復(fù)旦大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院檢驗(yàn)科，復(fù)旦大學(xué)上海醫(yī)學(xué)院腫瘤學(xué)系，上海200032

LDH-5在非霍奇金淋巴瘤診斷與療效監(jiān)測(cè)中的作用

江銘磊 陳?？?盧仁泉 郭林

復(fù)旦大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院檢驗(yàn)科，復(fù)旦大學(xué)上海醫(yī)學(xué)院腫瘤學(xué)系，上海200032

背景與目的：乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase，LDH)是糖酵解中主要的酶，能夠催化乳酸變成丙酮酸。本實(shí)驗(yàn)主要探討乳酸脫氫酶同工酶-5(lactate dehydrogenase-5，LDH-5)在非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin’s lymphoma，NHL)患者血清中的表達(dá)量及在療效監(jiān)測(cè)中的作用。方法：利用瓊脂糖凝膠電泳法，測(cè)定了105例NHL患者與185例健康對(duì)照者的血清LDH-5水平，對(duì)其中28例化療患者進(jìn)行血清LDH-5隨訪，并對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。結(jié)果：NHL患者血清LDH-5水平為(10.38±3.52)%，明顯高于健康對(duì)照者的(7.89±2.67)%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)?；熡行У腘HL患者，化療前后測(cè)定結(jié)果顯示，血清LDH-5水平呈遞減趨勢(shì)，不同療效組間的結(jié)果差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。LDH-5含量與NHL預(yù)后指標(biāo)具有相關(guān)性。結(jié)論：LDH-5在NHL診斷與療效監(jiān)測(cè)中有較好的臨床應(yīng)用價(jià)值。

乳酸脫氫酶同工酶-5；非霍奇金淋巴瘤；瓊脂糖凝膠電泳

非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin’s lymphoma，NHL)是一組異質(zhì)性的淋巴細(xì)胞異常增殖性疾病，起源于B淋巴細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞或NK細(xì)胞。NHL居新發(fā)腫瘤病例的第7位，占新發(fā)腫瘤病例的4%和腫瘤相關(guān)死亡的3%。NHL也居男性腫瘤死亡原因的第9位及女性腫瘤死亡原因的第7位［1］。近年來(lái)，惡性淋巴瘤的發(fā)病率逐年上升，成為目前發(fā)病率增長(zhǎng)最快的惡性腫瘤之一。

乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase，LDH)是糖酵解中主要的酶，能夠催化乳酸變成丙酮酸。LDH包括LDH1至LDH5共5種同工酶，由于其在體內(nèi)的分布廣泛，血清LDH總酶活力的組織特異性差，其同工酶具有一定的組織特異性。乳酸脫氫酶同工酶-5(lactate dehydrogenase-5，LDH-5)主要存在于骨骼肌中［2］，不少器官病變與惡性腫瘤中發(fā)現(xiàn)LDH-5升高，Michael等［3］的研究發(fā)現(xiàn)，NHL患者中存在LDH-5組織異常表達(dá)現(xiàn)象。2003—2010年間有多篇研究指出，LDH-5在非小細(xì)胞肺癌或其他上皮性鱗癌、頭頸部腫瘤、乳腺、腎癌及其他婦科腫瘤組織中存在異常表達(dá)［4-8］。本研究旨在評(píng)估血清LDH-5水平在NHL診斷與療效監(jiān)測(cè)方面的價(jià)值。

1 資料和方法

1.1 標(biāo)本來(lái)源及分組

收集復(fù)旦大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院2008年8月—2011年4月均經(jīng)影像學(xué)和病理學(xué)確診的NHL患者(NHL組，n=105)，其中男性49例，女性56例，平均年齡(49.44±14.58)歲；彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤68例、NK/T細(xì)胞淋巴瘤15例、濾泡性淋巴瘤12例、其他種類淋巴瘤10例。對(duì)28例采用R-CHOP或R-CEOP方案化療的標(biāo)本進(jìn)行隨訪跟蹤，每例患者留取初次化療前、初次化療后、第2、3、4次化療后(即1個(gè)療程)血清標(biāo)本各1份。根據(jù)NHL臨床實(shí)踐指南中療效標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評(píng)價(jià)，分為完全緩解(CR，n=12)、部分緩解(PR，n=14)與疾病穩(wěn)定(SD，n=2)3組。另選擇復(fù)旦大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院健康體檢者(健康對(duì)照組，n=185)，其中男性82例，女性103例，平均年齡為48.10±13.42歲，均無(wú)肝、腎、心臟等系統(tǒng)疾病。

1.2 標(biāo)本采集

采集3 mL靜脈血于促凝管，在離心速率為4 000 r/min(相對(duì)離心力3 040×g)的條件下離心10 min分離血清后，吸取血清層，按標(biāo)本收集要求分裝，置于-40 ℃冰箱中凍存待測(cè)。

1.3 儀器與試劑

使用SPIFE 3000全自動(dòng)電泳儀及與其對(duì)應(yīng)的Helena Laboratories公司LDH同工酶檢測(cè)試劑盒進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳。嚴(yán)格按照說(shuō)明書進(jìn)行掃描后在Platinum 3.0軟件進(jìn)行讀片分區(qū)，計(jì)算出血清LDH-5含量。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件處理，數(shù)據(jù)用x±s表示；兩組間比較用獨(dú)立t檢驗(yàn)；淋巴瘤患者預(yù)后隨訪LDH-5水平比較采用多元方差分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 兩組的LDH-5水平比較

將5種同工酶總量設(shè)定為100%；測(cè)定LDH5的含量的百分比。本次實(shí)驗(yàn)分析發(fā)現(xiàn)，NHL組LDH-5水平為(10.38±3.52)%，而健康對(duì)照組為(7.89±2.67)%。兩組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。

2.2 NHL患者治療前后的LDH-5水平變化

取CR和PR組26例患者首次化療前與第4次化療后LDH-5水平作比較，結(jié)果顯示，首次化療前為(9.53±1.50)%，第4次化療后為(7.36±1.80)%，配對(duì)樣本t檢驗(yàn)結(jié)果顯示，LDH-5水平治療前后差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。PR與CR組患者隨著化療次數(shù)的增多，LDH-5逐漸下降，SD組LDH-5出現(xiàn)一過(guò)性下降，隨后升高并超過(guò)最初的水平(表1)。

表 1 治療效果與LDH-5水平比較圖Tab. 1 Comparison of LDH-5 level in NHL patients with different treatment

2.3 NHL患者治療過(guò)程中監(jiān)測(cè)LDH-5水平變化

28例淋巴瘤患者預(yù)后隨訪測(cè)定LDH-5，結(jié)果顯示，CR組患者下降最多，達(dá)26.17%，其次為PR組為19.85%，SD組LDH-5水平升高至11.51%。不同組別LDH-5水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.003，圖1)。

2.4 LDH-5對(duì)于NHL患者預(yù)后分析

根據(jù)LDH水平將隨訪患者分為L(zhǎng)DH高值組(LDH＞250)與LDH正常組(LDH＜250)，比較兩組在4次化療中LDH-5水平變化。結(jié)果顯示，治療前LDH-5正常組患者治療后LDH-5水平逐漸降低，平均下降25.60%，治療前LDH-5高值組患者治療后LDH-5水平逐漸升高，平均升高4.83%(圖2)。

圖 1 不同組別患者LDH-5含量比較Fig. 1 Comparison of LDH-5 level in NHL patients with different treatment

圖 2 LDH分組患者LDH-5隨訪結(jié)果Fig. 2 Comparison of LDH-5 level in NHL patients with different LDH group

3 討 論

通過(guò)比較NHL患者與正常人群血清LDH-5水平，分別為(10.38±3.52)%和(7.89±2.67)%，可以清楚地發(fā)現(xiàn)NHL患者LDH-5水平異常增高。現(xiàn)有文獻(xiàn)均從不同方面研究證實(shí)組織學(xué)LDH-5存在增高表達(dá)，僅兩篇涉及到LDH-5血清含量變化［3,10］。本文結(jié)果提示，LDH-5與腫瘤發(fā)生、發(fā)展相關(guān)，可以作為臨床診斷治療NHL的重要標(biāo)志物。

通過(guò)對(duì)28例患者4次化療后隨訪發(fā)現(xiàn)，治療有效的NHL患者在化療中LDH-5逐漸降低，CR組下降達(dá)26.17%，PR組為19.85%；SD組LDH-5水平升高，LDH-5含量與患者疾病進(jìn)展密切相關(guān)(P＜0.05)?，F(xiàn)有參考文獻(xiàn)僅見LDH水平能夠作為鼻咽癌局部化療的預(yù)后指標(biāo)［8］，并沒有涉及到LDH-5在NHL中療效監(jiān)測(cè)方面作用。LDH-5水平變化基本與疾病進(jìn)程相符，提示其可用于輔助臨床判斷NHL化療療效檢測(cè)。在肝充血、肝炎、肝損傷、骨骼肌損傷及心肌梗死、充血性心力衰竭時(shí)，LDH-5也會(huì)升高，本研究中28例患者均經(jīng)R-CHOP或R-CEOP化療，可能在化療過(guò)程中有肝臟和心臟損傷，在選取病例同時(shí)已檢測(cè)肝、腎功能，均正常。

Federico、M.D.Anderson腫瘤中心等都將LDH列為評(píng)價(jià)淋巴瘤預(yù)后的主要指標(biāo)之一［11］。本文將LDH高值組患者歸類分析，發(fā)現(xiàn)第4次化療后LDH-5水平較治療前平均升高4.83%；而LDH水平正?；颊叩?次化療后較治療前平均下降25.60%。提示LDH高于正常值患者預(yù)后不良：隨著化療次數(shù)增加，LDH-5水平逐漸升高的患者預(yù)后也較差。

本研究主要討論血清LDH-5的水平變化，并未涉及組織標(biāo)本，所用病例數(shù)較少，結(jié)果可能有偏倚。近年來(lái)有多篇研究指出LDH-5分別在非小細(xì)胞肺癌或其他上皮性鱗癌、頭頸部腫瘤、乳腺、腎癌及婦科腫瘤的組織標(biāo)本中均存在異常增高的情況［4-8］。這些研究從組織學(xué)方面印證了血清LDH-5變化與腫瘤發(fā)生、發(fā)展顯著相關(guān)，隨著對(duì)LDH-5研究的不斷深入，其在NHL診斷與療效檢測(cè)方面的價(jià)值將進(jìn)一步被臨床肯定。

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《中國(guó)癌癥雜志》2013年征訂啟事

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The level of LDH isoenzyme in non-hodgkin lymphoma patients and its preliminary application in disease monitoring

JIANG Ming-Lei, CHEN Zhu-jun, LU Ren-quan, GUO Lin (Department of Clinical Laboratory, Fudan University Shanghai Cancer Center; Department of Oncology, Shanghai Medical College, Fudan University, Shanghai 200032, China)

GUO Lin E-mail: guolin5002002@yahoo.com

Background and purpose：Lactate dehydrogenase isoenzyme 5 (LDH5) is the main enzyme in glycolysis, which catalyze the oxidation of lactate into pyruvate. This study aimed to investigate the level of serum lactate dehydrogenase 5 (LDH-5) in non-Hodgkin’s lymphoma (NHL) patients and evaluation of LDH-5 level determination in disease curative effect monitoring. Methods：LDH-5 level of NHL patients (n=105) and healthy controls (n=185) were detected by agarose gel electrophoresis and 28 cases patients were detected and statistically analyzed. Results：The serum LDH levels were significantly higher in NHL patients (10.38±3.52)% than that in healthy controls (7.89±2.67)% (P＜0.01). The determinations after chemotherapy decreased progressively and have significant statistical difference (P＜0.05). The LDH-5 expression is significant correlated with NHL prognostic index. Conclusion：LDH-5 detection has a promising role in disease curative effect monitoring assessment of NHL.

LDH-5; Non-Hodgkin lymphoma; Agarose gel electrophoresis

R733.4

：A

：1007-3639(2013)01-0055-04

2012-08-31

2012-12-03）

郭林 E-mail:guolin5002002@yahoo.com

DOI: 10.3969/j.issn.1007-3969.2013.01.010