李小靜 唐滿華 鄧月嫦 梁榕麗 莫秋女

（廣東大華農(nóng)動(dòng)物保健品股份有限公司 廣東 新興 527400）

雞新城疫活疫苗(Lasota株)生產(chǎn)種毒的保存期試驗(yàn)

李小靜 唐滿華 鄧月嫦 梁榕麗 莫秋女

（廣東大華農(nóng)動(dòng)物保健品股份有限公司 廣東 新興 527400）

對(duì)3批置-70℃超低溫冰箱的雞新城疫(Lasota株)生產(chǎn)種毒進(jìn)行保存期試驗(yàn)，檢測(cè)結(jié)果表明，種毒在-70℃保存5年，病毒含量、免疫原性、安全性均達(dá)到規(guī)程要求，分別用該3批種毒生產(chǎn)9批雞新城疫抗原病毒含量檢測(cè)均≥108.83EID50/0.1ml，高于國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)(國(guó)標(biāo)＞107.0EID50/0.1ml)，因此雞新城疫(Lasota株)生產(chǎn)種毒在-70℃存放保存期至少為5年。

新城疫 生產(chǎn)種毒 保存期

《中華人民共和國(guó)獸用生物制品規(guī)程》(以下簡(jiǎn)稱規(guī)程)2000年版中明確規(guī)定雞新城疫低毒力活疫苗(Lasota株)生產(chǎn)種毒在-15℃以下保存，應(yīng)不超過1年，由于現(xiàn)在技術(shù)的進(jìn)步，凍存溫度可以達(dá)到更低，而生產(chǎn)種毒是生物制品生產(chǎn)的重要原材料，直接關(guān)系到產(chǎn)品質(zhì)量，因此目前絕大部分企業(yè)均是將種毒置-70℃保存，因而重新確定種毒的保存期是很必要的。現(xiàn)對(duì)2008年擴(kuò)繁制備的3批雞新城疫生產(chǎn)種毒進(jìn)行保存期試驗(yàn)。

1 材料與方法

1.1 材料 （1）雞新城疫生產(chǎn)種毒3批，由中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所凍干毒種2001.3.25于2008年根據(jù)規(guī)程制備所得。（2）新城疫北京株強(qiáng)毒2006.06，購(gòu)自中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所。（3）SPF雞胚和SPF雞由新興大華農(nóng)禽蛋有限公司SPF種蛋自行孵化所得。

1.2 方法 （1）病毒含量測(cè)定[1]：將生產(chǎn)種毒自-70℃超低溫冰箱取出，每個(gè)批號(hào)各一瓶，按規(guī)程要求，用滅菌生理鹽水進(jìn)行10倍稀釋，接種10日齡SPF雞胚，培養(yǎng)置120h，根據(jù)Reed-Muench計(jì)算EID50。2009～2013年每12個(gè)月檢測(cè)一次，觀察病毒含量變化。（2）免疫原性測(cè)定：每個(gè)批號(hào)種毒各取1瓶，用生理鹽水稀釋至5000EID50/ 0.1ml，各滴鼻1月齡SPF雞10只，0.1ml/只，同時(shí)設(shè)對(duì)照5只，隔離飼養(yǎng)14d后各肌肉注射含104ELD50的雞新城疫北京株強(qiáng)毒1ml，觀察14d。（3）安全性評(píng)價(jià)：每個(gè)批號(hào)種毒各取1瓶，用滅菌生理鹽水稀釋5倍，各滴鼻接種7日齡SPF雞10只，0.05ml/只，同時(shí)設(shè)對(duì)照雞10只，免疫組和對(duì)照組在同條件下分別飼養(yǎng)，觀察10日。（4）雞新城疫抗原生產(chǎn)及病毒含量測(cè)定：每個(gè)批號(hào)種毒各取3瓶，按規(guī)程要求制備抗原，共收獲9批檢測(cè)病毒含量。

2 結(jié)果

2.1 病毒含量 從表1可以看出，2009～2013年每12個(gè)月檢測(cè)一次種毒的病毒含量結(jié)果均高于國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，與2008年病毒含量檢測(cè)值基本一致，無明顯下降趨勢(shì)，說明種毒置-70℃保存效價(jià)穩(wěn)定。

表1 2008～2013年病毒含量測(cè)定結(jié)果 (EID50/0.1ml)

3.2 免疫原性 從表2可以看出，種毒按規(guī)程規(guī)定免疫劑量免疫SPF雞后保護(hù)率達(dá)到100%，能經(jīng)受雞新城疫北京株強(qiáng)毒攻擊，達(dá)到規(guī)程要求。

表2 2013年3批生產(chǎn)種毒免疫原性測(cè)定結(jié)果

3.3 安全性 從表3可以看出，種毒安全性評(píng)價(jià)合格，在保存過程中，毒力未出現(xiàn)增強(qiáng)等異常情況。

表3 2013年3批生產(chǎn)種毒安全性評(píng)價(jià)結(jié)果

3.4 雞新城疫抗原病毒含量 從表4可以看出，用這3批種毒制備的9批雞新城疫抗原經(jīng)檢測(cè)病毒含量明顯高于國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)。

表4 雞新城疫抗原病毒含量檢測(cè)結(jié)果 (EID50/0.1ml)

4 討論

新城疫是危害養(yǎng)雞業(yè)的重要傳染病之一，具有很高的發(fā)病率和病死率，截至目前，接種疫苗仍是預(yù)防該病的主要措施[2]。全國(guó)幾乎所有的生物制品企業(yè)都有這個(gè)產(chǎn)品，如果制備一批生產(chǎn)種毒可以使用5年，相對(duì)于每年生產(chǎn)一批種毒所花費(fèi)的人力和物力會(huì)降低很多倍，而且會(huì)降低污染外源病毒的幾率，另外頻繁的更換種毒批號(hào)，也不利于產(chǎn)品質(zhì)量的穩(wěn)定。規(guī)程規(guī)定-15℃以下保存，通常是指保存溫度在-15～20℃之間保存期為1年，此次試驗(yàn)證明，雞新城疫活疫苗(Lasota株)生產(chǎn)種毒置-70℃保存5年各項(xiàng)檢測(cè)結(jié)果仍然能達(dá)到規(guī)程要求，種毒的有效保存期至少可以是5年。

[1] 農(nóng)業(yè)部獸用生物制品規(guī)程委員會(huì),中華人民共和國(guó)獸用生物制品規(guī)程[M]. 北京: 化學(xué)工業(yè)出版社, 2000.

[2] 趙瑞宏, 張丹俊等. 不同新城疫疫苗和免疫途徑對(duì)雞新城疫HI抗體的影響[J]. 現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技, 2009(19): 303-304.

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1007-1733(2013)09-0002-02

2013–06–19）