá)Fig. 3 Telomerase expression detected by MaxVision method

3 討 論

端粒酶是由RNA、蛋白質(zhì)構(gòu)成的核酸蛋白，可在體內(nèi)以酶結(jié)構(gòu)中的RNA成分(與端粒重復(fù)序列互補(bǔ))為模板，在染色體末端催化添加TTAGGG重復(fù)序列。在生殖細(xì)胞中由于有端粒酶表達(dá)，其端粒不隨年齡增長(zhǎng)而縮短，故生殖細(xì)胞為永生細(xì)胞。由于端?？s短和端粒酶無活性，體細(xì)胞通常逐漸衰老死亡。僅有極少數(shù)細(xì)胞偶然通過激活端粒酶而逃避程序性老化，其生存延長(zhǎng)可能給另外的基因損傷積累提供機(jī)會(huì)，導(dǎo)致腫瘤進(jìn)行性發(fā)展。在大多數(shù)癌細(xì)胞系和腫瘤細(xì)胞中端粒酶均有高水平表達(dá)［5］。表明端粒酶的激活表達(dá)與細(xì)胞的無限增殖有密切關(guān)系，通過解除細(xì)胞衰老過程中的增生受限，端粒酶的重新活化可能是體細(xì)胞向腫瘤轉(zhuǎn)化的關(guān)鍵步驟。

已有研究［6］發(fā)現(xiàn)鋸齒狀改變的局部上皮細(xì)胞凋亡受抑制，上皮細(xì)胞從隱窩移行至上皮表面這一過程延遲，推測(cè)這可能是形態(tài)改變的成因，端粒酶激活正好可解釋這一部分上皮細(xì)胞凋亡受抑制的現(xiàn)象。

本組病例中34例結(jié)直腸癌中32例端粒酶高表達(dá)，只有兩例中、低表達(dá)，其中1例為印戒細(xì)胞癌，另1例為類癌，可能是因?yàn)橛〗浼?xì)胞癌更多地是通過MSI途徑，類癌主要是通過其他途徑引起的細(xì)胞惡變。鋸齒狀腺瘤中有24例高表達(dá)，13例中低表達(dá)，鋸齒狀腺瘤與結(jié)直腸癌兩者之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。傳統(tǒng)腺瘤與結(jié)直腸癌比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，說明鋸齒狀腺瘤比傳統(tǒng)腺瘤更易通過端粒酶激活而惡變。也可以說端粒酶生物學(xué)活性改變，可被看成是大腸惡性腫瘤發(fā)生及發(fā)展的一個(gè)重要信號(hào)。

p53在腺癌中高表達(dá)組有26/34，低表達(dá)組只有1/34例，而鋸齒狀腺瘤高表達(dá)組只有3/37，低表達(dá)組有30/37例，兩者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，說明癌變組織中p53表達(dá)陽性率明顯高于鋸齒狀腺瘤，與代小娟等［7］所得結(jié)論相同。傳統(tǒng)腺瘤中高表達(dá)只有1/36，低表達(dá)組有18/36，其表達(dá)與鋸齒狀腺瘤及腺癌均有極顯著差異，說明p53突變?cè)趥鹘y(tǒng)腺瘤惡變過程中起著更重要的作用，鋸齒狀腺瘤惡變的途徑更多地可能是通過其他途徑(如端粒酶激活)來實(shí)現(xiàn)的。

Ki-67的表達(dá)在鋸齒狀腺瘤與傳統(tǒng)腺瘤間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.142)，與在腺癌中的表達(dá)相比，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，與王魯平等［8］的結(jié)果一致，它們?cè)陉栃苑植嫉牟课簧细饔刑攸c(diǎn)，鋸齒狀腺瘤陽性部位主要表現(xiàn)在隱窩中下部，傳統(tǒng)腺瘤主要表達(dá)在隱窩表面，特別是那些有上皮內(nèi)瘤變的部位，而腺癌則是彌漫性強(qiáng)表達(dá)。這些表現(xiàn)也正符合它們的增生活性特點(diǎn)，鋸齒狀腺瘤是由于隱窩中下部細(xì)胞的增殖形成了鋸齒狀結(jié)構(gòu)，傳統(tǒng)腺瘤的惡變則主要是從表面上皮而來，腺癌則是所有細(xì)胞具有很強(qiáng)的增殖活性。

此組病例中有1例印戒細(xì)胞癌及1例類癌，兩者在P53、Ki-67及端粒酶的表達(dá)均較低，其癌變的過程可能與p53突變及端粒酶的激活關(guān)系不大，印戒細(xì)胞癌可能更多地是通過MSI途徑轉(zhuǎn)變而來。

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Comparison of telomerase, p53 and Ki-67 expression on colorectal serrated adenoma, traditional adenoma and colorectal cancer

WU You-ming1, DING Yan-qing2, LI Na1, WANG Jin-sheng1, GUO Zhou-qing1, LENG Lei1, HUANG Dong1(1. Department of Pathology, Xiaolan Hospital of Southern Medical University, Zhongshan Guangdong 528415, China; 2. Department of Pathology, Nan Fang Hospital of Southern Medical University, Guangzhou Guangdong 510515, China)

WU You-ming E-mail: wuyou_ming@126.com

Background and purpose: Colorectal serrated adenoma (SA) was officially named in 2000 by the WHO as a separate disease, with unique properties compared with traditional adenoma (TA), and its relationship with colorectal cancer (CRC) is very concerned. This study was to analyze and compare the telomerase, p53 and Ki-67 immunohistochemical expression on the tissues of SA, TA and CRC. Methods: Immunohistochemistry was adopted to analyze the expression of telomerase, p53, and Ki-67 in 37 cases of SA, 36 cases of TA and 34 cases of CRC. Results: The p53-positive percentage of SA was significantly lower than that of TA (P＜0.01), and the p53-positive percentage of TA was significantly lower than that of CRC (P＜0.01). No significant difference of Ki-67 expression was found between SA and TA, and the Ki-67-positive percentage of SA and TA was lower than that of CRC (P＜0.01). The telomerasepositive percentage of TA was significantly lower than that of SA (P＜0.01), and the telomerase-positive percentage of SA was significantly lower than that of CRC (P＜0.05). Conclusion: Telomerase, P53, and Ki-67 immunohisto chemical analysis indicated that SA is a kind of proliferative adenoma, and telomerase activation may play a role in the cancer process.

Serrated adenoma; Traditional adenoma; Telomerase; p53; Ki-67

10.3969/j.issn.1007-3969.2013.07.007

R735.3

：A

：1007-3639(2013)07-0519-05

2013-04-01

2013-05-29）

中山市科技攻關(guān)項(xiàng)目(No：20122A051)。

吳又明 E-mail:wuyou_ming@126.com