梁紹棟 李洪哲 莊亞嚴(yán)

探討TNF-α和CD44在惡性腦瘤患者體內(nèi)表達(dá)的意義

梁紹棟 李洪哲 莊亞嚴(yán)

目的探討TNF-α和CD44 mRNA在惡性腦瘤組織中的表達(dá)及其意義。方法采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法和逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)法，對(duì)惡性腦瘤中惡性膠質(zhì)瘤組織標(biāo)本各30例內(nèi)TNF-α和CD44 mRNA含量進(jìn)行半定量檢測(cè)。結(jié)果隨著腦腫瘤惡性程度的增高，TNF-α和CD44在瘤組織的表達(dá)含量亦有升高態(tài)勢(shì)，其中以胚胎性腫瘤最高，混合性膠質(zhì)瘤次之。結(jié)論惡性腦瘤組織內(nèi)TNF-α和CD44mRNA表達(dá)失衡，兩者的含量均有大幅上升趨勢(shì)，有望此項(xiàng)研究可以作為臨床確診良、惡性腦瘤的重要理論依據(jù)。

TNF-α；惡性腦瘤；CD44

惡性腦腫瘤是腦外科常見(jiàn)的腫瘤性疾病，近年來(lái)隨著飲食、環(huán)境、電離輻射等諸多因素的影響，患惡性腦腫瘤的人數(shù)有明顯升高的態(tài)勢(shì)，但往往由于診斷及時(shí)而耽誤了最佳的治療時(shí)期，從而提高了該疾病的死亡率。TNF-α亦稱(chēng)為腫瘤壞死因子-α，其可以通過(guò)某種生物學(xué)途徑殺死腫瘤細(xì)胞[1]，是目前發(fā)現(xiàn)生物因子中對(duì)腫瘤細(xì)胞的作用最明顯。有資料報(bào)道，在惡性腦瘤發(fā)生的同時(shí)，體內(nèi)不同組織包括血液、體液中其含量有明顯升高趨勢(shì)。CD44能夠促進(jìn)腫瘤細(xì)胞粘附、轉(zhuǎn)移和播散。更有許多文獻(xiàn)報(bào)道，其在惡性腦腫瘤中表達(dá)率很高[2]。因此，鑒于在診斷和鑒別診斷方面的缺點(diǎn)，我院研究人員及時(shí)準(zhǔn)確地搜尋了臨床病例，針對(duì)不同腫瘤特點(diǎn)進(jìn)行綜合檢測(cè)和分析，以找到一種最簡(jiǎn)單準(zhǔn)確的確診方法。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本取材均由牡丹江市紅旗醫(yī)院腦外科提供，取惡性腦瘤中惡性膠質(zhì)瘤組織標(biāo)本各30例，在手術(shù)中分別獲取相應(yīng)的組織標(biāo)本，于液氮中速凍10 min后置于-70℃冰箱保存待測(cè)。

1.2 試劑TNF-αELISA試劑盒和CD44逆轉(zhuǎn)錄試劑盒均由Fermentas公司提供。

1.3 TNF-α測(cè)定嚴(yán)格按照ELISA試劑盒說(shuō)明進(jìn)行操作。

1.4 按照實(shí)驗(yàn)室常規(guī)方法提取CD44總RNA。采用甲醛變性瓊脂糖凝膠電泳分離RNA，溴化乙錠(EB)染色；采用紫外分光光度法定量。

1.5 進(jìn)行cDNA合成反應(yīng)，采用PCR反應(yīng)體系，之后取PCR反應(yīng)液進(jìn)行電泳分離，然后凝膠成像。Imagetool 3.5軟件計(jì)算CD44mRNA//β-actin mRNA。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法實(shí)驗(yàn)結(jié)果用SPSS 18.0軟件處理，各組數(shù)據(jù)由樣本比較采用方差比較。以P＜0.01為有顯著差異性，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

TNF-α和CD44/β-actin mRNA在正常組織和惡性腫瘤中的表達(dá)量，見(jiàn)表1、圖1、圖2。

表1 TNF-α和CD44/β-actin mRNA在正常組織和惡性腫瘤中的表達(dá)量(±s)

表1 TNF-α和CD44/β-actin mRNA在正常組織和惡性腫瘤中的表達(dá)量(±s)

注：*與其余的膠質(zhì)瘤相比較，P＜0.01有顯著差異性

標(biāo)本來(lái)源 例數(shù) TNF-α(μg/ml) CD44/β-actin混合性膠質(zhì)瘤 30 2.78±0.23*7.88±0.42*胚胎性腫瘤 30 3.65±0.56*8.79±0.16*星形細(xì)胞性腫瘤 30 2.45±0.35 6.35±0.32少枝膠質(zhì)性腫瘤 30 1.56±0.12 5.22±0.65

圖1 CD44 RT-PCR電泳圖

圖2 β-actin RT-PCR電泳圖

注：1混合性膠質(zhì)瘤，2胚胎性腫瘤，3星形細(xì)胞性腫瘤，4少枝膠質(zhì)性腫瘤

3 討論

本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用兩種不同的實(shí)驗(yàn)方法，分別測(cè)得TNF-α含量和CD44mRNA的相對(duì)表達(dá)量，在兩種常見(jiàn)的惡性腦腫瘤中均有大幅升高態(tài)勢(shì)，TNF-α其殺傷腫瘤細(xì)胞的機(jī)制各種資料介紹不夠詳盡說(shuō)，但其卻有阻止腫瘤生長(zhǎng)和遷移的功能。其中CD44蛋白在生物體內(nèi)具有多種重要的生物學(xué)功能，它即參與器官發(fā)育，也參與多種免疫功能以及造血功能；一旦CD44如果出現(xiàn)基因突變，就會(huì)使機(jī)體出現(xiàn)相應(yīng)的病理特征和表現(xiàn)。CD44分子參與細(xì)胞和細(xì)胞之間及基質(zhì)間的相互作用。另外，在調(diào)控腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)方面，以及生存、分化和遷移中，CD44都發(fā)揮著十分重要作用[3]。本研究結(jié)果表明，在惡性腦瘤患者中，TNF-α和CD44mRNA含量都有升高態(tài)勢(shì)，其與腫瘤的惡性程度呈正相關(guān)。進(jìn)一步提示了TNF-α和CD44高表達(dá)和腦腫瘤的惡性程度有很大關(guān)系，其具體機(jī)制還有待進(jìn)一步探究，希望本研究能夠?yàn)榕R床提供有利的診斷依據(jù)。

[1] Donaghue KC, Chiarelli F, Trotta D, et al. Microvascular and macrovascular complications associated with diabetes in children and adolescents[J]. Pediatr Diabetes,2009,10(12)：195-203.

[2] Orian-Rousseau V. CD44, a therapeutic target for metastasising tumours[J]. European J Cancer, 2010,46(7)：1271-1277.

[3] Kerbel RS. Tumor angiogenesis： past, present and thenear future[J]. Carcinogenesis, 2000,21(4)：505-515.

R739.41

A

1673-5846(2013)04-0282-02

黑龍江牡丹江醫(yī)學(xué)院紅旗醫(yī)院，黑龍江牡丹江 157011

梁紹棟（1978-），男，畢業(yè)于哈爾濱醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院，主治醫(yī)師，醫(yī)學(xué)碩士，講師，現(xiàn)工作于牡丹江醫(yī)學(xué)院附屬紅旗醫(yī)院。